Uusien havaitsemis- ja kvantitatiivisten kynnysarvojen määrittäminen hepatiittideltaviruksen (HDV) serologisille ja molekyylitesteille käyttämällä kapillaariverta imupaperilla (DBS) (SACADE)

Delta-hepatiittivirus (HDV) on satelliittivirus, joka vaatii hepatiitti B -viruksen (HBV) läsnäolon tartunnan saamiseksi. Noin 5 % HBV-tartunnan saaneista henkilöistä eli noin 12 miljoonaa ihmistä maailmanlaajuisesti on myös HDV:n kantajia. Tämä kaksoisinfektio lisää merkittävästi maksavaurion ja hepatosellulaarisen karsinooman (HCC) etenemisen riskiä.

Historiallisesti HDV-diagnoosi on ollut rajallinen, mikä on johtanut sen todellisen esiintyvyyden aliarvioimiseen sekä kansallisesti että kansainvälisesti. Viimeaikaiset edistysaskeleet virushepatiitin hoidoissa ja uusien HDV-spesifisten hoitomuotojen käyttöönotto ovat lisänneet kiinnostusta virusta kohtaan, mikä on saanut kansanterveysviranomaiset vaatimaan parempia diagnostiikka- ja seurantavälineitä.

HDV:n havaitsemiseen kuuluu tyypillisesti seerumin tai plasman serologiset testit (ELISA/CLIA), joita seuraa viruskuorman kvantifiointi RT-qPCR:llä, jos tulos on positiivinen. Laboratorioiden saatavuus on kuitenkin usein riittämätön monilla alueilla, mikä vaikuttaa erityisesti syrjäytyneisiin väestöryhmiin ja korkean endeemisiin alueisiin, erityisesti vähäresursseissa maissa. Tarvitaan uusia näytteenottomenetelmiä, jotka auttavat yhdistämään potilaat asiantuntijalaboratorioihin, koska pakastettujen biologisten näytteiden kuljettaminen voi olla monimutkaista ja kallista.

Vastauksena siihen, että DBS (Dried Blood Spot) -näytteenotto, jossa seerumi, plasma tai kokoveri kuivataan suodatinpaperilla, on omaksunut lukuisat kansanterveysjärjestöt yksinkertaiseksi, kustannustehokkaaksi ja tarttumattomaksi varastointi- ja kuljetusvälineeksi. . DBS on jo validoitu infektioiden, kuten HIV, HBV ja HCV, diagnosointiin ja seurantaan.

Kunkin viruksen ainutlaatuisen biologian vuoksi tarvitaan erityisiä tutkimuksia sen määrittämiseksi, kuinka DBS:n käyttö vaikuttaa kunkin laboratoriotekniikan havaitsemis- ja kvantifiointikynnyksiin. National Reference Center for Delta Hepatitis (CNR-Delta), Public Health Francen tilaama, on kehittänyt DBS-protokollan HDV:lle, joka perustuu saatavilla olevaan kirjallisuuteen ja aikaisempiin varastointiolosuhteita ja liuottamista koskeviin tutkimuksiin. Kahdessa retrospektiivisessä tutkimuksessa, joissa hyödynnettiin CNR-kokoelmia, on luotu uudet positiivisuuskynnykset serologialle ja havaitsemiselle/kvantifioinnille molekyylibiologiassa seerumin/plasman ja EDTA-kokoveren osalta DBS:ssä.

Tämän protokollan viimeistelemiseksi on välttämätöntä jatkaa DBS:n kapillaariverikokeiden kynnysten tutkimista. Sormenpistolla saatu kapillaariveri voisi yksinkertaistaa tämän työkalun käyttöä, mikä vähentää erikoislaitteiden ja asiantuntemuksen tarvetta ja mahdollistaa potilaiden itsenäytteenoton.

Tämän tutkimuksen tavoitteena on validoida DBS-työkalu HDV-serologiseen ja molekyylitestaukseen kapillaariveren avulla. Hypoteesi olettaa, että maantieteelliset esteet pääsylle sairaaloihin ja laboratorioihin HDV-potilaille vaikeuttavat pakastettujen plasmanäytteiden toimittamista, mikä lisää kustannuksia. Serologisen seulonta- ja viruskuormitustestaustekniikan kehittäminen kapillaariveripisarasta DBS-paperilla voisi tehokkaasti yhdistää potilaat erikoiskeskuksiin. Koska DBS:ää ei pidetä tarttuvana, se vähentää myös hallinnollisia komplikaatioita.

Vertaamalla EDTA-kokoveren ja kapillaariveren parinäytteiden tuloksia - plasma (kultastandardi) DBS:llä - pyrimme määrittelemään uudelleen havaitsemis- ja kvantifiointikynnykset molemmille menetelmille. Näiden uusien kynnysarvojen vahvistaminen mahdollistaa tämän työkalun käytön ja säilyttää samalla laatustandardit aktiivisten HDV-infektioiden diagnosoinnissa ja seurannassa.

Kapillaariveren etuja DBS-protokollassa ovat:

• Potilaille: Parempi hoidon saatavuus maantieteellisestä sijainnista riippumatta ja helpompi näytteenotto (itse näytteenotto).
• Kliinikoille: Yksinkertaistettu hoito ja laajennettu seulonta vaikeapääsyisille väestöryhmille.
• Laboratorioille: Pienemmät kuljetuskustannukset ja tartuntariski.
• CNR:lle: mahdollisuus tutkia maailmanlaajuista levinneisyyttä yksinkertaistetulla protokollalla.

Yhteenvetona voidaan todeta, että HDV-infektion diagnosoinnin ja seurannan "kultastandardi" sisältää seerumin tai plasman serologian, anti-HDV-vasta-aineiden kokonaistestauksen, jota seuraa viruskuorman kvantifiointi. Sen arvioimiseksi, voivatko kuivatusta kapillaariverestä tehdyt testit korvata plasma/seerumitestit, tarvitaan vertaileva tutkimus, jossa samalta potilaalta kerätään samanaikaisesti plasmanäytteitä ja pisara kapillaariverta ja testataan rinnakkain. Tämä vertailu arvioi DBS-työkalun herkkyyden ja spesifisyyden käyttämällä kapillaariverta ja määrittää uudet havaitsemis- ja kvantitatiiviset kynnykset DBS:n viruskuormitukselle.