Określanie nowych progów wykrywalności i ilościowej analizy serologicznej i molekularnej wirusa zapalenia wątroby typu Delta (HDV) przy użyciu krwi włośniczkowej na bibule (DBS) (SACADE)

Wirus zapalenia wątroby typu Delta (HDV) to wirus satelitarny, który do zakażenia wymaga obecności wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV). Około 5% osób zakażonych HBV, czyli około 12 milionów ludzi na całym świecie, jest także nosicielami wirusa HDV. Ta podwójna infekcja znacząco zwiększa ryzyko uszkodzenia wątroby i rozwoju raka wątrobowokomórkowego (HCC).

Historycznie rzecz biorąc, rozpoznawanie HDV było ograniczone, co prowadziło do niedoszacowania jego prawdziwej częstości występowania zarówno w kraju, jak i za granicą. Niedawne postępy w leczeniu wirusowego zapalenia wątroby i wprowadzenie nowych terapii specyficznych dla HDV zwiększyły zainteresowanie wirusem, co skłoniło władze odpowiedzialne za zdrowie publiczne do wezwania o ulepszone narzędzia diagnostyczne i monitorujące.

Wykrywanie wirusa HDV zazwyczaj obejmuje testy serologiczne (ELISA/CLIA) w surowicy lub osoczu, a następnie oznaczenie ilościowe wiremii za pomocą metody RT-qPCR, jeśli wynik jest pozytywny. Jednakże dostęp do laboratoriów jest często niewystarczający w wielu regionach, co dotyka szczególnie zmarginalizowane populacje i obszary o wysokim stopniu endemii, zwłaszcza w krajach o niskich zasobach. Potrzebne są nowe metody pobierania próbek, które pomogą połączyć pacjentów z specjalistycznymi laboratoriami, ponieważ transport zamrożonych próbek biologicznych może być skomplikowany i kosztowny.

W odpowiedzi wiele organizacji zajmujących się zdrowiem publicznym przyjęło pobieranie próbek suszonej krwi (DBS), podczas którego surowica, osocze lub pełna krew są suszone na bibule filtracyjnej, jako prosty, opłacalny i niezakaźny sposób przechowywania i transportu . DBS jest już zatwierdzony do diagnozowania i monitorowania infekcji, takich jak HIV, HBV i HCV.

Biorąc pod uwagę wyjątkową biologię każdego wirusa, wymagane są szczegółowe badania w celu ustalenia, w jaki sposób stosowanie DBS wpływa na progi wykrywalności i oznaczania ilościowego dla każdej techniki laboratoryjnej. Krajowe Centrum Referencyjne ds. Delta Hepatitis (CNR-Delta), na zlecenie Public Health France, opracowało protokół DBS dla HDV w oparciu o dostępną literaturę i wcześniejsze badania dotyczące warunków przechowywania i roztworów do odtwarzania. W dwóch retrospektywnych badaniach z wykorzystaniem zbiorów CNR ustalono nowe progi dodatniości w badaniach serologicznych i wykrywaniu/oznaczaniu ilościowym w biologii molekularnej dla surowicy/osocza i krwi pełnej pobranej na EDTA w DBS.

Aby sfinalizować ten protokół, niezbędne są dalsze badania progów badań krwi włośniczkowej w DBS. Krew włośniczkowa uzyskana poprzez nakłucie palca może uprościć korzystanie z tego narzędzia, zmniejszając zapotrzebowanie na specjalistyczny sprzęt i specjalistyczną wiedzę, a także potencjalnie umożliwiając pacjentom samodzielne pobieranie próbek.

Obecne badanie ma na celu walidację narzędzia DBS do badań serologicznych i molekularnych HDV z wykorzystaniem krwi włośniczkowej. Hipoteza zakłada, że ​​bariery geograficzne w dostępie pacjentów z HDV do szpitali i laboratoriów komplikują transport próbek zamrożonego osocza, zwiększając koszty. Opracowanie techniki badań przesiewowych serologicznych i badania wiremii na podstawie kropli krwi włośniczkowej na papierze DBS mogłoby skutecznie połączyć pacjentów z wyspecjalizowanymi ośrodkami. Ponieważ DBS jest uważany za niezakaźny, łagodzi również komplikacje administracyjne.

Porównując wyniki sparowanych próbek – osocza (złoty standard) z krwi pełnej na EDTA i krwi włośniczkowej w DBS – naszym celem jest ponowne zdefiniowanie progów wykrywalności i oznaczania ilościowego dla obu metod. Walidacja tych nowych progów umożliwi wykorzystanie tego narzędzia przy jednoczesnym zachowaniu standardów jakości w zakresie diagnozowania i monitorowania aktywnych infekcji HDV.

Korzyści z krwi włośniczkowej w protokole DBS obejmują:

• Dla pacjentów: Lepszy dostęp do opieki niezależnie od położenia geograficznego i łatwiejsze pobieranie próbek (samodzielne pobieranie próbek).
• Dla klinicystów: uproszczone zarządzanie i rozszerzone badania przesiewowe na trudno dostępne populacje.
• Dla laboratoriów: Mniejsze koszty transportu i ryzyko infekcji.
• Dla CNR: Możliwość badania globalnej częstości występowania za pomocą uproszczonego protokołu.

Podsumowując, „złoty standard” diagnozowania i monitorowania zakażenia HDV obejmuje badania serologiczne w surowicy lub osoczu, badanie na obecność całkowitych przeciwciał anty-HDV, a następnie oznaczenie ilościowe wiremii. Aby ocenić, czy testy z wysuszonej krwi włośniczkowej mogą zastąpić badania osocza/surowicy, konieczne jest badanie porównawcze, w którym próbki osocza i kropla krwi włośniczkowej są pobierane jednocześnie od tego samego pacjenta i badane równolegle. Porównanie to pozwoli ocenić czułość i swoistość narzędzia DBS wykorzystującego krew włośniczkową oraz ustalić nowe progi wykrywania i oznaczania ilościowego wiremii w DBS.