Bestemmelse av nye deteksjons- og kvantifiseringsterskler for serologiske og molekylære tester for hepatitt deltavirus (HDV) ved bruk av kapillærblod på tappepapir (DBS) (SACADE)

Delta-hepatittviruset (HDV) er et satellittvirus som krever tilstedeværelse av hepatitt B-virus (HBV) for infeksjon. Omtrent 5 % av HBV-infiserte individer, eller rundt 12 millioner mennesker globalt, er også bærere av HDV. Denne doble infeksjonen øker betydelig risikoen for leverskade og progresjon til hepatocellulært karsinom (HCC).

Historisk sett har diagnosen HDV vært begrenset, noe som har ført til en undervurdering av dens sanne utbredelse både nasjonalt og internasjonalt. Nylige fremskritt innen behandlinger for viral hepatitt og introduksjonen av nye HDV-spesifikke terapier har ført til økt interesse for viruset, noe som har fått offentlige helsemyndigheter til å etterlyse forbedrede diagnostiske og overvåkingsverktøy.

Påvisning av HDV involverer vanligvis serologiske tester (ELISA/CLIA) på serum eller plasma, etterfulgt av kvantifisering av viral belastning ved bruk av RT-qPCR hvis positiv. Imidlertid er laboratorietilgang ofte utilstrekkelig i mange regioner, noe som særlig påvirker marginaliserte befolkninger og høyendemiske områder, spesielt i land med lav ressurs. Nye prøveinnsamlingsmetoder som hjelper til med å koble pasienter til ekspertlaboratorier er nødvendig, siden sending av frosne biologiske prøver kan være komplisert og kostbart.

Som svar har prøvetaking av Dried Blood Spot (DBS) - der serum, plasma eller fullblod tørkes på filterpapir - blitt tatt i bruk av en rekke folkehelseorganisasjoner som et enkelt, kostnadseffektivt og ikke-smittsomt middel for lagring og transport . DBS er allerede validert for diagnostisering og overvåking av infeksjoner som HIV, HBV og HCV.

Gitt den unike biologien til hvert virus, kreves det spesifikke studier for å bestemme hvordan bruk av DBS påvirker deteksjons- og kvantifiseringsterskler for hver laboratorieteknikk. Det nasjonale referansesenteret for deltahepatitt (CNR-Delta), på oppdrag fra Public Health France, har utviklet en DBS-protokoll for HDV, basert på tilgjengelig litteratur og tidligere studier angående lagringsforhold og rekonstitueringsløsninger. To retrospektive studier med CNR-samlinger har etablert nye positivitetsterskler for serologi og deteksjon/kvantifisering i molekylærbiologi for serum/plasma og EDTA fullblod på DBS.

For å fullføre denne protokollen er ytterligere studier av terskler for kapillære blodprøver på DBS avgjørende. Kapillærblod, innhentet via fingerstikk, kan forenkle bruken av dette verktøyet, redusere behovet for spesialisert utstyr og ekspertise, og muligens muliggjøre selvprøvetaking av pasienter.

Den nåværende studien tar sikte på å validere DBS-verktøyet for HDV-serologisk og molekylær testing ved bruk av kapillærblod. Hypotesen antyder at geografiske barrierer for tilgang til sykehus og laboratorier for HDV-pasienter kompliserer frakten av frosne plasmaprøver, noe som øker kostnadene. Å utvikle en serologisk screening og testteknikk for virusbelastning fra en dråpe kapillærblod på DBS-papir kan effektivt knytte pasienter til spesialiserte sentre. Siden DBS anses som ikke-smittsom, reduserer det også administrative komplikasjoner.

Ved å sammenligne resultater fra sammenkoblede prøver - plasma (gullstandarden) fra EDTA fullblod og kapillærblod på DBS - tar vi sikte på å redefinere deteksjons- og kvantifiseringsterskler for begge metodene. Validering av disse nye tersklene vil tillate bruk av dette verktøyet samtidig som kvalitetsstandarder for diagnostisering og overvåking av aktive HDV-infeksjoner opprettholdes.

Fordelene med kapillærblodet på DBS-protokollen inkluderer:

• For pasienter: Bedre tilgang til omsorg uavhengig av geografisk plassering og enklere prøvetaking (egenprøvetaking).
• For klinikere: Forenklet håndtering og utvidet screening til vanskelig tilgjengelige populasjoner.
• For laboratorier: Reduserte transportkostnader og smittefare.
• For CNR: Muligheten til å studere global prevalens med en forenklet protokoll.

Oppsummert innebærer "gullstandarden" for diagnostisering og overvåking av HDV-infeksjon serologi på serum eller plasma, testing for totale anti-HDV-antistoffer etterfulgt av kvantifisering av viral belastning. For å vurdere om tester fra tørket kapillærblod kan erstatte plasma/serumprøver, er det nødvendig med en sammenlignende studie, hvor plasmaprøver og en dråpe kapillærblod tas samtidig fra samme pasient og testes parallelt. Denne sammenligningen vil evaluere sensitiviteten og spesifisiteten til DBS-verktøyet ved bruk av kapillærblod og etablere nye deteksjons- og kvantifiseringsterskler for viral belastning på DBS.