Определение новых порогов обнаружения и количественного определения для серологических и молекулярных тестов на вирус гепатита Дельта (HDV) с использованием капиллярной крови на промокательной бумаге (DBS) (SACADE)

Вирус гепатита Дельта (HDV) представляет собой сателлитный вирус, для заражения которого требуется присутствие вируса гепатита B (HBV). Приблизительно 5% людей, инфицированных ВГВ, или около 12 миллионов человек во всем мире, также являются носителями HDV. Эта двойная инфекция значительно повышает риск повреждения печени и прогрессирования гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК).

Исторически диагностика HDV была ограничена, что приводило к недооценке его истинной распространенности как на национальном, так и на международном уровне. Недавние достижения в лечении вирусного гепатита и внедрение новых методов лечения, специфичных для HDV, стимулировали рост интереса к вирусу, что побудило органы общественного здравоохранения потребовать улучшения инструментов диагностики и мониторинга.

Обнаружение HDV обычно включает серологические тесты (ELISA/CLIA) в сыворотке или плазме с последующей количественной оценкой вирусной нагрузки с использованием RT-qPCR в случае положительного результата. Однако во многих регионах доступ к лабораториям зачастую недостаточен, что особенно затрагивает маргинализированные группы населения и высокоэндемичные районы, особенно в странах с низкими ресурсами. Необходимы новые методы сбора проб, которые помогут пациентам обратиться в экспертные лаборатории, поскольку доставка замороженных биологических образцов может быть сложной и дорогостоящей.

В ответ на это многие организации общественного здравоохранения приняли образец высушенной капли крови (DBS), при котором сыворотка, плазма или цельная кровь высушиваются на фильтровальной бумаге, как простой, экономичный и незаразный способ хранения и транспортировки. . DBS уже одобрен для диагностики и мониторинга таких инфекций, как ВИЧ, ВГВ и ВГС.

Учитывая уникальную биологию каждого вируса, необходимы специальные исследования, чтобы определить, как использование DBS влияет на пороги обнаружения и количественного определения для каждого лабораторного метода. Национальный справочный центр по дельта-гепатиту (CNR-Delta) по заказу Министерства здравоохранения Франции разработал протокол DBS для HDV на основе доступной литературы и предыдущих исследований, касающихся условий хранения и растворов для восстановления. Два ретроспективных исследования с использованием коллекций CNR установили новые пороги положительности для серологии и обнаружения/количественного определения в молекулярной биологии для сыворотки/плазмы и цельной крови с ЭДТА на DBS.

Для завершения работы над этим протоколом необходимо дальнейшее изучение пороговых значений для анализов капиллярной крови на DBS. Капиллярная кровь, полученная путем прокола пальца, может упростить использование этого инструмента, снизив потребность в специальном оборудовании и опыте и потенциально позволяя пациентам самостоятельно брать образцы.

Настоящее исследование направлено на валидацию инструмента DBS для серологического и молекулярного тестирования HDV с использованием капиллярной крови. Гипотеза утверждает, что географические барьеры для доступа к больницам и лабораториям для пациентов с HDV усложняют доставку замороженных образцов плазмы, увеличивая затраты. Разработка метода серологического скрининга и определения вирусной нагрузки по капле капиллярной крови на бумаге DBS могла бы эффективно направить пациентов в специализированные центры. Поскольку DBS считается неинфекционным, он также смягчает административные осложнения.

Сравнивая результаты парных образцов — плазмы (золотой стандарт) цельной крови с ЭДТА и капиллярной крови на DBS — мы стремимся переопределить пороги обнаружения и количественного определения для обоих методов. Проверка этих новых пороговых значений позволит использовать этот инструмент, сохраняя при этом стандарты качества для диагностики и мониторинга активных инфекций HDV.

Преимущества капиллярной крови по протоколу DBS включают в себя:

• Для пациентов: улучшенный доступ к медицинской помощи независимо от географического местоположения и упрощение отбора проб (самостоятельный отбор проб).
• Для врачей: упрощенное ведение и расширенный скрининг для труднодоступных групп населения.
• Для лабораторий: снижение транспортных расходов и риска заражения.
• Для CNR: возможность изучить глобальную распространенность с помощью упрощенного протокола.

Таким образом, «золотой стандарт» диагностики и мониторинга инфекции HDV включает серологическое исследование сыворотки или плазмы, тестирование на общее количество антител против HDV с последующей количественной оценкой вирусной нагрузки. Чтобы оценить, могут ли тесты на высушенной капиллярной крови заменить тесты на плазму/сыворотку, необходимо сравнительное исследование, при котором образцы плазмы и капля капиллярной крови собираются одновременно у одного и того же пациента и исследуются параллельно. Это сравнение позволит оценить чувствительность и специфичность инструмента DBS с использованием капиллярной крови и установить новые пороговые значения обнаружения и количественного определения вирусной нагрузки на DBS.