Determinación de nuevos umbrales de detección y cuantificación para pruebas serológicas y moleculares del virus de la hepatitis delta (HDV) utilizando sangre capilar en papel secante (DBS) (SACADE)

El virus de la hepatitis Delta (VHD) es un virus satélite que requiere la presencia del virus de la hepatitis B (VHB) para infectarse. Aproximadamente el 5% de las personas infectadas por el VHB, o alrededor de 12 millones de personas en todo el mundo, también son portadores del VHD. Esta doble infección aumenta significativamente el riesgo de daño hepático y de progresión a carcinoma hepatocelular (CHC).

Históricamente, el diagnóstico del VHD ha sido limitado, lo que ha llevado a una subestimación de su verdadera prevalencia tanto a nivel nacional como internacional. Los recientes avances en los tratamientos para la hepatitis viral y la introducción de nuevas terapias específicas para el VHD han estimulado un mayor interés en el virus, lo que ha llevado a las autoridades de salud pública a solicitar mejores herramientas de diagnóstico y seguimiento.

La detección del VHD normalmente implica pruebas serológicas (ELISA/CLIA) en suero o plasma, seguidas de la cuantificación de la carga viral mediante RT-qPCR si es positiva. Sin embargo, el acceso a los laboratorios suele ser insuficiente en muchas regiones, lo que afecta especialmente a las poblaciones marginadas y las zonas altamente endémicas, especialmente en los países de bajos recursos. Se necesitan nuevos métodos de recolección de muestras que ayuden a conectar a los pacientes con laboratorios expertos, ya que el envío de muestras biológicas congeladas puede ser complejo y costoso.

En respuesta, numerosas organizaciones de salud pública han adoptado el muestreo por gota de sangre seca (DBS), en el que se seca suero, plasma o sangre total en papel de filtro, como un medio de almacenamiento y transporte simple, rentable y no infeccioso. . DBS ya está validado para diagnosticar y monitorear infecciones como VIH, VHB y VHC.

Dada la biología única de cada virus, se requieren estudios específicos para determinar cómo el uso de DBS afecta los umbrales de detección y cuantificación para cada técnica de laboratorio. El Centro Nacional de Referencia para la Hepatitis Delta (CNR-Delta), encargado por Public Health France, ha desarrollado un protocolo DBS para HDV, basado en la literatura disponible y estudios previos sobre las condiciones de almacenamiento y las soluciones de reconstitución. Dos estudios retrospectivos que utilizan colecciones de CNR han establecido nuevos umbrales de positividad para serología y detección/cuantificación en biología molecular para suero/plasma y sangre total con EDTA en DBS.

Para finalizar este protocolo, es esencial realizar más estudios de los umbrales para las pruebas de sangre capilar en DBS. La sangre capilar, obtenida mediante punción en el dedo, podría simplificar el uso de esta herramienta, reduciendo la necesidad de equipos especializados y experiencia, y potencialmente permitiendo que los pacientes tomen muestras por sí mismos.

El estudio actual tiene como objetivo validar la herramienta DBS para pruebas serológicas y moleculares del HDV utilizando sangre capilar. La hipótesis plantea que las barreras geográficas para el acceso de los pacientes con HDV a hospitales y laboratorios complican el envío de muestras de plasma congelado, lo que aumenta los costos. El desarrollo de una técnica de detección serológica y prueba de carga viral a partir de una gota de sangre capilar en papel DBS podría vincular eficazmente a los pacientes con centros especializados. Dado que la DBS se considera no infecciosa, también mitiga las complicaciones administrativas.

Al comparar los resultados de muestras pareadas (plasma (el estándar de oro) de sangre total con EDTA y sangre capilar en DBS), pretendemos redefinir los umbrales de detección y cuantificación para ambos métodos. La validación de estos nuevos umbrales permitirá el uso de esta herramienta manteniendo los estándares de calidad para el diagnóstico y seguimiento de las infecciones activas por VHD.

Los beneficios del protocolo de sangre capilar en DBS incluyen:

• Para los pacientes: Mejor acceso a la atención independientemente de la ubicación geográfica y muestreo más sencillo (automuestreo).
• Para los médicos: gestión simplificada y detección ampliada a poblaciones de difícil acceso.
• Para laboratorios: Reducción de costos de transporte y riesgo infeccioso.
• Para el CNR: La oportunidad de estudiar la prevalencia global con un protocolo simplificado.

En resumen, el "estándar de oro" para diagnosticar y monitorear la infección por VHD implica la serología en suero o plasma, pruebas de anticuerpos anti-VHD totales seguidas de una cuantificación de la carga viral. Para evaluar si las pruebas de sangre capilar seca pueden reemplazar las pruebas de plasma/suero, es necesario un estudio comparativo, en el que se toman simultáneamente muestras de plasma y una gota de sangre capilar del mismo paciente y se analizan en paralelo. Esta comparación evaluará la sensibilidad y especificidad de la herramienta DBS utilizando sangre capilar y establecerá nuevos umbrales de detección y cuantificación de la carga viral en DBS.