Una ricerca di Helicobacter Pylori nella vulvodinia localizzata

Sezioni successive dai blocchi di paraffina sono state preparate e colorate con Giemsa modificato. L'immunocolorazione per H. pylori è stata eseguita come descritto. In breve, le sezioni di tessuto sono state deparaffinate in xilene, reidratate attraverso concentrazioni decrescenti di alcol terminando in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) e sottoposte a pretrattamento con Proteinasi K (8 minuti). Le sezioni sono state temprate con perossidasi di idrogeno al 3%, incubate con blocco proteico per 15 minuti a temperatura ambiente e lavate in PBS. I tessuti sono stati quindi incubati con anticorpo policlonale di coniglio anti-H pylori (diluizione, 1:10; clone ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Infine, le sezioni sono state lavate in polisorbato 20 allo 0,05% in PBS, pH 7,4 e l'anticorpo legato è stato rilevato utilizzando streptavidina e anticorpo secondario biotinilato con diaminobenzidina come cromogeno. Le sezioni sono state controcolorate con ematossilina, disidratate e montate. I controlli negativi erano sezioni trattate come sopra, ma invece dell'incubazione con l'anticorpo primario, sono state incubate con albumina di siero bovino all'1% in PBS.

Le biopsie vulvari di altre sette donne senza vulvodinia localizzata sono servite come controlli sani.

I tessuti gastrici di controllo positivo e negativo per la colorazione immunoistochimica dei microrganismi H. pylori sono stati ottenuti dagli archivi del Dipartimento di Patologia.