En sökning efter Helicobacter pylori i lokaliserad Vulvodynia

Efterföljande sektioner från paraffinblocken preparerades och färgades av modifierad Giemsa. Immunfärgning för H. pylori gjordes såsom beskrivits. Kort sagt, vävnadssektioner avparaffinerades i xylen, rehydrerades genom minskande koncentrationer av alkohol som slutade i fosfatbuffrad saltlösning (PBS), och utsattes för förbehandling med Proteinas K (8 minuter). Sektionerna släcktes med 3 % väteperoxidas, inkuberades med proteinblock i 15 minuter vid rumstemperatur och tvättades i PBS. Vävnader inkuberades sedan med polyklonal kanin-anti-H pylori-antikropp (spädning, 1:10; klon ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Slutligen tvättades sektioner i 0,05 % polysorbat 20 i PBS, pH 7,4, och den bundna antikroppen detekterades med användning av streptavidin och biotinylerad sekundär antikropp med diaminobensidin som kromogen. Sektioner motfärgades med hematoxylin, dehydrerades och monterades. Negativa kontroller var sektioner som behandlades enligt ovan, men istället för inkubation med den primära antikroppen inkuberades de med 1 % bovint serumalbumin i PBS.

Vulvarbiopsier av sju andra kvinnor utan lokal vulvodyni fungerade som friska kontroller.

De positiva och negativa kontrollerna magvävnaderna för den immunhistokemiska färgen av H. pylori-mikroorganismerna erhölls från arkiven vid Institutionen för patologi.