Studio prospettico per il ruolo prognostico e predittivo delle cellule tumorali circolanti in pazienti con carcinoma a cellule squamose orofaringee: CTCO (cellule tumorali circolanti nell'orofaringe) (CTCO)

I tumori della testa e del collo (HNSCC) sono principalmente tumori a cellule squamose rappresentati da tumori del tratto aerodigestivo superiore. Gli stadi localmente avanzati (stadi III e IV) rappresentano dal 50 al 70% di tutte le presentazioni. I tre principali fattori di rischio sono il fumo, l'alcol e l'infezione orofaringea da virus del papilloma umano (HPV).

A parte lo stato HPV, non esiste alcun biomarcatore per la prognosi nei pazienti con HSNCC. Le cellule tumorali circolanti (CTC) possono fornire informazioni "in tempo reale" sul comportamento del tumore e sono già utilizzate in vari tumori (colon, polmone). La loro individuazione ha una sensibilità limitata e i biomarcatori non possono essere utilizzati per la diagnosi precoce, ma possono essere utili durante il follow-up per valutare la recidiva tumorale precoce locale, regionale o metastatica.

Utilizzando campioni di sangue in momenti diversi (alla diagnosi, dopo il trattamento iniziale e durante il follow-up), saremo in grado di misurare la variazione nella quantificazione e stabilire un ruolo predittivo di queste CTC per la risposta al trattamento.

La nostra ipotesi è che le CTC possano avere un ruolo chiave, oltre all'esame clinico e radiologico, nel rilevare una recidiva precoce del tumore.

Riteniamo che la considerazione congiunta di parametri clinici, strategia di trattamento e quantificazione delle CTC potrebbe ottimizzare il follow-up e la gestione del paziente.

Il sistema di estrazione CTC, ClearCell® FX di Biolidics, è un sistema di arricchimento microfluidico automatizzato. Ha il vantaggio di recuperare CTC completamente intatte e vitali da un campione di sangue standard. Il principio della selezione delicata consente di preservare l'integrità cellulare e quindi l'espressione degli antigeni di superficie. Le CTC così isolate possono quindi essere ricoltivate o analizzate mediante immunocolorazione. Questa tecnica ad alte prestazioni, operativa da dicembre 2017 presso il Dipartimento di Biochimica della professoressa Claire Rodriguez-Lafrasse (HCL), ha dimostrato la sua utilità nel cancro del polmone.

L'analisi trascrittomica delle CTC può essere eseguita su scala di una cellula dopo l'isolamento delle CTC. Le CTC possono quindi essere sequenziate in RNAseq alla rinfusa (pool di cellule) o cellula per cellula sul nostro sequenziatore Illumina (Nextseq), al fine di definire l'eterogeneità del tumore. L'analisi del trascrittoma fornisce quindi informazioni sullo stato della cellula rispetto alla sua posizione nella transizione epitelio-mesenchimale grazie a una firma molecolare per fenotipo. La caratterizzazione a priori è quindi possibile grazie alla singola cellula RNAseq. Questa tecnica altamente sensibile e innovativa consentirà lo studio del profilo di espressione genica delle CTC.