ビタミン D3 補給の急性効果

背景研究者らは以前に、血清25-ヒドロキシビタミンD（25（OH）D）の増加に関してUVBが無視できる季節に、健康な人に長期のビタミンD3補給を行う臨床試験を完了しました. この研究 (提出済み、未発表) では、最初の 3 週間で一時的な増加が確認されました。 個人的には、この一時的な増加は 19 人の参加者のうち 14 人に見られました。 この現象は、文献の他の場所では説明されていません。 これは、サンプリングの頻度が低いために可能になる可能性があります。

研究仮説 研究者は、この現象は実際のものであり人工物ではないという仮説を立てました。 この現象はすべての参加者に見られたわけではないため、研究者は、影響力のあるパラメーターには、性別、年齢、体重、身長、体格指数 (BMI)、週あたりの脂肪の多い魚の食事の回数、25(OH)D の開始レベル、遺伝的パラメーター (30 の色素一塩基多型 (SNP))。

研究デザイン これは、単一施設のオープンで非盲検の臨床試験です。

介入参加者は、1週間に相当する消費をカバーするのに十分なビタミンD3錠剤（コレカルシフェロール、アポビット、武田ファーマA / S、ロスキレ、デンマーク）を含むパッケージを受け取ります。 彼らは、85 マイクログラム (ug) (3400 国際単位 (IU)) に相当する 1 日あたり 1 つのビタミン D3 タブレットを消費するように指示されます。

方法論的側面

ビタミンDサプリメントの事前摂取 参加者は、研究開始の少なくとも3週間前および研究中は、ビタミンDサプリメントを使用したり、太陽の休日に参加したりしないように指示されます。

コンプライアンス錠剤は毎週カウントされ、参加者はコンプライアンスと登録された有害事象を管理するために翌週のサプリメントが与えられます。 参加者は、各血液サンプル期間の間の研究薬の摂取量の偏差を1日あたり±½錠で修正するように指示されます。 1 週間に 3 錠を超える治験薬を遵守できなかった場合は除外されます。

血液分析 血清 25(OH)D は、この分析の現在最も正確な方法である液体クロマトグラフィー タンデム質量分析計 (LC-MS/MS) で分析されます。 この方法は、別の臨床検査室と照合され、信頼性が証明されています。 血清 25(OH)D も、比較のために社内検査室で分析されます。

分析のばらつき 分析のばらつきを最小限に抑えるために、少なくとも 25(OH)D 分析のトリプレット分析 (技術的複製) を実行します。 同じ被験者からのすべての 25(OH)D サンプルが 1 つのバッチで分析されます。 25(OH)D を含む内部標準溶液を各実行で使用します。

総相対標準偏差 (SD) は、実験のばらつきを反映して、20 nmol/l で 4.9% から 222 nmol/l で 14.1% の間で変化します。

生物学的変動 参加者ごとに血清 25(OH)D の 7 つの測定時点を含めることにより、個人内変動が減少します。 血清 25(OH)D は、季節や太陽への露出によって変動することが知られています。 したがって、この研究は冬の半年の間に実施されました。この時期には、周囲の UVB 放射と太陽にさらされた体の領域は無視できます (17)。

遺伝的パラメータ SNPジェノタイピング。 合計 30 の色素 SNP が調査されます。 これらの SNP のサブグループは、ビタミン D3 補給による 25(OH)D の増加に影響を与えることが以前に示されています (論文提出済み、未発表)。

前述のように、iPLEX1 Goldキット（Agena Bioscience Inc.、ドイツ）を使用して、すべてのSNPの遺伝子型を特定しました。 5人未満の被験者を含む遺伝子型サブグループを持つSNPは、他の対立遺伝子共有サブグループとマージされました（例： GG ではなく AG を持つ遺伝子型 AA)。 対象者が 5 人未満のヘテロ接合サブグループを、25(OH)D 増加率への影響にわずかな差 (P > 0.05) を示す対立遺伝子共有サブグループと統合しました。 25(OH)Dに対する対立遺伝子用量効果または優性対立遺伝子効果のないSNPは除外されました。 優性対立遺伝子効果を持つ SNP については、25(OH)D 増加率への影響に有意差のないサブグループを、対立遺伝子共有に従ってマージしました。

参加者の選択: 資格基準 すべての参加者はデンマークに居住している必要があります。

統計上の考慮事項

無作為化 この研究の目的は生物学的現象を再現することであるため、無作為化は使用されません。 したがって、ブラインドは使用されません。

研究の規模 以前のビタミン D3 補給研究 (提出済み、未発表) によると、研究開始から研究終了までの 25(OH)D の差は、1 リットルあたり 48 ナノモル (nmol l-1) で、SD は 29 nmol l-1 でした。 . ビタミン D3 を補給したこの短い研究では、25(OH)D の検出可能な差はその半分、つまり 24 nmol l-1 であると予想されました。 5% の有意水準と 80% の検出力を考えると、13 人の参加者が必要です。 調査員は 19 人の参加者を含めることを目指しており、6 人が脱落する可能性があります。

サンプル サイズの計算は、次の Web サイトでオンラインで入手できるプログラム Power and Sample Size Calculation バージョン 3.1.2.2014 を使用して実行されました。

データ収集 すべての参加者には、研究開始前に一意の研究番号が割り当てられます。 人口統計データ（性別、年齢、体重、身長は、調査開始前に収集/測定および登録されます。 脂肪の多い魚の食事の 1 日の摂取回数をアンケートに記録しました。 すべてのフォームには、参加者固有の調査番号が付けられます。 25(OH)Dサンプルは、研究終了後に分析されます。 参加者の連絡先の詳細にリンクされている参加者の研究番号は、デンマークのデータ保護庁の規則に従って安全に保管された別のシートに保持されていました。

背景の食事と介入中の食事の変化 このパラメーターは、時間の経過に伴う 25(OH)D の増加に影響を与える可能性があるため、研究期間中、脂肪の多い魚の食事の毎日の摂取回数をアンケートに記録しました。 アンケートは、コンプライアンスを確保するためにエラーがないか調べられます。

背景の健康状態とライフスタイル、および介入中の健康状態とライフスタイルの変化 参加者の健康状態と新しい投薬の開始は、研究を通じて毎週監視されました。

有害事象 軽度の一時的な副作用は、治験薬の中止にはつながらない。 参加者は、イオン化カルシウムとアルカリホスファターゼを測定する血液サンプルで監視されます。 高カルシウム血症や腎臓結石などの有害事象は、研究からの除外につながります。

統計分析 個々のデータをコルモゴロフ-スミルノフ検定で検定し、データが正規分布しているかどうかを評価します。 通常分布のデータは、スチューデントの t 検定によってテストされます。 ウィルコクソンの符号付き順位検定を使用して、異なる時点でのイオン化カルシウム (Ca2+) レベルのペアワイズ比較を実行します。

次のモデルは個別に調査されます: 線形、逆、2 次、3 次、累乗、シグモイド、および指数。 最適なモデル (電力モデル) の決定は、R2 値と、25(OH)D の経時的な増加に関する個々の調査とグループ調査との一致に基づいて行われます。

最初に、25(OH)D 勾配に対するパラメーターの影響を個別に調べます。 個別の重要なパラメーターの影響は独立していないため、P 値に従って結合一般線形モデル (GLM) に展開された個別の重要なパラメーターを段階的に前方選択することによって、その後調査されます.25 一時的なピークの発生に対するパラメーターの影響血清中の 25(OH)D の経時変化も調査されます。

SPSS 24.0 for Windows (SPSS Inc.、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して、データを統計的に分析します。 P < 0.05 は有意と見なされます。 中間分析は実行されません。

考察と解釈 研究結果の考察と解釈には、偏りを構成する重要な研究の限界についての考察と、結果の一般化の限界についての考察が含まれます。

結論 結論のセクションは、仮説の最初の記述に直接関連し、付随するデータによって正当化されます。

研究チームの役割と責任 著者の責任は次のように規定されます。 2) 調査を実施した。 3) データの分析と解釈。 4) 原稿を準備した。 5) 最終的な内容について主要な責任を負い、6) 最終原稿を読んで承認した。 すべての著者は、この研究に関連する利益相反を報告するよう求められます。