D3-vitamiinilisän akuutti vaikutus

Taustaa Tutkijat ovat aiemmin saaneet päätökseen kliinisen kokeen pitkäaikaisella D3-vitamiinilisällä terveillä ihmisillä kauden aikana, jolloin UVB-säteily seerumin 25-hydroksi-D-vitamiinin (25(OH)D) nousun kannalta on vähäistä. Tässä tutkimuksessa (toimitettu, julkaisematon) havaittiin tilapäinen nousu kolmen ensimmäisen viikon aikana. Yksittäin tämä väliaikainen nousu havaittiin 14:llä 19 osallistujasta. Tätä ilmiötä ei ole kuvattu muualla kirjallisuudessa. Tämä voi olla mahdollista harvemman näytteenoton vuoksi.

Tutkimushypoteesi Tutkijat olettivat, että tämä ilmiö on todellinen eikä artefakti. Koska tätä ilmiötä ei esiintynyt kaikilla osallistujilla, tutkijat olettivat myös, että vaikuttavia parametreja voisivat olla sukupuoli, ikä, paino, pituus, painoindeksi (BMI), rasvaisten kala-aterioiden määrä viikossa, 25(OH)D-aloitustaso ja geneettiset parametrit (30 pigmentin yhden nukleotidin polymorfismia (SNP)).

Tutkimussuunnitelma Tämä on yksikeskus, avoin ja ei-sokkoutettu kliininen tutkimus.

Interventio Osallistujat saavat paketteja, jotka sisältävät riittävästi D3-vitamiinitabletteja (Cholecalciferol, Apovit, Takeda Pharma A/S, Roskilde, Tanska) kattamaan yhden viikon kulutuksen. Heitä neuvotaan nauttimaan yksi D3-vitamiinitabletti päivässä, joka vastaa 85 mikrogrammaa (ug) (3400 kansainvälistä yksikköä (IU)).

Metodologiset näkökohdat

Aiempi D-vitamiinilisän saanti Osallistujaa ohjeistetaan olemaan käyttämättä D-vitamiinilisää tai osallistumasta aurinkolomalle vähintään kolme viikkoa ennen tutkimuksen alkua ja tutkimuksen aikana.

Compliance-tabletit lasketaan joka viikko, jolloin osallistujalle annetaan lisäravintoa seuraavan viikon ajan noudattamisen ja rekisteröityjen haittatapahtumien valvomiseksi. Osallistujia ohjeistetaan korjaamaan poikkeamat tutkimuslääkityksen saannissa kunkin verinäytejakson välillä ± ½ tabletilla päivässä. Tutkimuslääkityksen noudattamatta jättäminen yli kolmella tabletilla viikossa johtaa poissulkemiseen.

Verianalyysi Seerumi 25(OH)D analysoidaan nestekromatografisella tandemmassaspektrometrillä (LC-MS/MS), joka on tällä hetkellä tarkin menetelmä tähän analyysiin. Tämä menetelmä on ristiintarkastettu toiseen kliiniseen laboratorioon ja se on osoittautunut luotettavaksi. Omassa laboratoriossa analysoidaan myös seerumi 25(OH)D vertailua varten.

Analyyttinen vaihtelevuus Analyysin varianssin minimoimiseksi 25(OH)D-analyysistä suoritetaan vähintään triplettianalyysit (tekniset toistot). Kaikki 25(OH)D-näytettä samasta kohteesta analysoidaan yhdessä erässä. Jokaisessa ajossa käytetään sisäistä standardiliuosta, jossa on 25(OH)D.

Suhteellinen keskihajonta (SD) vaihtelee välillä 4,9 % pitoisuudella 20 nmol/l ja 14,1 % arvolla 222 nmol/l, mikä kuvastaa kokeellista vaihtelua.

Biologinen vaihtelu Sisällyttämällä 7 mittausajankohtaa seerumin 25(OH)D:lle osallistujaa kohti, yksilöiden sisäinen vaihtelu vähenee. Seerumin 25(OH)D:n tiedetään vaihtelevan vuodenajan ja aurinkoaltistuksen mukaan. Tämä tutkimus tehtiin siksi talvipuoliskolla, jolloin ympäristön UVB-säteily ja auringolle altistuneet kehon alueet ovat tähän aikaan vuodesta mitättömiä (17).

Geneettiset parametrit SNP-genotyypitys. Yhteensä 30 pigmentti-SNP:tä tutkitaan. Näiden SNP:iden alaryhmän on aiemmin osoitettu vaikuttavan D3-vitamiinilisän aiheuttamaan 25(OH)D:n nousuun (paperi toimitettu, julkaisematon).

Kaikki SNP:t genotyypitettiin käyttämällä iPLEX1 Gold -pakkausta (Agena Bioscience Inc., Saksa), kuten aiemmin on kuvattu. SNP:t, joiden genotyyppialaryhmät sisälsivät alle viisi koehenkilöä, yhdistettiin muihin alleelijakaviin alaryhmiin (esim. genotyyppi AA AG:n kanssa eikä GG:n kanssa). Heterotsygoottialaryhmät, joissa oli alle viisi koehenkilöä, yhdistettiin alleelijaon alaryhmään, jolla oli merkityksetön (P > 0,05) ero vaikutuksessa 25(OH)D:n lisääntymisnopeuteen. SNP:t, joilla ei ollut alleeliannosvaikutusta tai hallitsevaa alleelivaikutusta 25(OH)D:hen, suljettiin pois. SNP:ille, joilla oli hallitseva alleelivaikutus, alaryhmät, joilla ei ollut merkittäviä eroja vaikutuksessa 25(OH)D:n lisääntymisnopeuteen, yhdistettiin alleelin jakamisen mukaan.

Osallistujien valinta: kelpoisuusvaatimukset Kaikkien osallistujien on asuttava Tanskassa.

Tilastolliset näkökohdat

Satunnaistaminen Satunnaistamista ei käytetä, koska tämän tutkimuksen tavoitteena on toistaa biologinen ilmiö. Sokaisua ei siksi käytetä.

Tutkimuksen koko Aiemman D3-vitamiinilisätutkimuksen (toimitettu, julkaisematon) mukaan ero 25(OH)D:ssä tutkimuksen alusta tutkimuksen loppuun oli 48 nanomoolia litraa kohti (nmol l-1) ja SD 29 nmol l-1. . Tässä lyhyemmässä D3-vitamiinilisällä tehdyssä tutkimuksessa havaittavan eron 25(OH)D:ssä odotettiin olevan puolet siitä, eli 24 nmol l-1. Kun merkitsevyystaso on 5 % ja teho 80 %, vaaditaan 13 osallistujaa. Tutkijoiden tavoitteena on saada mukaan 19 osallistujaa, mikä mahdollistaa kuusi keskeyttäjää.

Näytteen koon laskenta suoritettiin Power and Sample Size Calculation -ohjelman versiolla 3.1.2.2014, joka on saatavilla verkossa osoitteessa http://biostat.mc.vanderbilt.edu/wiki/Main/PowerSampleSize

Tiedonkeruu Kaikille osallistujille annetaan yksilöllinen tutkimusnumero ennen tutkimuksen alkamista. Väestötiedot (sukupuoli, ikä, paino ja pituus kerätään/mitataan ja rekisteröidään ennen tutkimuksen aloittamista). Päivittäin nautittujen rasvaisten kala-aterioiden määrä kirjattiin kyselyyn. Kaikki lomakkeet merkitään osallistujien yksilöllisellä tutkimusnumerolla. 25(OH)D-näytettä analysoidaan tutkimuksen päätyttyä. Osallistujan yhteystietoihin linkitetty osallistujatutkimuksen numero säilytettiin erillisessä arkissa, jota pidettiin turvallisesti ja Tanskan tietosuojaviraston määräysten mukaisesti.

Taustaruokavalio ja ruokavalion muutos intervention aikana Päivittäin nautittujen rasvaisten kala-aterioiden määrä kirjattiin kyselyyn tutkimusjakson aikana, koska tämä parametri voi mahdollisesti vaikuttaa ensisijaiseen tulosmittaan, 25(OH)D:n nousuun ajan myötä. Kyselylomakkeen virheiden varalta tarkistetaan vaatimustenmukaisuuden varmistamiseksi.

Tausta terveydentila ja elämäntavat sekä muutokset terveydentilassa ja elämäntavoissa interventiossa Osallistujien terveydentilaa ja uuden lääkityksen aloittamista seurattiin viikoittain koko tutkimuksen ajan.

Haittatapahtumat Lievät tilapäiset sivuvaikutukset eivät johda tutkimuslääkityksen keskeyttämiseen. Osallistujia seurataan verinäytteillä, jotka mittaavat ionisoitua kalsiumia ja alkalista fosfataasia. Haittatapahtumat, kuten hyperkalsemia tai munuaiskivet, johtavat tutkimuksesta poissulkemiseen.

Tilastollinen analyysi Yksittäiset tiedot testataan Kolmogorov-Smirnov-testillä sen arvioimiseksi, ovatko tiedot normaalijakautuneita. Normaalisti jakautunut data testataan Studentin t-testillä. Ionisoidun kalsiumin (Ca2+) tasojen parikohtainen vertailu eri ajankohtina suoritetaan Wilcoxon Signed Ranks -testillä.

Seuraavia malleja tutkitaan erikseen: lineaarinen, käänteinen, neliöllinen, kuutio, teho, sigmoidi ja eksponentiaalinen. Sopivimman mallin (tehomallin) määrittäminen perustuu R2-arvoihin sekä yksittäisten tutkimusten ja ryhmätutkimuksen väliseen 25(OH)D:n ajan nousun yhteensopivuuteen.

Aluksi parametrien vaikutusta 25(OH)D-kaltevuuteen tarkastellaan erikseen. Erillisten merkittävien parametrien vaikutus ei ole riippumaton, ja siksi sitä tutkitaan myöhemmin valitsemalla asteittain eteenpäin erillisiä merkittäviä parametreja, jotka on otettu käyttöön yhdistetyssä yleisessä lineaarisessa mallissa (GLM) P-arvon mukaisesti.25 Parametrien vaikutus väliaikaisen huipun esiintymiseen. seerumissa 25(OH)D ajan myötä tutkitaan myös.

Tiedot analysoidaan tilastollisesti käyttämällä SPSS 24.0 for Windows -ohjelmaa (SPSS Inc., Chicago, IL, U.S.A.). P < 0,05 katsotaan merkitseväksi. Välianalyysiä ei tehdä.

Keskustelu ja tulkinta Tutkimustulosten käsittelyssä ja tulkinnassa pohditaan tärkeitä tutkimuksen rajoituksia, jotka muodostavat harhan, sekä keskustelun tulosten yleistämisen rajoituksista.

Johtopäätökset Päätelmäosio liittyy suoraan alkuperäiseen hypoteesilausumaan ja perustellaan mukana olevilla tiedoilla.

Tutkimusryhmän roolit ja vastuut Kirjoittajien vastuualueet täsmennetään seuraavasti: 1) suunnitteli tutkimuksen; 2) suoritti tutkimuksen; 3) analysoinut ja tulkinnut aineistoa; 4) valmisteli käsikirjoituksen; 5) oli ensisijaisesti vastuussa lopullisesta sisällöstä ja 6) lukenut ja hyväksynyt lopullisen käsikirjoituksen. Kaikkia kirjoittajia pyydetään raportoimaan tähän tutkimukseen liittyvistä eturistiriidoista.