수술 후 급성 및 만성 통증에 대한 후생유전학적 영향

(i) 피험자: 제3대구치 수술을 받을 피험자 60명(이하 '사례')은 퀸 메리 병원과 프린스 필립 치과 병원에서 모집하고 수술을 받지 않을 60명, 노인 및 성별 일치 대조군을 모집합니다. 향후 3개월 이내, 지난 1년간 수술 경험이 없는 자(이하 '대조군')도 같은 병원 외래과에서 모집한다.

(ii) 방법: 각 피험자에게 연구의 목적과 내용을 설명하고 동의를 구한다. 우리 그룹이 개발한 통증 일지 설문지는 수술 전후에 각 피험자가 경험하는 통증을 평가하는 데 사용하도록 조정됩니다. 연구 인력은 환자의 혈액을 채취할 때 방문하는 동안 각 사례 피험자와 함께 통증 일지 설문지를 작성합니다.

다음 건강 질문은 피험자 모집자가 완료합니다.

SF-36: 기능적 건강 및 웰빙 점수의 8개 척도 프로필과 심리적 기반의 신체 및 정신 건강 요약 측정 HADS: 피험자의 심리적 상태 평가(불안 및 우울증)

통증 평가:

휴식 시 및 개봉 중 통증은 다음 시점에서 수치 등급 척도(NRS, 1=통증 없음, 10=가장 심한 통증)를 사용하여 평가됩니다.

1. 수술 전
2. 수술 후 4시간마다 16시간
3. 수술 후 24일, 48일, 72일에
4. 수술 1개월 후 전화 인터뷰.
5. 수술 3개월 후 전화 인터뷰. 통증이 있는 경우 신경병성 통증에 대한 질문을 받게 됩니다.

정맥 EDTA 혈액(10ml)은 수술 1시간 전, 수술 1시간 및 3시간 후에 각 케이스에서 채혈합니다. 이후 수술 후 3~5일 후 다시 내원하여 1회 더 채혈하게 되며, 혈액에서 대식세포를 분리하여 전체 세포의 절반에서 채혈 후 최대한 빨리 total RNA를 추출하게 됩니다. 나머지 세포(대식세포)는 -80oC에 보관하고 DNA 추출을 위해 일괄 처리합니다. 정맥 EDTA 혈액(20ml)은 각 대조군 피험자에게 편리한 시간과 첫 채혈 후 3~5일에 다시 채취합니다. 대조군 피험자로부터 채취한 혈액은 사례 피험자로부터 채취한 혈액과 정확히 동일한 방식으로 처리됩니다. 따라서 각각의 증례 및 대조 대상으로부터 총 4개의 샘플을 얻을 것이다.

IL-6 및 TNF-α 프로모터 영역의 크기는 전사 시작 부위의 상류 서열과 첫 번째 엑손의 일부에 걸쳐 있으며 문헌 검색을 통해 결정될 것이며 참조용 데이터베이스를 사용하여 CpG 섬이 먼저 식별될 것입니다. 프라이머 디자인(http://www.cpgislands.com/). 메틸화 분석을 위해 상업용 키트(EpiTect Plus LyseAll Bisulfite Kit, Qiagen, Hilden, Germany)를 사용합니다.

샘플은 바이설파이트 변환을 거치고 메틸화되지 않은 시토신은 탈아미노화되어 우라실을 형성합니다. 메틸화 시토신은 변하지 않고 그대로 유지됩니다. 유전자 서열의 메틸화된 시토신의 위치와 메틸화된 시토신의 양은 확립된 기술을 사용하는 파이로시퀀싱에 의해 식별되고 정량화될 것입니다. 결과는 IL-6 및 NF-ĸB의 프로모터 영역에서 % 메틸화로 표시됩니다.

참고: 파이로시퀀싱 기술은 한 번의 반응에서 최대 50개 염기쌍의 DNA 조각만 분석할 수 있습니다. CpG Island Searcher의 데이터에 따르면 % GC가 55%로 설정되었을 때 관찰된 CpG/예상 CpG는 0.65로 설정되었고 인접한 섬 사이의 간격은 100bp로 설정되었으며 CpG 섬은 IL-6 또는 TNFα 프로모터. 따라서 두 유전자의 전체 프로모터 영역의 메틸화 상태는 각 유전자에 대해 40쌍의 프라이머를 사용하여 연구할 것입니다(2kb의 프로모터 영역을 커버하기 위해). 이 접근법은 프로모터 영역과 같은 확장된 영역에서 부위별 DNA 메틸화를 결정하는 데 가장 민감하고 신뢰할 수 있기 때문에 채택됩니다.

(iii) 연구 설계: 이것은 케이스 컨트롤 연구입니다. 이 연구에 사용된 샘플은 케이스에서 수술 전과 수술 후, 그리고 일치된 시간에 컨트롤에서 채취한 전혈 샘플입니다.

검정력 계산: 정상적인 건강한 피험자의 IL-6 및 TNF-α 프로모터 영역의 DNA 메틸화 수준에 대한 데이터는 없습니다. 검정력 계산은 각 그룹의 51명의 피험자가 5% 유의 수준에서 관심 변수의 실제 차이를 탐지하기 위해 80% 검정력을 가져야 함을 나타냅니다(G*Power 소프트웨어 버전 3.1을 사용한 계산). 탈락률을 고려하여 각 그룹에 총 60명의 피험자를 모집합니다.

(iv) 데이터 처리 및 분석: 수술 전 및 수술 후 DNA 메틸화 수준의 차이를 조사하기 위해 쌍체 t-테스트(또는 비모수적 등가물)를 수행할 것입니다. Unpaired t-test는 사례와 대조군 사이의 DNA 메틸화 수준의 차이를 조사하는 데 사용됩니다. 상관 분석은 메틸화 상태와 IL-6 및 TNF-α 발현 사이의 관계를 조사하는 데 사용될 것입니다. IL-6 및 TNF-α B의 프로모터 영역, 수술 전 및 두 가지 다른 샘플링 시간에서 메틸화 상태의 변화(즉, CpG 섬의 다른 부위가 메틸화되는 경우)를 설명하기 위해 기술 통계가 사용될 것입니다. 제어 대상의 포인트.

목적 및 가능성: 이것은 IL-6 및 NF-ĸB의 프로모터 영역에서 DNA 메틸화 변화에 대한 양측 제3대구치 수술의 효과와 메틸화 상태가 유전자 발현에 미치는 영향에 대한 파일럿 탐색적 환경 후생유전학 연구입니다. 결과는 염증 유전자의 메틸화 상태가 수술 후 통증 경험에 영향을 미칠 수 있는 분자 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하고 이해를 촉진할 것입니다.