HBV Virions gebonden eiwitten

De opkomst van hepatocellulair carcinoom (HCC) heeft geleid tot een zoektocht naar een grondig begrip van de biologie van een van de belangrijkste veroorzakers ervan, het hepatitis B-virus (HBV). HBV-deeltjes verwerven via ontluikende en inkapseling van cellulaire eiwitten. Er zijn steeds meer aanwijzingen voor verschillende virale soorten dat virion-gebonden eiwitten geneigd zijn betrokken te zijn bij de replicatie-, budding/egress- of entry/release-stappen van de virale cyclus.

Het identificeren van dergelijke doelen kan ideale kandidaten opleveren voor het verkrijgen van inzicht in de afhankelijkheid van HBV van een beperkte subset van gastheereiwitten, waardoor verfijnde sets van genetisch stabiele doelen voor therapie worden verschaft. De doelstellingen van dit project zijn het opzetten van adequate voorwaarden voor robuuste en reproduceerbare zuivering van HBV-virionen in klinische monsters, gevolgd door de identificatie van hun HBV-gebonden gastheereiwitten en de karakterisering van hun functies. Proteomics-profilering van HBV-deeltjes die zijn gezuiverd uit klinische monsters zal worden bedekt met eiwitten die zijn geïdentificeerd en gekarakteriseerd in in celkweek gekweekte HBV-deeltjes, met behulp van klinische biomarker-ontdekkingscriteria. Doelwitten die in beide monstersets worden geïdentificeerd, zullen worden onderworpen aan in-vitro-onderzoeken met behulp van HBV-replicerende cellen. Conventionele biochemische en beeldvormende methoden zullen worden gebruikt om: (i) hun fysische associatie met HBV-virionen vast te stellen; (ii) de modaliteiten van hun interactie met HBV-eiwitten definiëren; (iii) ontcijferen van de topologie en subcellulaire lokalisatie van hun associatie met HBV-eiwitten en virionen; (iv) het kwantitatief beoordelen van hun functionele betrokkenheid bij het ontluiken van deeltjes, uittreden of afscheiden en besmettelijkheid. Een kandidaat die bevredigende resultaten opleverde in deze experimenten zal worden onthuld en verder worden onderzocht op het niveau van structurele biologie, in gezamenlijke onderzoeksprogramma's.