Proteínas ligadas aos vírions do HBV

O surgimento do carcinoma hepatocelular (CHC) estimulou a busca pelo conhecimento aprofundado da biologia de um de seus principais agentes causadores, o vírus da hepatite B (HBV). As partículas de HBV adquirem proteínas celulares por brotamento e encapsidação. Há evidências crescentes em várias espécies virais de que as proteínas ligadas ao vírion são propensas a estarem envolvidas nas etapas de replicação, brotamento/saída ou entrada/liberação do ciclo viral.

A identificação de tais alvos pode render candidatos ideais para obter informações sobre a dependência do HBV de um subconjunto restrito de proteínas hospedeiras, fornecendo, portanto, conjuntos refinados de alvos geneticamente estáveis ​​para terapia. Os objetivos deste projeto são estabelecer condições adequadas para a purificação robusta e reprodutível de virions HBV em amostras clínicas, seguida da identificação de suas proteínas hospedeiras ligadas ao HBV e a caracterização de suas funções. O perfil proteômico de partículas de HBV purificadas de amostras clínicas será sobreposto com proteínas identificadas e caracterizadas em partículas de HBV cultivadas em cultura de células, usando critérios de grau de descoberta de biomarcadores clínicos. Os alvos identificados em ambos os conjuntos de amostras serão submetidos a investigações in vitro usando células replicantes do HBV. Métodos bioquímicos e de imagem convencionais serão utilizados para: (i) averiguar sua associação física com vírions do HBV; (ii) definir as modalidades de sua interação com as proteínas do HBV; (iii) decifrar a topologia e localização subcelular da sua associação com as proteínas e viriões do VHB; (iv) avaliar quantitativamente o seu envolvimento funcional no brotamento, saída ou secreção de partículas e infecciosidade. Um candidato que obtiver resultados satisfatórios nesses experimentos será divulgado e investigado em nível de biologia estrutural, em programas de pesquisa colaborativa.