HBV-Virionen-gebundene Proteine

Das Auftreten des hepatozellulären Karzinoms (HCC) hat die Suche nach einem umfassenden Verständnis der Biologie eines seiner Hauptverursacher, des Hepatitis-B-Virus (HBV), ausgelöst. HBV-Partikel erwerben durch Knospung und Verkapselung zelluläre Proteine. Bei mehreren Virusarten gibt es immer mehr Hinweise darauf, dass viriongebundene Proteine ​​entweder an den Replikations-, Knospungs-/Austritts- oder Eintritts-/Freisetzungsschritten des Viruszyklus beteiligt sind.

Die Identifizierung solcher Ziele könnte ideale Kandidaten sein, um Erkenntnisse über die Abhängigkeit von HBV von einer begrenzten Untergruppe von Wirtsproteinen zu gewinnen und so verfeinerte Sätze genetisch stabiler Ziele für die Therapie bereitzustellen. Die Ziele dieses Projekts bestehen darin, angemessene Bedingungen für eine robuste und reproduzierbare Reinigung von HBV-Virionen in klinischen Proben zu schaffen, gefolgt von der Identifizierung ihrer HBV-gebundenen Wirtsproteine ​​und der Charakterisierung ihrer Funktionen. Die Proteomik-Profilierung von aus klinischen Proben gereinigten HBV-Partikeln wird mit Proteinen überlagert, die in in Zellkultur gezüchteten HBV-Partikeln identifiziert und charakterisiert werden, wobei Kriterien für die Entdeckung klinischer Biomarker verwendet werden. Die in beiden Probensätzen identifizierten Ziele werden In-vitro-Untersuchungen mit HBV-replizierenden Zellen unterzogen. Herkömmliche biochemische und bildgebende Methoden werden verwendet, um: (i) ihre physikalische Assoziation mit HBV-Virionen festzustellen; (ii) die Modalitäten ihrer Interaktion mit HBV-Proteinen definieren; (iii) die Topologie und subzelluläre Lokalisierung ihrer Assoziation mit HBV-Proteinen und Virionen zu entschlüsseln; (iv) ihre funktionelle Beteiligung an der Knospung, dem Austritt oder der Sekretion von Partikeln und der Infektiosität quantitativ zu bewerten. Ein Kandidat, der in diesen Experimenten zufriedenstellende Ergebnisse lieferte, wird bekannt gegeben und in Verbundforschungsprogrammen auf der Ebene der Strukturbiologie weiter untersucht.