Fenotypische en functionele karakterisering van menselijke B-celrespons in pemphigus (CaReLyBP)

Pemphigus is een zeldzame auto-immuunziekte die huid en slijmvliezen aantast met een geschatte incidentie van 0,7 tot 7 nieuwe gevallen per miljoen per jaar, verantwoordelijk voor niet te verwaarlozen morbiditeit en mortaliteit. Pemphigus wordt gekenmerkt door de productie van pathogene auto-antilichamen gericht tegen twee desmosomale eiwitten die betrokken zijn bij de adhesie van keratinocyten (d.w.z. desmoglein 1 en desmoglein 3). Deze antilichamen zijn verantwoordelijk voor de verstoring van desmosomen, wat leidt tot het acantholyse-fenomeen, wat resulteert in de vorming van huid- en slijmvliesblaren. Twee belangrijke klassieke subtypen van pemphigus zijn geïndividualiseerd, pemphigus vulgaris (PV) en pemphigus foliaceus (PF), waarin pathogene auto-antilichamen gericht zijn tegen desmosomale transmembraanglycoproteïnen die behoren tot de cadherinefamilie, respectievelijk desmogleïne 3 en desmogleïne 1. Zoals voor veel auto-immuunziekten, bleven hoge doses corticosteroïden (CS) lange tijd de steunpilaar van de eerstelijnsbehandeling, alleen of in combinatie met immunosuppressiva. Bij deze regimes treden echter frequente terugvallen op wanneer de CS-dosering wordt afgebouwd, wat leidt tot langdurige behandeling en het bijbehorende risico op CS-bijwerkingen.

Sinds tien jaar heeft de verbetering van de kennis van B-celactivering en overleving, evenals hun directe betrokkenheid bij auto-immuunziekten zoals pemphigus door de productie van pathogene auto-antilichamen, geleid tot de identificatie van nieuwe therapeutische doelen. Er werden nieuwe biologische therapieën ontwikkeld op basis van B-celdepletie bij ernstige auto-immuunziekten, met name bij pemphigus.

Verschillende teams hebben de veiligheid en werkzaamheid aangetoond van Rituximab, een chimeer immunoglobuline gamma-1 (IgG1) monoklonaal antilichaam (mAb) dat zich richt op het cluster van differentiatieantigeen 20 (CD20)-molecuul dat tot expressie wordt gebracht door normale B-cellen van pre-B-cellen behalve plasmacellen , bij ernstige pemphigus die ongevoelig is voor corticosteroïden en ook in de eerstelijnsbehandeling. In al deze werken waren sommigen van hen het erover eens om de kennis over B-celpopulaties die verantwoordelijk zijn voor pemphigusactiviteit te verbeteren. Bij pemphiguspatiënten bleek de B-celpopulatie te bestaan ​​uit auto-reactieve B-lymfocyten die antilichamen produceren gericht op desmogleïnes, die direct verantwoordelijk zijn voor ziekteactiviteit, en regulerende B-lymfocyten (B-reg). Na behandeling met rituximab van pemphiguspatiënten bleek klinische activiteit geassocieerd te zijn met circulerende auto-antilichamen, hoge titers en een toename van autoreactieve B-cellen, terwijl klinische remissie geassocieerd was met een verandering in B-celpopulaties, aangezien B-celrepertoire veranderd van oligoklonaal naar polyklonaal bij reconstitutie na behandeling, met een toename van onrijpe en overgangs-B-cellen die IL-10 (B-reg) produceren.

De mechanismen die leiden tot het verschijnen van autoreactieve B-cellen, de precieze rol van B-reg bij immuuntolerantie en de factoren die de onbalans veroorzaken tussen pro-auto-immuun- en regulerende immuun-B-cellen die leiden tot pemphigusactiviteit, moeten nog worden ontdekt. Net als bij andere auto-immuunziekten werden de eerste opflakkeringen en recidieven beschreven na infectieuze voorvallen. Aldus zouden infectieuze agentia onbekende mechanismen kunnen triggeren die deelnemen aan de onbalans van het immuunsysteem door de activering van eerder rustende autoreactieve B-cellen of effector B-cellen.

Polymorfonucleaire neutrofiele granulocyten (PMN) zijn de eerste responders van het immuunsysteem op bedreigingen door binnendringende micro-organismen; het uitvoeren van essentiële functies van aangeboren immuniteit bij de verdediging van de gastheer tegen een breed scala aan pathogenen, met name door fagocytose, intracellulaire afbraak en extracellulaire afgifte van antimicrobiële factoren. Sinds 2004 is aangetoond dat polynucleaire neutrale neutrofielen (PNN) neutrofielen extracellulaire vallen (NET) produceren, structuren bestaande uit gedecondenseerd chromatine ingebed met histonen, granulaire en cytoplasmatische eiwitten die microben vangen en doden. Aanvankelijk werd aangenomen dat NET ontstond na celdood (NETosis), maar NET-vorming werd ook beschreven zonder PMN-dood met mitochondriaal DNA-extrusie. NET-productie tijdens infectieuze gebeurtenissen is verantwoordelijk voor het vrijkomen van cytosolische, nucleaire en mitochondriale antigenen in de extracellulaire omgeving; deze auto-antigeenblootstelling vormt gunstige omstandigheden voor auto-immuunziekten zoals lupus erythematosus en antineutrofiele cytoplasmatische antilichaam (ANCA) vasculitis, waarvan auto-antilichaamdoelen behoren tot NET-componenten (DNA, RNA, MPO, PR3). Naast antimicrobiële werking werd een overmatige productie van NET of onvoldoende klaring van NET gevonden om weefselontsteking en overmatige weefselbeschadiging in stand te houden die bijdragen aan auto-inflammatoire en auto-immuunziekten.

Bij lupus hebben recente werken bewijzen aangetoond dat NET-componenten worden aangetroffen in immuuncomplexen die verantwoordelijk zijn voor weefselontsteking en dat zowel polyklonale activering van B-cel als geheugen-B-celactivering kan worden verkregen in aanwezigheid van immuuncomplexen die zijn afgeleid van NET.

Naast lupus toonden andere werken bewijs van NET-implicatie bij inflammatoire en auto-immuuntoestanden bij reumatoïde artritis en vasculitis van kleine bloedvaten.

De onderzoekers veronderstellen dat activering van B-cellen door NET mogelijk niet beperkt blijft tot auto-immuunziekten waarvan antilichamen zich richten op NET-componenten, zoals het geval is bij lupus (DNA, RNA, LL37), reumatoïde artritis (RA) (gecitrullineerde eiwitten) of kleine vaatvasculitis (PR3, MPO).

Het primaire doel is dus het beoordelen van de effecten op B-celactivering en de fenotypische veranderingen in de B-celpopulatie van pemphiguspatiënten na stimulatie door neutrofielen extracellulaire vallen.

Het secundaire doel is om de verkregen resultaten bij pemphiguspatiënten te vergelijken met patiënten met andere auto-immuunziekten zoals lupus, reumatoïde artritis en het syndroom van Gougerot-Sjögren.