Caratterizzazione fenotipica e funzionale della risposta delle cellule B umane nel pemfigo (CaReLyBP)

Il pemfigo è una rara malattia autoimmune che coinvolge la pelle e le mucose con un'incidenza stimata tra 0,7 e 7 nuovi casi per milione all'anno, responsabile di morbilità e mortalità non trascurabili. Il pemfigo è caratterizzato dalla produzione di autoanticorpi patogeni diretti contro due proteine ​​desmosomiali coinvolte nell'adesione dei cheratinociti (es. desmogleina 1 e desmogleina 3). Questi anticorpi sono responsabili della rottura dei desmosomi che porta al fenomeno dell'acantolisi, che si traduce nella formazione di vesciche cutanee e mucose. Sono stati individuati due principali sottotipi classici di pemfigo, il pemfigo volgare (PV) e il pemfigo foliaceo (PF), in cui gli autoanticorpi patogeni sono diretti contro le glicoproteine ​​transmembrana desmosomiali appartenenti alla famiglia delle caderine, rispettivamente desmogleina 3 e desmogleina 1. Come per molte malattie autoimmuni, alte dosi di corticosteroidi (CS) sono rimaste per lungo tempo il cardine del trattamento di prima linea, da sole o in combinazione con immunosoppressori. Tuttavia, con questi regimi, si verificano frequenti ricadute quando si riduce gradualmente il dosaggio di CS che porta a un trattamento a lungo termine e al rischio associato di effetti collaterali di CS.

Da dieci anni, il miglioramento della conoscenza dell'attivazione e della sopravvivenza delle cellule B, così come la loro implicazione diretta in malattie autoimmuni come il pemfigo attraverso la produzione di autoanticorpi patogeni, ha portato all'identificazione di nuovi bersagli terapeutici. Nuove terapie biologiche basate sulla deplezione delle cellule B sono state sviluppate in gravi malattie autoimmuni, in particolare nel pemfigo.

Diversi team hanno dimostrato la sicurezza e l'efficacia di Rituximab, un anticorpo monoclonale chimerico immunoglobulina gamma-1(IgG1) (mAb) che prende di mira il cluster della molecola dell'antigene di differenziazione 20(CD20) espressa dalle cellule B normali dalle cellule pre-B ad eccezione delle plasmacellule , nel pemfigo grave refrattario ai corticosteroidi così come nel trattamento di prima linea. Attraverso questi lavori, alcuni di essi hanno contribuito a migliorare le conoscenze sulle popolazioni di cellule B responsabili dell'attività del pemfigo. Nei pazienti con pemfigo, è stato dimostrato che la popolazione di cellule B comprende linfociti B autoreattivi che producono anticorpi diretti contro le desmogleine, direttamente responsabili dell'attività della malattia, e linfociti B regolatori (B-reg). Dopo il trattamento con rituximab di pazienti affetti da pemfigo, è stato dimostrato che l'attività clinica era associata a titoli elevati di autoanticorpi circolanti e ad un aumento delle cellule B autoreattive, mentre la remissione clinica era associata a un cambiamento nelle popolazioni di cellule B, come repertorio di cellule B cambiato da oligoclonale a policlonale durante la ricostituzione dopo il trattamento, con un aumento delle cellule B immature e di transizione che producono IL-10 (B-reg).

Restano da scoprire i meccanismi che portano alla comparsa di cellule B autoreattive, il ruolo preciso di B-reg nella tolleranza immunitaria e i fattori che innescano lo squilibrio tra cellule B immunitarie pro autoimmuni e regolatorie che portano all'attività del pemfigo. Come per altre malattie autoimmuni, sono state descritte prime riacutizzazioni e ricadute a seguito di eventi infettivi. Pertanto, gli agenti infettivi potrebbero innescare meccanismi sconosciuti che partecipano allo squilibrio del sistema immunitario mediante l'attivazione di cellule B auto-reattive precedentemente quiescenti o cellule B effettrici.

I granulociti neutrofili polimorfonucleati (PMN) sono i primi soccorritori del sistema immunitario alle minacce di microrganismi invasori; svolgere funzioni essenziali dell'immunità innata nella difesa dell'ospite contro un'ampia gamma di agenti patogeni, in particolare mediante fagocitosi, degradazione intracellulare e scarica extracellulare di fattori antimicrobici. Dal 2004, è stato dimostrato che i neutrofili neutri polinucleari (PNN) producono trappole extracellulari di neutrofili (NET), strutture costituite da cromatina decondensata incorporata con istoni, proteine ​​granulari e citoplasmatiche che intrappolano e uccidono i microbi. Inizialmente si considerava che i NET si verificassero dopo la morte cellulare (NETosis), ma la formazione di NET è stata descritta anche senza morte di PMN con estrusione del DNA mitocondriale. La produzione di NET durante eventi infettivi è responsabile del rilascio di antigeni citosolici, nucleari e mitocondriali nell'ambiente extracellulare; questa esposizione all'auto-antigene costituisce condizioni favorevoli per malattie autoimmuni come il lupus eritematoso e la vasculite da anticorpi citoplasmatici antineutrofili (ANCA), i cui bersagli autoanticorpi appartengono a componenti NET (DNA, RNA, MPO, PR3). Oltre alla funzione antimicrobica, è stato riscontrato che un'eccessiva produzione di NET o una clearance insufficiente di NET mantengono l'infiammazione dei tessuti e danni ai tessuti eccessivi che contribuiscono alle malattie autoinfiammatorie e autoimmuni.

Nel lupus, lavori recenti hanno dimostrato che i componenti NET si trovano negli immunocomplessi responsabili dell'infiammazione dei tessuti e che l'attivazione policlonale delle cellule B e l'attivazione delle cellule B di memoria potrebbero essere ottenute in presenza di immunocomplessi derivati ​​dai NET.

Oltre al lupus, altri lavori hanno dimostrato l'implicazione della NET negli stati infiammatori e autoimmuni nell'artrite reumatoide e nella vasculite dei piccoli vasi.

I ricercatori ipotizzano che l'attivazione delle cellule B da parte del NET potrebbe non essere limitata alle malattie autoimmuni i cui anticorpi prendono di mira i componenti del NET, come nel caso del lupus (DNA, RNA, LL37), dell'artrite reumatoide (RA) (proteine ​​citrullinate) o del piccolo vasculite vasale (PR3, MPO).

Pertanto, l'obiettivo principale è valutare gli effetti sull'attivazione delle cellule B e sui cambiamenti fenotipici nella popolazione di cellule B da pazienti affetti da pemfigo dopo la stimolazione da trappole extracellulari di neutrofili.

Lo scopo secondario è confrontare i risultati ottenuti nei pazienti con pemfigo con pazienti con altre malattie autoimmuni come il lupus, l'artrite reumatoide e la sindrome di Gougerot-Sjögren.