Fenotypowa i funkcjonalna charakterystyka odpowiedzi ludzkich komórek B w pęcherzycy (CaReLyBP)

Pęcherzyca jest rzadką chorobą autoimmunologiczną obejmującą skórę i błony śluzowe, z częstością występowania szacowaną na 0,7 do 7 nowych przypadków na milion rocznie, odpowiedzialną za znaczną chorobowość i śmiertelność. Pęcherzyca charakteryzuje się wytwarzaniem chorobotwórczych autoprzeciwciał skierowanych przeciwko dwóm białkom desmosomalnym zaangażowanym w adhezję keratynocytów (tj. desmogleina 1 i desmogleina 3). Przeciwciała te są odpowiedzialne za rozerwanie desmosomów prowadzące do zjawiska akantolizy, w wyniku którego powstają pęcherze na skórze i błonach śluzowych. Zindywidualizowano dwa główne klasyczne podtypy pęcherzycy, pęcherzycę zwykłą (PV) i pęcherzycę liściastą (PF), w których patogenne autoprzeciwciała są skierowane odpowiednio przeciwko desmosomalnym transbłonowym glikoproteinom należącym odpowiednio do rodziny kadheryny, desmogleinie 3 i desmogleinie 1. Podobnie jak w przypadku wielu chorób autoimmunologicznych, wysokie dawki kortykosteroidów (CS) pozostawały przez długi czas podstawą leczenia pierwszego rzutu, samodzielnie lub w połączeniu z lekami immunosupresyjnymi. Jednak w tych schematach częste nawroty występują, gdy zmniejsza się dawkę kortykosteroidów, co prowadzi do długotrwałego leczenia i związanego z tym ryzyka działań niepożądanych kortykosteroidów.

Od dziesięciu lat poprawa wiedzy na temat aktywacji i przeżycia limfocytów B, a także ich bezpośredniego wpływu na choroby autoimmunologiczne, takie jak pęcherzyca, poprzez produkcję patogennych autoprzeciwciał, doprowadziła do identyfikacji nowych celów terapeutycznych. Opracowano nowe terapie biologiczne oparte na usuwaniu limfocytów B w ciężkich chorobach autoimmunologicznych, zwłaszcza w pęcherzycy.

Kilka zespołów wykazało bezpieczeństwo i skuteczność rytuksymabu, chimerycznego przeciwciała monoklonalnego (mAb) immunoglobuliny gamma-1 (IgG1), ukierunkowanego na klaster cząsteczki antygenu różnicowania 20 (CD20), wyrażanego przez normalne komórki B z komórek pre-B, z wyjątkiem komórek plazmatycznych , w ciężkiej pęcherzycy opornej na kortykosteroidy oraz w pierwszej linii leczenia. Niektóre z tych prac przyczyniły się do poszerzenia wiedzy na temat populacji komórek B odpowiedzialnych za aktywność pęcherzycy. Wykazano, że u pacjentów z pęcherzycą populacja limfocytów B obejmuje autoreaktywne limfocyty B wytwarzające przeciwciała ukierunkowane na desmogleiny, bezpośrednio odpowiedzialne za aktywność choroby, oraz regulatorowe limfocyty B (B-reg). Wykazano, że po leczeniu rytuksymabem pacjentów z pęcherzycą aktywność kliniczna była związana z wysokim mianem krążących autoprzeciwciał i wzrostem liczby autoreaktywnych komórek B, podczas gdy remisja kliniczna była związana ze zmianą populacji komórek B, ponieważ repertuar komórek B zmienił się z oligoklonalnego na poliklonalny podczas odtwarzania po leczeniu, ze wzrostem niedojrzałych i przejściowych komórek B wytwarzających IL-10 (B-reg).

Mechanizmy prowadzące do pojawienia się autoreaktywnych limfocytów B, dokładna rola B-reg w tolerancji immunologicznej oraz czynniki wywołujące brak równowagi między proautoimmunologicznymi i regulatorowymi limfocytami B prowadzącymi do aktywności pęcherzycy pozostają do odkrycia. Podobnie jak w przypadku innych chorób autoimmunologicznych, pierwsze zaostrzenia i nawroty opisano po zdarzeniach infekcyjnych. Zatem czynniki zakaźne mogą wyzwalać nieznane mechanizmy uczestniczące w nierównowadze układu odpornościowego poprzez aktywację wcześniej nieaktywnych autoreaktywnych komórek B lub efektorowych komórek B.

Granulocyty polimorfojądrowe neutrofili (PMN) są pierwszymi komórkami odpowiedzi układu odpornościowego na zagrożenia ze strony inwazyjnych mikroorganizmów; pełnienie podstawowych funkcji odporności wrodzonej w obronie gospodarza przed szeroką gamą patogenów, w szczególności poprzez fagocytozę, degradację wewnątrzkomórkową i zewnątrzkomórkowe uwalnianie czynników przeciwdrobnoustrojowych. Od 2004 roku wykazano, że wielojądrzaste neutralne neutrofile (PNN) wytwarzają zewnątrzkomórkowe pułapki neutrofili (NET), struktury składające się ze zdekondensowanej chromatyny osadzonej w histonach, ziarnistych i cytoplazmatycznych białkach, które wychwytują i zabijają drobnoustroje. Początkowo uważano, że NET powstają po śmierci komórki (NETosis), ale tworzenie NET opisano również bez śmierci PMN z ekstruzją mitochondrialnego DNA. Produkcja NET podczas zdarzeń zakaźnych jest odpowiedzialna za uwalnianie antygenów cytozolowych, jądrowych i mitochondrialnych w środowisku zewnątrzkomórkowym; ta ekspozycja na autoantygeny stwarza korzystne warunki dla chorób autoimmunologicznych, takich jak toczeń rumieniowaty i zapalenie naczyń przeciwko przeciwciałom przeciwko cytoplazmie neutrofili (ANCA), których docelowe autoprzeciwciała należą do składników NET (DNA, RNA, MPO, PR3). Oprócz działania przeciwdrobnoustrojowego stwierdzono, że nadmierna produkcja NET lub niewystarczający klirens NET sprzyjają podtrzymywaniu stanu zapalnego tkanek i nadmiernym uszkodzeniom tkanek, które przyczyniają się do chorób autozapalnych i autoimmunologicznych.

W przypadku tocznia ostatnie prace wykazały dowody na to, że składniki NET znajdują się w kompleksach immunologicznych odpowiedzialnych za zapalenie tkanek oraz że poliklonalną aktywację komórek B, jak również aktywację komórek B pamięci, można uzyskać w obecności kompleksów immunologicznych pochodzących z NET.

Oprócz tocznia, inne prace wykazały dowody implikacji NET w stanach zapalnych i autoimmunologicznych w reumatoidalnym zapaleniu stawów i zapaleniu naczyń małych naczyń.

Badacze wysuwają hipotezę, że aktywacja komórek B przez NET może nie ograniczać się do chorób autoimmunologicznych, których przeciwciała atakują składniki NET, jak ma to miejsce w przypadku tocznia (DNA, RNA, LL37), reumatoidalnego zapalenia stawów (RZS) (cytrulinowane białka) lub małych zapalenie naczyń (PR3, MPO).

Zatem głównym celem jest ocena wpływu na aktywację komórek B i zmiany fenotypowe w populacji komórek B od pacjentów z pęcherzycą po stymulacji przez zewnątrzkomórkowe pułapki neutrofili.

Celem drugorzędnym jest porównanie wyników uzyskanych u pacjentów z pęcherzycą do pacjentów z innymi chorobami autoimmunologicznymi, takimi jak toczeń rumieniowaty, reumatoidalne zapalenie stawów i zespół Gougerota-Sjögrena.