Caracterização Fenotípica e Funcional da Resposta de Células B Humanas no Pênfigo (CaReLyBP)

O pênfigo é uma doença autoimune rara envolvendo pele e mucosas com incidência estimada em 0,7 a 7 novos casos por milhão por ano, responsável por morbidade e mortalidade não desprezíveis. O pênfigo é caracterizado pela produção de autoanticorpos patogênicos direcionados contra duas proteínas desmossômicas envolvidas na adesão de queratinócitos (i.e. desmogleína 1 e desmogleína 3). Esses anticorpos são responsáveis ​​pelo rompimento dos desmossomos levando ao fenômeno de acantólise, que resulta na formação de bolhas na pele e mucosas. Dois principais subtipos clássicos de pênfigo foram individualizados, pênfigo vulgar (PV) e pênfigo foliáceo (PF), nos quais autoanticorpos patogênicos são direcionados contra glicoproteínas transmembrana desmossômicas pertencentes à família das caderinas, desmogleína 3 e desmogleína 1, respectivamente. Como para muitas doenças autoimunes, altas doses de corticosteroides (CS) permaneceram por muito tempo como o tratamento de primeira linha, isoladamente ou em conjunto com imunossupressores. No entanto, nesses regimes, ocorrem recaídas frequentes ao diminuir a dosagem de CS, levando a um tratamento de longo prazo e seu risco associado de efeitos colaterais de CS.

Há dez anos, o aprimoramento no conhecimento da ativação e sobrevida das células B, bem como sua implicação direta em doenças autoimunes como o pênfigo por meio da produção de autoanticorpos patogênicos, levou à identificação de novos alvos terapêuticos. Novas terapias biológicas baseadas na depleção de células B foram desenvolvidas em doenças autoimunes graves, notadamente no pênfigo.

Várias equipes demonstraram a segurança e a eficácia do Rituximab, um anticorpo monoclonal quimérico de imunoglobulina gama-1 (IgG1) (mAb) direcionado ao grupo de moléculas do antígeno de diferenciação 20 (CD20) expresso por células B normais de células pré-B, exceto células plasmáticas , em pênfigo grave refratário a corticosteróides, bem como em primeira linha de tratamento. Através desses trabalhos, alguns deles concorreram para melhorar o conhecimento sobre as populações de células B responsáveis ​​pela atividade do pênfigo. Em pacientes com pênfigo, foi demonstrado que a população de células B compreende linfócitos B auto-reativos produtores de anticorpos direcionados às desmogleínas, diretamente responsáveis ​​pela atividade da doença, e linfócitos B reguladores (B-reg). Após o tratamento com rituximabe de pacientes com pênfigo, a atividade clínica mostrou-se associada a altos títulos de autoanticorpos circulantes e um aumento de células B autorreativas, enquanto a remissão clínica foi associada a uma mudança nas populações de células B, como repertório de células B mudou de oligoclonal para policlonal ao se reconstituir após o tratamento, com aumento de células B imaturas e transicionais produtoras de IL-10 (B-reg).

Os mecanismos que levam ao aparecimento de células B autorreativas, o papel preciso do B-reg na tolerância imunológica e os fatores que desencadeiam o desequilíbrio entre células B imunes pró-imunes e reguladoras que levam à atividade do pênfigo ainda precisam ser descobertos. Quanto a outras doenças autoimunes, foram descritas primeiras crises e recaídas após eventos infecciosos. Assim, agentes infecciosos podem desencadear mecanismos desconhecidos que participam do desequilíbrio do sistema imunológico pela ativação de células B auto-reativas anteriormente quiescentes ou células B efetoras.

Os granulócitos neutrófilos polimorfonucleares (PMN) são os primeiros a responder do sistema imunológico a ameaças por microorganismos invasores; desempenhando funções essenciais da imunidade inata na defesa do hospedeiro contra uma ampla gama de patógenos, principalmente por fagocitose, degradação intracelular e descarga extracelular de fatores antimicrobianos. Desde 2004, os Neutrófilos Polinucleares Neutros (PNN) demonstraram produzir armadilhas extracelulares de neutrófilos (NET), estruturas que consistem em cromatina descondensada incorporada com histonas, proteínas granulares e citoplasmáticas que capturam e matam micróbios. NET foram inicialmente considerados como surgindo após a morte celular (NETosis), mas a formação de NET também foi descrita sem morte de PMN com extrusão de DNA mitocondrial. A produção de NET durante eventos infecciosos é responsável pela liberação de antígenos citosólicos, nucleares e mitocondriais no meio extracelular; esta exposição de autoantígenos constitui condições favoráveis ​​para doenças autoimunes, como lúpus eritematoso e vasculite Anticorpo citoplasmático de neutrófilos (ANCA), cujos alvos de autoanticorpos pertencem a componentes NET (DNA, RNA, MPO, PR3). Além da função antimicrobiana, foi encontrada uma produção excessiva de NET ou depuração insuficiente de NET para manter a inflamação tecidual e danos teciduais excessivos que contribuem para doenças autoinflamatórias e autoimunes.

No lúpus, trabalhos recentes demonstraram evidências de que os componentes da NET são encontrados em imunocomplexos responsáveis ​​pela inflamação tecidual e que a ativação policlonal de células B, bem como a ativação de células B de memória, podem ser obtidas na presença de imunocomplexos derivados da NET.

Além do lúpus, outros trabalhos mostraram evidências da implicação do TNE em estados inflamatórios e autoimunes na artrite reumatóide e vasculite de pequenos vasos.

Os pesquisadores levantam a hipótese de que a ativação de células B por NET pode não estar restrita a doenças autoimunes nas quais os anticorpos têm como alvo os componentes NET, como é o caso do lúpus (DNA, RNA, LL37), artrite reumatoide (AR) (proteínas citrulinadas) ou pequenas vasculite vascular (PR3, MPO).

Assim, o objetivo principal é avaliar os efeitos na ativação de células B e as alterações fenotípicas na população de células B de pacientes com pênfigo após estimulação por armadilhas extracelulares de neutrófilos.

O objetivo secundário é comparar os resultados obtidos em pacientes com pênfigo com pacientes com outras doenças autoimunes, como lúpus, artrite reumatóide e síndrome de Gougerot-Sjögren.