Integrinen en protocadherinen in glutamaterge circuits: identificatie van gemeenschappelijke signaalroutes en moleculaire doelen bij angst en depressieve stoornissen (GAPsy) (GAPsy)

Het onderzoek is opgebouwd uit twee delen. In het eerste deel zullen de onderzoekers 10 patiënten met MDD-AD en 10 HC rekruteren, volgens de inclusie- en exclusiecriteria. Elke deelnemer wordt geëvalueerd door een team van ervaren psychologen en clinici, die gestructureerde klinische interviews afnemen om de aan-/afwezigheid van psychiatrische stoornissen uit as I en II (SCID-I en SCID-II) te beoordelen (eerste bezoek). Bovendien zal bij alle proefpersonen de mate van depressieve/manische dysintomatologie worden gemeten door het gebruik van klinische schalen en psychopathologische tests zoals: de Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D), de Montgomery-Asberg Depression Rating Scale (MADRS), de Hamilton Anxiety Rating Scale (HAM-A) en de Brief Psychiatric Rating Scale (BPRS) (tweede bezoek; binnen een week na het eerste screeningsbezoek). Bovendien zullen aanvullende klinische gegevens worden geëxtrapoleerd uit medische dossiers en interviews met psychiaters (indien beschikbaar).

De onderzoekers zullen ook de geschiktheid van elke deelnemer evalueren om de multimodale acquisitie van Magnetic Resonance Imaging (MRI) -gegevens te ondergaan met een 7T GE-scanner. De neuroimaging-sessie, uitgevoerd tijdens het derde bezoek (binnen een maand na het tweede bezoek), omvat:

• T1-gewogen beeldacquisitie: om de volumetrische verschillen van witte en grijze stof tussen proefpersonen in het prefrontale-limbische pad te bestuderen.
• fMRI: om functionele verbindingen tussen prefrontale cortex en limbisch systeem te beoordelen.
• 1H-MRS: om glutamatergische neurotransmissie in de voorste cingulaat en de dorsolaterale prefrontale cortex te bestuderen.

De sequenties zullen worden geoptimaliseerd dankzij de 32-kanaals hersenspoel (NovaMedical), om artefacten en inhomogeniteiten in beelden te verminderen.

Het tweede deel van de studie zal muizenmodellen omvatten. Meer specifiek, om te beoordelen of Pcdh9-tekorten het aantal en de morfologie van excitatoire synapsen beïnvloeden, zullen elektronenmicroscopische analyses worden uitgevoerd in Pcdh9-knock-out muizen. Glutamaterge signalering zal ook op biochemisch niveau worden bestudeerd: de expressieniveaus van alle belangrijke glutamaatreceptorsubeenheden (ionotroop en metabotroop) zullen worden onderzocht door corticale eiwitlysaten (totale lysaten) te analyseren bij volwassen muizen (3-4 maanden). Om fijnere veranderingen in de glutamaatreceptorexpressie te identificeren, zal bovendien hun intracellulaire en oppervlakte-expressie worden geanalyseerd met behulp van de BS3-crosslinking-assay.

De onderzoekers zullen ook doorgaan met de karakterisering van de interactie tussen integrine β3 en Protocadherin9 met behulp van co-immunoprecipitatieanalyse uit muizenhersenen: bij positieve resultaten (minstens 3 replicaties) zal verdere analyse worden uitgevoerd om te onderzoeken of de twee eiwitten direct binden. .

Elektrofysiologische karakterisering van Itgb3- en Pcdh9-muispatronen in de mediale prefrontale cortex op zowel synaptisch als lokaal netwerkniveau zal ook worden uitgevoerd en, ten slotte, zal een evaluatie worden uitgevoerd van functioneel herstel van gedrags- en elektrofysiologische tekorten gemedieerd door CRISPRa. In dit geval zullen experimenten met muizenmodellen worden uitgevoerd om te bepalen of overexpressie van integrine β3 of protocadherine9 defecten in synaptische glutamatergische transmissie veroorzaakt door tekortkomingen in CAM's zou kunnen compenseren.