Integrinas y protocadherinas en circuitos glutamatérgicos: identificación de vías de señalización comunes y objetivos moleculares en la ansiedad y los trastornos depresivos mayores (GAPsy) (GAPsy)

El estudio se estructura en dos partes. En la primera parte los investigadores reclutarán a 10 pacientes con MDD-AD y 10 HC, siguiendo los criterios de inclusión y exclusión. Cada participante será evaluado por un equipo de psicólogos y médicos experimentados, que administrarán entrevistas clínicas estructuradas para evaluar la presencia/ausencia de trastornos psiquiátricos de los ejes I y II (SCID-I y SCID-II) (primera visita). Además, en todas las materias se medirá el grado de disintomatología depresiva/maníaca mediante el uso de escalas clínicas y pruebas psicopatológicas como: la Escala de Calificación de Depresión de Hamilton (HAM-D), la Escala de calificación de Depresión de Montgomery-Asberg (MADRS), la Escala de calificación de ansiedad de Hamilton (HAM-A) y Escala breve de calificación psiquiátrica (BPRS) (segunda visita; dentro de una semana de la primera visita de selección). Además, se extrapolarán datos clínicos adicionales de registros médicos y entrevistas con psiquiatras (si están disponibles).

Los investigadores también evaluarán la idoneidad de cada participante para someterse a la adquisición multimodal de datos de imágenes de resonancia magnética (MRI) con un escáner 7T GE. La sesión de neuroimagen, realizada durante la tercera visita (dentro del mes posterior a la segunda visita) incluirá:

• Adquisición de imágenes ponderadas en T1: para estudiar las diferencias volumétricas de la materia blanca y gris entre sujetos en la vía prefrontal-límbica.
• RMf: para evaluar las conexiones funcionales entre la corteza prefrontal y el sistema límbico.
• 1H-MRS: para estudiar la neurotransmisión glutamatérgica dentro de la corteza cingulada anterior y prefrontal dorsolateral.

Las secuencias se optimizarán gracias a la bobina cerebral de 32 canales (NovaMedical), para reducir artefactos e inhomogeneidades en las imágenes.

La segunda parte del estudio involucrará modelos murinos. Más específicamente, para evaluar si los déficits de Pcdh9 afectan el número y la morfología de las sinapsis excitadoras, se realizarán análisis de microscopía electrónica en ratones knockout para Pcdh9. La señalización glutamatérgica también se estudiará a nivel bioquímico: se investigarán los niveles de expresión de todas las subunidades principales del receptor de glutamato (ionotrópicas y metabotrópicas) analizando lisados ​​de proteínas corticales (lisados ​​totales) en ratones adultos (3-4 meses). Además, para identificar cambios más finos en la expresión del receptor de glutamato, se analizará su expresión intracelular y de superficie mediante el ensayo de reticulación BS3.

Los investigadores también procederán a la caracterización de la interacción entre la integrina β3 y la protocadherina9 mediante análisis de co-inmunoprecipitación del cerebro de ratón: en caso de resultados positivos (al menos 3 réplicas), se realizarán análisis adicionales para estudiar si las dos proteínas se unen directamente .

También se realizará la caracterización electrofisiológica de los patrones murinos Itgb3 y Pcdh9 en la corteza prefrontal medial tanto a nivel sináptico como de red local y, por último, se realizará una evaluación de la recuperación funcional de déficits conductuales y electrofisiológicos mediados por CRISPRa. En este caso, se realizarán experimentos en modelos murinos para determinar si la sobreexpresión de la integrina β3 o la protocadherina9 podría compensar los defectos en la transmisión glutamatérgica sináptica causados ​​por deficiencias en las CAM.