Integriner og protocadheriner i glutamaterge kredsløb: Identifikation af almindelige signalveje og molekylære mål i angst og svære depressive lidelser (GAPsy) (GAPsy)

Undersøgelsen er opbygget i to dele. I den første del vil efterforskerne rekruttere 10 patienter med MDD-AD og 10 HC, efter inklusions- og eksklusionskriterierne. Hver deltager vil blive evalueret af et team af erfarne psykologer og klinikere, der administrerer strukturerede kliniske interviews for at vurdere tilstedeværelsen/fraværet af akse I og II psykiatriske lidelser (SCID-I og SCID-II) (første besøg). Desuden vil graden af ​​depressiv/manisk dysintomatologi i alle fag blive målt ved brug af kliniske skalaer og psykopatologiske tests såsom: Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D), Montgomery-Asberg Depression Rating Scale (MADRS), Hamilton Anxiety Rating Scale (HAM-A) og Brief Psychiatric Rating Scale (BPRS) (andet besøg; inden for en uge efter det første screeningsbesøg). Yderligere kliniske data vil desuden blive ekstrapoleret fra lægejournaler og interviews med psykiatere (hvis tilgængelige).

Efterforskerne vil også evaluere hver enkelt deltagers egnethed til at gennemgå den multimodale erhvervelse af magnetisk resonansbilleddannelse (MRI) data med en 7T GE scanner. Den neuroimaging-session, der udføres under det tredje besøg (inden for en måned efter det andet besøg), vil omfatte:

• T1-vægtet billedopsamling: at studere de volumetriske forskelle mellem hvidt og gråt stof mellem emner i den præfrontale-limbiske vej.
• fMRI: at vurdere funktionelle forbindelser mellem præfrontal cortex og limbisk system.
• 1H-MRS: at studere glutamaterg neurotransmission i den forreste cingulate og dorsolaterale præfrontale cortex.

Sekvenserne vil blive optimeret takket være 32-kanals hjernespolen (NovaMedical), for at reducere artefakter og inhomogeniteter i billeder.

Den anden del af undersøgelsen vil involvere murine modeller. Mere specifikt, for at vurdere om Pcdh9-underskud påvirker antallet og morfologien af ​​excitatoriske synapser, vil der blive udført elektronmikroskopiske analyser i Pcdh9-knockout-mus. Glutamatergisk signalering vil også blive undersøgt på det biokemiske niveau: ekspressionsniveauerne af alle større glutamatreceptorunderenheder (ionotrope og metabotrope) vil blive undersøgt ved at analysere kortikale proteinlysater (totale lysater) i voksne mus (3-4 måneder). For at identificere finere ændringer i glutamatreceptorekspression vil deres intracellulære og overfladeekspression desuden blive analyseret ved hjælp af BS3 tværbindingsassayet.

Forskerne vil også fortsætte med karakteriseringen af ​​interaktionen mellem integrin β3 og Protocadherin9 ved hjælp af co-immunpræcipitationsanalyse fra musehjerne: i tilfælde af positive resultater (mindst 3 replikater), vil der blive udført yderligere analyse for at undersøge, om de to proteiner binder direkte .

Elektrofysiologisk karakterisering af Itgb3 og Pcdh9 murine mønstre i den mediale præfrontale cortex på både synaptiske og lokale netværksniveauer vil også blive udført, og endelig vil en evaluering af funktionel genopretning af adfærdsmæssige og elektrofysiologiske mangler medieret af CRISPRa blive udført. I dette tilfælde vil der blive udført eksperimenter på murine modeller for at bestemme, om overekspression af integrin β3 eller protocadherin9 kunne kompensere for defekter i synaptisk glutamatergisk transmission forårsaget af mangler i CAM'er.