Integriner och protocadheriner i glutamaterga kretsar: Identifiering av vanliga signalvägar och molekylära mål vid ångest och allvarliga depressiva sjukdomar (GAPsy) (GAPsy)

Studien är uppbyggd i två delar. I den första delen kommer utredarna att rekrytera 10 patienter med MDD-AD och 10 HC, enligt inklusions- och exkluderingskriterierna. Varje deltagare kommer att utvärderas av ett team av erfarna psykologer och kliniker, som administrerar strukturerade kliniska intervjuer för att bedöma närvaron/frånvaron av psykiatriska störningar i axel I och II (SCID-I och SCID-II) (första besöket). Vidare, i alla ämnen kommer graden av depressiv/manisk dysintomatologi att mätas genom användning av kliniska skalor och psykopatologiska tester såsom: Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D), Montgomery-Asberg Depression Rating Scale (MADRS), Hamilton Anxiety Rating Scale (HAM-A) och Brief Psychiatric Rating Scale (BPRS) (andra besöket, inom en vecka efter det första screeningbesöket). Dessutom kommer ytterligare kliniska data att extrapoleras från medicinska journaler och intervjuer med psykiatriker (om tillgängligt).

Utredarna kommer också att utvärdera varje deltagares lämplighet att genomgå det multimodala förvärvet av Magnetic Resonance Imaging (MRI) data med en 7T GE-skanner. Den neuroavbildande sessionen, som utförs under det tredje besöket (inom en månad efter det andra besöket) kommer att omfatta:

• T1-viktad bildinsamling: att studera de volymetriska skillnaderna mellan vit och grå substans mellan försökspersoner i den prefrontala-limbiska vägen.
• fMRI: för att bedöma funktionella samband mellan prefrontal cortex och limbiska systemet.
• 1H-MRS: att studera glutamaterg neurotransmission inom den främre cingulate och dorsolaterala prefrontala cortex.

Sekvenserna kommer att optimeras tack vare 32-kanals hjärnspolen (NovaMedical), för att minska artefakter och inhomogeniteter i bilder.

Den andra delen av studien kommer att involvera murina modeller. Mer specifikt, för att bedöma om Pcdh9-underskott påverkar antalet och morfologin av excitatoriska synapser, kommer elektronmikroskopiska analyser att utföras i Pcdh9-knockout-möss. Glutamatergisk signalering kommer också att studeras på biokemisk nivå: expressionsnivåerna för alla större glutamatreceptorsubenheter (jonotropa och metabotropa) kommer att undersökas genom att analysera kortikala proteinlysat (totala lysat) hos vuxna möss (3-4 månader). Dessutom, för att identifiera finare förändringar i glutamatreceptoruttryck, kommer deras intracellulära uttryck och ytuttryck att analyseras med hjälp av tvärbindningsanalysen BS3.

Utredarna kommer också att fortsätta med karaktäriseringen av interaktionen mellan integrin β3 och Protocadherin9 med hjälp av samimmunoprecipitationsanalys från mushjärna: vid positiva resultat (minst 3 replikat) kommer ytterligare analys att genomföras för att studera om de två proteinerna binder direkt .

Elektrofysiologisk karakterisering av Itgb3 och Pcdh9 murina mönster i den mediala prefrontala cortex på både synaptiska och lokala nätverksnivåer kommer också att utföras och slutligen kommer en utvärdering av funktionell återhämtning av beteendemässiga och elektrofysiologiska brister som medieras av CRISPRa att genomföras. I det här fallet kommer experiment på murina modeller att utföras för att avgöra om överuttryck av integrin β3 eller protocadherin9 skulle kunna kompensera för defekter i synaptisk glutamatergisk överföring orsakad av brister i CAM.