Bloedvlek- en urinemetabolomische screening toegepast op zeldzame ziekten (BUSARD)

ONTWERP VAN HET KLINISCHE ONDERZOEK

Interventioneel multicenteronderzoek waarbij gebruik wordt gemaakt van massaspectrometrie met hoge resolutie toegepast op gedroogde bloedvlekken en urinemonsters, waardoor metabolomische gegevens worden gegenereerd.

Het onderzoek start met het opzetten van een biobank volgens groepsbeschrijving.

De monsters (gedroogde bloedvlekken (DBS) en urinemonsters voor elke proefpersoon) zullen worden verzameld in de respectievelijke co-onderzoekercentra, voordat ze worden verzonden naar de centrale biobank van Cliniques universitaires Saint Luc (CUSL). DBS mag bij kamertemperatuur worden bewaard (droog en beschermd tegen licht) als het binnen 2 weken na monstername naar CUSL wordt verzonden.

De bemonsteringsprocedure, die in elk co-onderzoekscentrum plaatsvindt, omvat de volgende volgorde:

• Informatie over het onderzoek (toelichting door de onderzoeker of zijn/haar afgevaardigde)
• Verzameling van formulieren voor geïnformeerde toestemming voor deelname, inclusief opt-in/out
• Overeenkomst van meervoudige bemonstering op een ander tijdstip (alleen voor groepen II en III)
• Er wordt een vertrouwelijke medische vragenlijst/CRF verzameld (verkort formulier voor proefpersonen in de Groep 1-controle)
• DBS en urinemonsters. Onderwerpen waarvoor alleen neonatale DBS beschikbaar is, worden ook geaccepteerd.

De identiteit en deelname van de proefpersonen aan het experiment zullen strikt vertrouwelijk blijven in overeenstemming met de Europese Algemene Verordening Gegevensbescherming van 27 april 2016 (van toepassing sinds 25 mei 2018), de Belgische wet van 30 juli 2018 betreffende de bescherming van privacy met betrekking tot de verwerking van persoonsgegevens, evenals de wet van 22 augustus 2002 betreffende de rechten van de patiënt. Persoonlijke gegevens worden gecodeerd. Proefpersonen zullen niet bij naam of op een andere herkenbare manier worden geïdentificeerd in de documenten, resultaten of publicaties die verband houden met het experiment.

De onderzoekers van het onderzoek zullen de potentiële proefpersonen identificeren die aan de geschiktheidscriteria lijken te voldoen.

De arts of afgevaardigde zal het onderzoek uitleggen. Vervolgens wordt, als de proefpersoon en/of de ouders daarmee instemmen, de geïnformeerde toestemming vóór elke monstername ondertekend.

Voor één enkel geïnformeerde toestemmingsformulier (ICF) zijn meerdere monsternemingen op verschillende tijdstippen toegestaan.

De co-onderzoekerscentra zullen tijdelijk gepseudonimiseerde monsters bewaren en periodiek de verzamelde monsters (ingevroren) naar het CUSL-laboratorium sturen (voor biobanking). De monsters worden voor en na de analyse bij -80°C opgeslagen in de CUSL-biobank. Het tijdstip van ontvangst en overdracht bij -80°C bij CUSL wordt vastgelegd in REDCAP.

Later zal het genereren van datasets die representatief zijn voor het metaboloom in DBS en urinemonsters door middel van vloeistofchromatografie gekoppeld aan hoge resolutie massaspectrometrie (LC-MS-q-TOF) analyse.

De metabolomics-analyse door LC-MS-q-TOF zal een SYNAPT-XS-instrument van Waters gebruiken. Verschillende kolommen zullen worden gebruikt in negatieve en positieve elektrospray-acquisitiemodi, waardoor complementaire metabolomische datasets kunnen worden gegenereerd die enkele duizenden kenmerken bevatten, variërend van exacte massa (m/z) (inclusief spectra na energiebotsing) en retentietijdmetingen. Kwaliteitscontroles en samengevoegde monsters zullen bij elke batch run tijdens het metabolomics-onderzoek worden geanalyseerd.

Na data-analyse met behulp van progenesis QI, Unifi en R-pakket voor metabolomics-analyse, zullen de resultaten worden besproken en gedeeld met de medeonderzoekers en zullen de verwachte resultaten hopelijk worden gepubliceerd in een peer-reviewed tijdschrift. Indien nodig (d.w.z. om genetisch een ongebruikelijk metabolomisch profiel of een secundaire bevinding te bevestigen) en als de toestemming van de patiënt is verkregen, aanvullend biochemisch onderzoek op initiële DBS- en/of urinemonsters; en genetische tests van de DBS zullen worden uitgevoerd, na overleg en overeenstemming met de medeonderzoekers van het onderzoek. Indien nodig (d.w.z. als biochemisch en/of genetisch een nieuwe diagnose wordt vermoed), worden de proefpersonen gecontacteerd na toestemming van de medeonderzoekers van het onderzoek.

De monsters die nodig zijn voor dit onderzoek zullen worden verdeeld in 3 hoofdgroepen die hieronder worden beschreven, elk onderverdeeld volgens leeftijdscategorieën; de eerste groep is de belangrijkste gezonde groep (Groep 1) die het mogelijk maakt een referentie-metabolomische database te genereren. De twee andere groepen komen overeen met groepen patiënten met pathologieën waarvan de diagnose bevestigd is (groep 2) of vermoed wordt (groep 3).

Totaal verwacht: 3366 proefpersonen

• 30 voor technische optimalisatie (aanvullend op DBS en urine worden ook volbloedbuisjes afgenomen)
• 1080 resterend menselijk lichaamsmateriaal (RHBM) van screeningscentra voor pasgeborenen (groep 1)
• 1056 bedieningselementen (groep 1)
• 1200 patiënten (groepen 2 en 3)

Het minimumaantal monsters dat nodig is om een ​​referentie-interval te genereren met behulp van een niet-parametrische methode is 120 monsters volgens de CLSI28-A3C-richtlijnen (zie ook Y Ozarda et Al. Klinische chemie en laboratoriumgeneeskunde 2018, deel 57, nummer 1). Daarom stelden de onderzoekers zich ten doel om minimaal 120 monsters per leeftijdscategorie te verzamelen. De monsters zullen eerlijk worden verdeeld per geslacht, seizoen en deelnemende centra (dus geografische herkomst). Voor de categorieën pasgeborenen zal het beoogde aantal controlemonsters groter zijn, omdat er gemakkelijker een groot aantal controlemonsters beschikbaar is met behulp van geanonimiseerde restmonsters van screeningscentra voor pasgeborenen. Aan de andere kant worden er geen urinemonsters verzameld voor proefpersonen in de categorieën pasgeborenen.

Groep 2 omvat personen met een bekende pathologie waarvan de diagnose wordt bevestigd door een genetische test (genetische variant(en) die als pathogeen of waarschijnlijk pathogeen wordt beschouwd volgens de classificatie van het American College of Human Genetics) of een biochemische referentietest die verband houdt met een typisch klinisch kenmerk. Voor autismespectrumstoornissen moeten gerekruteerde patiënten worden geïncludeerd volgens de Diagnostic and Statistical Manual (DSM) V-classificatie. Subgroepen worden gedefinieerd op basis van de pathologie die elk individu treft (classificatie volgens het aangetaste gen, de wijze van overerving en het type mutatie); de primaire doelpathologieën die in aanmerking worden genomen zijn genetische stofwisselingsziekten, maar ook andere zeldzame ziekten en autismespectrumstoornissen zijn het doelwit.

Groep 3 omvat personen bij wie een zeldzame ziekte wordt vermoed op basis van de klinische gegevens, maar die niet is bevestigd (inclusief patiënten voor wie de genetische en biochemische tests nog gaande zijn of geen uitsluitsel geven). Als de status van een individu vóór het einde van het onderzoek verandert na de bevestiging van een diagnose die anoniem is gecommuniceerd door de wervende medeonderzoeker (als gevolg van onafhankelijk verkregen resultaten buiten het onderzoek) of als gevolg van de resultaten van het onderzoek (specifieke biomarkers en/of of scoring en/of genetische bevestiging met behulp van tweedelijnstests) zal de proefpersoon vervolgens worden overgebracht naar de overeenkomstige groep 2. Deze patiënten zullen in alle deelnemende centra worden gerekruteerd.