Blutflecken- und Urin-Stoffwechselscreening bei seltenen Krankheiten (BUSARD)

DESIGN DER KLINISCHEN UNTERSUCHUNG

Interventionelle multizentrische Studie mit hochauflösender Massenspektrometrie, die auf getrocknete Blutflecken und Urinproben angewendet wird und metabolomische Daten generiert.

Die Studie beginnt mit dem Aufbau einer Biobank entsprechend der Gruppenbeschreibung.

Die Proben (getrocknete Blutflecken (DBS) und Urinproben für jeden Probanden) werden in den jeweiligen Co-Ermittlerzentren gesammelt, bevor sie an die zentrale Biobank der Cliniques universitaires Saint Luc (CUSL) versandt werden. DBS dürfen bei Raumtemperatur (trocken und vor Licht geschützt) aufbewahrt werden, wenn sie innerhalb von 2 Wochen nach der Probenahme an CUSL versandt werden.

Das Probenahmeverfahren, das in jedem gemeinsam untersuchenden Zentrum durchgeführt wird, umfasst in der folgenden Reihenfolge:

• Informationen zur Studie (Erläuterungen des Prüfers oder seines Stellvertreters)
• Sammlung von Einverständniserklärungen zur Teilnahme, einschließlich Opt-In/Out
• Vereinbarung einer Mehrfachbeprobung zu einem anderen Zeitpunkt (nur für Gruppen II und III)
• Es wird ein vertraulicher medizinischer Fragebogen/CRF erhoben (reduzierte Form für Probanden in der Gruppe 1-Kontrolle).
• DBS- und Urinprobenahme. Es werden auch Probanden akzeptiert, für die nur Neugeborenen-DBS verfügbar ist.

Die Identität und Teilnahme der Probanden am Experiment werden gemäß der europäischen Datenschutz-Grundverordnung vom 27. April 2016 (in Anwendung seit 25. Mai 2018) und dem belgischen Gesetz vom 30. Juli 2018 zum Schutz von streng vertraulich behandelt Datenschutz bei der Verarbeitung personenbezogener Daten sowie das Gesetz vom 22. August 2002 über die Rechte der Patienten. Persönliche Daten werden verschlüsselt. Die Probanden werden in den Aufzeichnungen, Ergebnissen oder Veröffentlichungen im Zusammenhang mit dem Experiment nicht namentlich oder auf andere erkennbare Weise identifiziert.

Die Forscher der Studie werden die potenziellen Probanden identifizieren, die die Zulassungskriterien zu erfüllen scheinen.

Der Arzt oder Delegierte wird die Studie erläutern. Wenn der Proband und/oder die Eltern dann zustimmen, wird die Einverständniserklärung vor jeder Probenahme unterzeichnet.

Für ein einzelnes Einverständnisformular (ICF) sind Mehrfachproben zu unterschiedlichen Zeitpunkten zulässig.

Die Co-Ermittlerzentren bewahren vorübergehend pseudonymisierte Proben auf und senden die gesammelten Proben (eingefroren) regelmäßig an das CUSL-Labor (zur Biobanking). Die Proben werden vor und nach der Analyse bei -80 °C in der CUSL-Biobank gelagert. Der Zeitpunkt des Empfangs und der Übertragung bei -80 °C an der CUSL wird in REDCAP aufgezeichnet.

Später wird die Generierung von Datensätzen durchgeführt, die das Metabolom in DBS- und Urinproben durch Flüssigkeitschromatographie in Verbindung mit hochauflösender Massenspektrometrie (LC-MS-q-TOF)-Analyse darstellen.

Für die Metabolomics-Analyse mittels LC-MS-q-TOF wird ein SYNAPT-XS-Gerät von Waters verwendet. Mehrere Spalten werden im negativen und positiven Elektrospray-Erfassungsmodus verwendet und ermöglichen die Generierung komplementärer metabolomischer Datensätze mit mehreren Tausend Merkmalen, die nach exakter Masse (m/z) (einschließlich Spektren nach Energiekollision) und Retentionszeitmessungen geordnet sind. Qualitätskontrollen und gepoolte Proben werden bei jeder Laufcharge während der Metabolomics-Studie analysiert.

Nach der Datenanalyse unter Verwendung von Progenesis QI, Unifi und R-Paket für die Metabolomik-Analyse werden die Ergebnisse mit den Co-Forschern diskutiert und geteilt und die erwarteten Ergebnisse werden hoffentlich in einer von Experten begutachteten Zeitschrift veröffentlicht. Bei Bedarf (z. B. zur genetischen Bestätigung eines ungewöhnlichen metabolischen Profils oder eines Sekundärbefundes) und wenn die Zustimmung des Patienten eingeholt wird, ergänzende biochemische Tests an anfänglichen DBS- und/oder Urinproben; und Gentests des DBS werden nach Absprache und Vereinbarung mit den Co-Ermittlern der Studie durchgeführt. Bei Bedarf (d. h. bei biochemischem und/oder genetischem Verdacht auf eine neue Diagnose) werden die Probanden nach Zustimmung der Co-Untersucher der Studie kontaktiert.

Die für diese Studie benötigten Proben werden in die drei unten aufgeführten Hauptgruppen eingeteilt, die jeweils nach Alterskategorien unterteilt sind. Die erste Gruppe ist die wichtigste gesunde Gruppe (Gruppe 1), die die Erstellung einer Referenz-Metabolomdatenbank ermöglicht. Die beiden anderen Gruppen entsprechen Gruppen von Patienten mit Pathologien, deren Diagnose entweder bestätigt (Gruppe 2) oder vermutet (Gruppe 3) ist.

Insgesamt erwartet: 3366 Probanden

• 30 für technische Optimierung (zusätzlich zu DBS und Urin werden auch Vollblutröhrchen beprobt)
• 1080 restliches menschliches Körpermaterial (RHBM) aus Neugeborenen-Screening-Zentren (Gruppe 1)
• 1056 Kontrollen (Gruppe 1)
• 1200 Patienten (Gruppen 2 und 3)

Die Mindestanzahl an Proben, die zur Generierung eines Referenzintervalls mit einer nichtparametrischen Methode erforderlich sind, beträgt 120 Proben gemäß den CLSI28-A3C-Richtlinien (siehe auch Y Ozarda et Al. Klinische Chemie und Labormedizin 2018, Band 57, Ausgabe 1). Daher haben die Forscher das Ziel festgelegt, mindestens 120 Proben pro Alterskategorie zu sammeln. Die Proben werden gleichmäßig nach Geschlecht, Jahreszeit und teilnehmenden Zentren (also geografischer Herkunft) verteilt. Für die Neugeborenenkategorien wird die angestrebte Anzahl an Kontrollproben größer sein, da eine große Anzahl von Kontrollproben mithilfe anonymisierter Restproben aus Neugeborenen-Screening-Zentren leichter verfügbar ist. Andererseits werden keine Urinproben von Probanden der Neugeborenenkategorie gesammelt.

Zu Gruppe 2 gehören Personen mit einer bekannten Pathologie, deren Diagnose durch einen Gentest (genetische Variante(n), die gemäß der Klassifizierung des American College of Human Genetics als pathogen oder wahrscheinlich pathogen gelten) oder einen biochemischen Referenztest im Zusammenhang mit einem typischen klinischen Merkmal bestätigt wird. Bei Autismus-Spektrum-Störungen sollten rekrutierte Patienten gemäß der V-Klassifizierung des Diagnostic and Statistical Manual (DSM) einbezogen werden. Untergruppen werden entsprechend der Pathologie definiert, die jedes Individuum betrifft (Klassifizierung nach dem betroffenen Gen, der Art der Vererbung und der Art der Mutation); Die in erster Linie in Betracht gezogenen Zielpathologien sind genetisch bedingte Stoffwechselerkrankungen, aber auch andere seltene Krankheiten und Autismus-Spektrum-Störungen werden ins Visier genommen.

Zu Gruppe 3 gehören Personen, bei denen aufgrund der klinischen Daten der Verdacht auf eine seltene Erkrankung besteht, diese aber nicht bestätigt wurden (einschließlich Patienten, bei denen die genetischen und biochemischen Tests noch im Gange sind oder noch keine eindeutigen Ergebnisse vorliegen). Ändert sich der Status einer Person vor dem Ende der Studie nach der Bestätigung einer vom rekrutierenden Co-Prüfer anonym mitgeteilten Diagnose (aufgrund unabhängig außerhalb der Studie gewonnener Ergebnisse) oder aufgrund der Ergebnisse der Studie (spezifische Biomarker und/oder oder Bewertung und/oder genetische Bestätigung mittels Tests der zweiten Stufe) wird das Subjekt dann in die entsprechende Gruppe 2 übertragen. Diese Patienten werden in allen teilnehmenden Zentren rekrutiert.