Fase I/II-forsøk med infusjonsbasert gemcitabin i kombinasjon med karboplatin i kjemonaivt ikke-småcellet karsinom

Mål med studiet:

1. å sammenligne responsraten for karboplatin og konstanthastighetsinfusjon av gemcitabin med responsraten for gemcitabin gitt i standard 30-minutters infusjon
2. å sammenligne toksisitetsopplevelsen i begge armer
3. For å sammenligne tiden til progresjon i begge studiearmer og total overlevelse

4. For å sammenligne livskvaliteten på begge studiearmene ved å bruke EORTC QLQ-C30 og QLQ-LC13.

   Inklusjonskriterier

   • Histologisk eller cytologisk bekreftet NSCLC.
   • Trinn IIIB uegnet for radikal stråling (f.eks. med cytologisk påvist malign effusjon) eller stadium IV sykdom som definert av AJCC-kriteriene (se vedlegg 1).
   • Karnofsky ytelsesstatus 70 % eller høyere (se vedlegg 2).
   • Tilstedeværelse av minst én todimensjonalt eller endimensjonalt målbar, ikke-CNS, indikatorlesjon definert ved radiologisk undersøkelse eller fysisk undersøkelse.
   • Ingen tidligere kjemoterapi for avansert sykdom. Tidligere neoadjuvant eller adjuvant kjemoterapi, eller kjemoterapi gitt samtidig med strålebehandling for ikke-metastatisk sykdom, er tillatt dersom siste dose ble gitt 6 måneder eller mer før studiestart.
   • Pasienter med tilbakevendende sykdom etter primæroperasjon og/eller strålebehandling vil være kvalifisert.
   • For pasienter med tidligere strålebehandling må indikatorlesjonen(e) ikke være innenfor tidligere strålefelt. Siste dose strålebehandling bør være minst 3 uker før studiestart. Den totale strålebehandlingen som mottas bør ikke være mer enn 30 % av benmargen.
   • Screening laboratoriekriterier:

   WBC-tall > 3500/mikrol nøytrofiler > 2000/mikrol Blodplateantall > 100 000/mikrol Hemoglobin > 9 g/dl (transfusjon tillatt)

   Serumkreatinin < 133 mikromol/l, eller kreatininclearance > 30 ml/min, basert på Cockcroft-formelen (se pkt. 5.1.1)

   Bilirubin < 1,5 x øvre grense for normal ALAT/ASAT < 2 x øvre normalgrense hvis levermetastaser er fraværende < 5 x øvre normalgrense hvis levermetastaser er tilstede

   • 18 år og oppover.
   • Forventet levealder > 3 måneder.
   • Skriftlig informert samtykke.

   4.2 Eksklusjonskriterier

   Følgende forhold vil gjøre pasienter ute av stand til å delta i denne studien:

   • Pasienter med kun evaluerbar sykdom.
   • Aktiv ukontrollert infeksjon.
   • Gravide eller ammende kvinner.
   • Kvinner i fertil alder som ikke er villige til å unngå graviditet, så lenge studien varer.
   • Tilstedeværelse av underliggende medisinske tilstander som etter etterforskernes mening ville gjøre pasienten uegnet for behandling.
   • Samtidige maligniteter eller tidligere maligniteter andre enn NSCLC i løpet av de siste 5 årene, med unntak av adekvat behandlet basal- eller plateepitelkarsinom i huden, karsinom-in-situ i livmorhalsen eller lavgradig prostatakreft i stadium A.
   • Pasienter med CNS og/eller leptomeningeale metastaser; med mindre asymptomatisk og ikke får kortikosteroidbehandling.

   4.3 Inklusjons- og eksklusjonskriterier for fase I-pasienter

   Ekskluderingskriteriene er de samme som ovenfor.

   Inklusjonskriteriene er de samme som ovenfor bortsett fra følgende grupper av pasienter, som er tillatt i fase I-studien:

   • Pasienter med kun evaluerbar sykdom (uten målbare lesjoner).
   • Pasienter med én (og bare én) linje med kjemoterapi for avansert NSCLC, unntatt pasienter som tidligere hadde fått platinium og/eller gemcitabin.
   • Pasienter med indikatorlesjoner i tidligere strålefelt.

   Målbarhet av indikatorlesjoner

   • Målbar: Lesjonen kan måles nøyaktig i minst én dimensjon (lengste diameter som skal registreres) som > 20 mm med konvensjonelle teknikker eller som > 10 mm med spiral CT-skanning.
   • Ikke-målbare: Alle andre lesjoner inkludert små lesjoner (lengste diameter <20 mm med konvensjonelle teknikker eller < 10 mm med spiral CT-skanning) og virkelig ikke-målbare lesjoner. Lesjoner som anses å være virkelig ikke-målbare inkluderer følgende: beinlesjoner, leptomeningeal sykdom, ascites, pleural/cutis/pulmonis, abdominalmasser som ikke er bekreftet og etterfulgt av bildeteknikker, og cystiske lesjoner.
   • Mållesjoner: Alle målbare lesjoner opp til maksimalt 5 lesjoner per organ og totalt 10 lesjoner som representerer alle involverte organer, bør identifiseres som mållesjoner og registreres og måles ved baseline. Mållesjoner bør velges på grunnlag av deres størrelse (lesjon med lengst diameter) og deres egnethet for nøyaktige målinger (enten ved hjelp av bildeteknikker eller klinisk). En sum av den lengste diameteren (LD) for alle mållesjoner vil bli beregnet og rapportert som baseline sum LD. Grunnlinjesummen LD brukes som referanse for å karakterisere den objektive tumorresponsen. Hvis det er > 10 målbare lesjoner, vil de som ikke er valgt som mållesjoner bli vurdert sammen med ikke-målbar sykdom som ikke-mållesjoner.
   • Ikke-mållesjoner: Alle ikke-målbare lesjoner (eller sykdomssteder) pluss eventuelle målbare lesjoner utover de 10 som er oppført som mållesjoner. Målinger er ikke nødvendig, men disse lesjonene bør noteres ved baseline og bør følges som "tilstede" eller "fraværende".
   • Enhver svulstmåling som utelukkende er avhengig av fysisk undersøkelse bør verifiseres av en annen lege.
   • Den samme bildediagnostiske metoden må brukes gjennom hele studien for å evaluere lesjonene.

5. BEHANDLINGSPLAN

   5.1 Fase I studie

   5.1.1 Karboplatin

   Startdosen av karboplatin gis i en fast dose ved en mål-AUC på 5 over 1 time på dag 1 i begge armene av studien. Karboplatin vil bli gitt før gemcitabin til alle pasienter. Dosen gjentas hver 21. dag og vil bli beregnet ved hjelp av Calvert-formelen:

   Dose av karboplatin (mg) = [beregnet glomerulær filtrasjonshastighet (GFR) + 25] x 5

   GFR vil bli beregnet i henhold til Cockroft-Gault-formelen:

   GFR (ml/min) = (140 - alder) x kroppsvekt (i kg) / 0,81 x serumkreatinin (mikromol/l)

   For kvinner er korreksjonsfaktoren 0,85 (x beregnet GFR)

   5.1.2 Infusjonsbasert gemcitabin

   Infusjonsgemcitabin gis med en konstant hastighet på 10 mg/m2 per minutt til alle pasienter på dag 1 og 8, syklusen gjentas hver 21. dag. Doseøkning oppnås ved å øke infusjonsvarigheten. Den totale dosen av gemcitabin rekonstitueres i 500 ml vanlig saltvann og infunderes gjennom en perifer eller sentral venelinje.

   5.2.1 Behandlingskurs

   Før behandlingsstart vil kvalifiserte pasienter randomiseres til å motta gemcitabin gitt enten som standard kort 30 minutters infusjon, eller forlenget infusjon med konstant hastighet over varigheten bestemt i fase I-studien. Alle pasienter i begge armer vil få karboplatin i en dose på AUC 5 over 1 time.

   Standard arm

   Karboplatin AUC på 5 over 1 time, dag 1, etterfulgt av Gemcitabin 1000 mg/m2 over 30 minutter, dag 1 og 8. Syklus gjentas hver 21. dag

   Studiearm

   Karboplatin AUC på 5 over 1 time, dag 1, etterfulgt av Gemcitabin 10 mg/m2/min ved MTD, dag 1 og 8. Syklus gjentas hver 21. dag

   Støttende behandling

   • Alle pasienter bør få pre-medisiner for å forhindre kvalme og oppkast i henhold til lokale retningslinjer.
   • Ingen profylaktiske vekstfaktorer er tillatt.
   • Vekstfaktor er kun tillatt i redningsinnstillingen, f.eks. forlenget grad 4 nøytropeni i mer enn 7 dager, eller for febril nøytropeni.

   5.2.2 Dosering i syklus 2 og påfølgende sykluser

   Neste behandlingssyklus vil begynne etter planen

   • Det er ingen tegn på tumorprogresjon

   • Nøytrofiler ~ 2 x 109/L
   • Blodplater ~ 100 000 x 109/l
   • Fravær av grad 2 eller høyere ikke-hematologisk toksisitet

   5.2.3 Doseendringer

   5.2.3.1 Generelle regler

   • Ingen intra-pasient doseeskalering er tillatt.
   • Enhver pasient som trenger en dosereduksjon vil ikke være kvalifisert for noen doseeskalering for resten av studien.
   • Behandlingen kan forsinkes opp til dag 35 for å gi pasienten tilstrekkelig tid til å komme seg etter behandlingsrelatert toksisitet. Enhver pasient som ikke kan fortsette til neste syklus innen dag 35, vil bli avbrutt fra studien.

   5.2.3.2 Doseendringer basert på hematologisk toksisitet

   Justering basert på dag 8 telling Blodplater (x 109/l) ANC (x 109/l) Handling > 75 og > 1,0 Fortsett med dag 8 dose > 75 og 0,5 - 1,0 Fortsett med redusert dose 50 - 75 og ~ 0,5 Fortsett med redusert dose dose < 50 og/eller < 0,5 Utelat dose Når dag 8-dosen reduseres, vil den samme reduserte dosen bli brukt for den påfølgende syklusen.

   Når dose på dag 8 utelates, er syklusen fullført, og neste syklus planlegges på dag 22, med dosereduksjon.

   Dosejustering basert på nadirtall Blodplater (x 109/l) ANC (x 109/l) Virkning ~ 25 uten blødning og ~ 0,5 eller < 0,5 i < 7 dager Ingen endring < 25 eller < 50 med blødning og/eller < 0,5 i > 7 dager Dosereduksjon (se nedenfor) Enhver og < 0,5 og feber Dosereduksjon Gjentakelse av noen av de ovennevnte etter 2 dosereduksjoner Utenfor studien

   Justering basert på antall dag 22 Blodplater (x 109/l) ANC (x 109/l) Handling

   ~ 100 og > 2,0 Fortsett med neste syklus < 100 og/eller < 2,0 Forsinkelse 1 uke Maksimal forsinkelse på 2 uker (neste syklus må starte på dag 35 for å forbli på studiet)

   Dosereduksjonsskjema Første reduksjon Andre reduksjon Tredje reduksjon Karboplatin AUC 4,5 AUC 4,0 Av studie Gemcitabin (standardarm) 750 mg/m2 (1000 mg/m2 x 75 %) 500 mg/m2 (1000 mg/m2 x 50 %) Utenfor studie Infusjonell Gemcitabin 75 % av fase II-varighet 50 % av tidligere infusjonsvarighet Av studie

   5.2.3.3 Doseendringer for ikke-hematologisk toksisitet

   Enhver ikke-hematologisk toksisitet av grad 3 eller 4, bortsett fra kvalme og oppkast og tretthet og reversibel transaminitt, vil gjøre pasienten ute av studien.

   Ikke-hematologisk toksisitet må være mindre enn grad 2 før du fortsetter til neste syklus. Er de høyere enn grad 2, utsettes behandlingen 1 uke. Behandlingen kan utsettes i maksimalt 2 uker.

   5.2.4 Behandlingens varighet

   Pasienter som reagerer vil motta opptil seks sykluser med kjemoterapi.

   Etter fullført behandling eller seponering kan pasienter fortsette å motta ytterligere behandling etter legens skjønn.

   Screeningevalueringer

   Følgende screeningundersøkelser må utføres innen 28 dager etter dag 1 i syklus 1:

   • Fullstendig iscenesettelse og dokumentasjon av tumorstatus - baseline røntgen av thorax, CT thorax, abdomen, hjerne og beinskanning hvis klinisk indisert.

   Følgende screeningsevalueringer og undersøkelser må utføres innen 14 dager etter den første dosen av behandlingen og inkluderer følgende:

   • Samtykke

   • Fullstendig sykehistorie, inkludert detaljer om symptomer, tidligere behandlinger, eventuell gjenværende toksisitet, samtidige medisinske tilstander og medisiner

   • Fysiske undersøkelser, inkludert dokumentasjon av alle palpable lesjoner, vitale tegn, kroppsvekt og høyde, og KPS.

   • Dokumentasjon av indikatorlesjon(er) for å inkludere dato for vurdering, beskrivelse av lesjonssted, dimensjoner og type diagnostisk studie for å følge lesjonen. Den samme diagnostiske metoden må brukes gjennom hele studien for å evaluere en lesjon.

   Følgende tester må utføres innen 7 dager etter den første dosen av behandlingen og inkluderer følgende:

   • Full blodtelling
   • Serumelektrolytter og leverenzymer, totalt kalsium og magnesium
   • Serumgraviditetstest, hvis aktuelt
   • Urinanalyse av peilepinnen - hvis peilepinnen er positiv for protein eller blod, kreves en fullstendig mikroskopisk undersøkelse

   8.3 Evaluering under behandling

   Før dag 1 i hver syklus

   • Anamnese og fysisk undersøkelse

   • Vurdere og registrere toksisiteter fra tidligere kurs. Tildel passende toksisitetsgrader (se vedlegg 4).

   • Registrer alle medisiner tatt siden siste syklus.

   • Vektmåling for re-beregning av kroppsoverflate og kreatininclearance

   • Vurdering av symptomer på sykdom (QoL spørreskjema bør gis og fylles ut av pasienten før vurdering av utreder).

   • Vurdering av prestasjonsstatus
   • Full blodtelling, elektrolytter og leverenzymer (hvis dag15-nivåer er unormale).
   • Urinpeilepinneanalyse, hvis baseline-resultatet er unormalt
   • Kliniske tumormålinger bør oppnås før hver behandlingssyklus
   • Radiografiske tumormålinger bør gjøres etter hver 2 behandlingssyklus.
   • Endre dosen av neste syklus om nødvendig (se pkt. 5.2.3).

   Dag 8 vurdering

   • Full blodtelling

   Dag 15 vurdering

   • Full blodtelling, elektrolytter og leverenzymer

   8.4 Vurdering av respons

   Pasienter vil kunne evalueres for respons etter 2 behandlingssykluser. Kliniske tumormålinger bør utføres før hver behandlingssyklus. Radiografiske tumormålinger bør gjøres etter hver 2 behandlingssyklus.

   Dersom en pasient oppfyller responskriteriene (se avsnitt 7) for CR, PR eller SD for første gang, vil en annen klinisk og radiografisk tumorvurdering bli utført 4 eller flere uker senere for å dokumentere at responsen har vart i minst 4 uker.

   Klinisk tumorvurdering etter hver syklus og radiografisk tumorrespons etter hver 2. syklus vil fortsette inntil behandlingen er fullført eller pasientens seponering.

   8.5 Oppfølging etter behandling

   Pasienter som reagerer vil bli vurdert hver 2. måned etter fullført kjemoterapi. Klinisk tumorvurdering vil bli utført 2 månedlig. Radiografisk tumorvurdering vil bli gjort hver 4. måned. Disse vil fortsette inntil sykdomsprogresjon er dokumentert.

   Pasienter som aldri har hatt respons, og pasienter med sykdomsprogresjon etter tidligere dokumentert respons vil bli fulgt hver 3. måned for overlevelsesdata.

9. BEHANDLING FULLFERDIG OG AVSLUTNING

En pasient vil bli ansett for å ha fullført behandlingen hvis:

• Pasienten har fullført 6 behandlingssykluser.
• Pasienten har en bekreftet CR eller bekreftet PR og har mottatt minst 4 sykluser med terapi og etterforskeren føler ikke at ytterligere terapi er indisert.
• Pasienten opprettholdt en status SD i minst 8 uker under behandling og fikk minst 2 behandlingssykluser.
• Pasienten har PD etter å ha fullført minst ett helt behandlingsforløp.
• En pasient fjernes fra studien på grunn av uakseptabel toksisitet.

Pasienter kan trekkes fra behandlingen av følgende årsaker:

• Uønsket opplevelse, inkludert interkurrent sykdom eller uakseptabel toksisitet.
• Hvis behandlende lege mener en endring av terapi vil være i pasientens beste interesse.
• Protokollbrudd (inkludert manglende overholdelse).
• Pasientuttak på hans/hennes forespørsel, av andre grunner enn de ovenfor.
• Tapte for oppfølging.

Alle pasienter vil bli fulgt for sykdomsstatus og overlevelse til døden. 10. VURDERING AV LIVSKVALITET (QoL).

Det er viktig å forklare pasienten at QoL-vurderingen er en viktig del av utprøvingen, og at alle avsnitt skal besvares selv om pasienten føler at de er irrelevante. Det skal understrekes at utfylling av disse skjemaene hjelper leger med å finne ut mer om effekten av behandlingen på pasientenes velvære.

En annen navngitt kontaktperson enn den ansvarlige klinikeren som administrerer pasienten i forbindelse med studien, må utnevnes til å ta ansvar for administrasjon, innsamling og kontroll av det utfylte EORTC QLQ-C30 og QLQ-LC13 spørreskjemaet. Spørreskjemaet må tas før konsultasjon med klinikeren, i henhold til EORTC-retningslinjene for kvalitetsvurdering. De bør kontrolleres for å sikre at alle spørsmål er besvart; om nødvendig gå tilbake til pasienten umiddelbart og be ham eller henne fylle ut eventuelle mangler. Dersom en vurdering uteblir på grunn av administrativ svikt, bør pasienten kontaktes per telefon eller brev, og det bør avtales at spørreskjemaet besvares innen en uke etter planlagt vurdering.

Spørreskjemaet kan fylles ut av pasienten dersom han/hun er i stand til å lese og forstå språket i spørreskjemaet. Ellers bør den navngitte personen for å administrere QoL lese opp spørsmålene som skrevet, på språket pasienten forstår, og registrere svaret på hvert spørsmål uten å påvirke hans/hennes svar. Leveringsmåten bør noteres i spørreskjemaet.

11. TILFELDIGHETSPROSEDYRE

Studiedeltakere vil bli tilfeldig tildelt enten gemcitabin gitt i den konvensjonelle 30-minutters infusjonen, eller langvarig infusjon, begge i kombinasjon med karboplatin.

11.1 Stratifisering

Stratifisert randomisering vil bli utført ved å bruke minimeringsmetoden basert på følgende faktorer:

(i) Senter (National University Hospital, Sydney Cancer Centre, Johns Hopkins-NUH International Medical Centre) (ii) Karnofskys ytelsesstatus (90 - 100 % vs 70 - 80 %) (iii) Sykdomsstadium (IIIB vs IV)

11.2 Registrering

Pasienter vil bli tatt med i forsøket ved en telefonsamtale til National Medical Research Council (NMRC) Clinical Trials & Epidemiology Research Unit (CTERU), Singapore (+65 220-1292) mellom 0830 til 1730 timer mandag til fredag, og 0830 til 1230 timer lørdag (Singapore-tid), eller via faks (+65 220-1485), med angivelse av at pasienten skal inn i CTRG L08- eller SQLU02-prøven.

Informert skriftlig samtykke for deltakelse i studien bør innhentes før randomisering. Alle kvalifikasjonskriterier og samtykkeskjema vil bli kontrollert, og stratifiseringsfaktorene oppgitt før behandling tildeles. Pasienten vil bli randomisert til lang infusjonsgemcitabin (L) eller 30 minutter kort infusjonsgemcitabin (S), og tildelt et prøvenummer. Designet vil innebære lik fordeling av pasienter til de to behandlingene. Bekreftelsesfaks vil bli sendt til etterforskeren.

12. STATISTISKE HENSYN

Utvalgsstørrelsesberegningen er utført basert på det statistiske seleksjonsteorikriteriet som beskrevet i Simon et al (62) og Gibbons et al (63). Forutsatt en 90 % sannsynlighet for riktig valg av den beste behandlingen, og forutse en baseline responsrate på 40 %, for så å oppdage en 15 % overlegenhet av den beste behandlingen i forhold til den andre, vil det være nødvendig med en prøvestørrelse på 37 pasienter per behandlingsarm. Totalt opptjeningsmål ville dermed være 74 pasienter.

13. STATISTISKE ANALYSER

Statistisk analyse av alle studiens endepunkter vil bli utført på en intensjon-til-behandling-basis. Ved tap til oppfølging vil pasienter fortsatt inkluderes i analysen så lenge de blir observert. Den iboende sammenlignbarheten av resultater i dette randomiserte fase II-designet ved bruk av den statistiske seleksjonsteorien sikrer at de to behandlingene kan rangeres pålitelig når store forskjeller oppnås.

Den beste responsen vil bli brukt i analysen av objektiv tumorrespons. Ved uønsket hendelse, hvor flere hendelser av samme type har oppstått hos en pasient, vil kun maksimal karakter bli dokumentert for analysen. Svulstresponsratene og toksisitetene mellom behandlingsgruppene vil bli sammenlignet deskriptivt ved å bruke estimater av proporsjoner.

Responsvarighet og tid til respons for responderende pasienter vil bli vurdert ved hjelp av passende beskrivende statistikk. Evalueringen av progresjonsfri og total overlevelse vil bli utført ved bruk av Kaplan-Meier-teknikken ved 1-års oppfølging. Ved progresjonsfri overlevelse vil pasienter hvis sykdom ikke har progrediert bli sensurert på datoen sist kjent for å være i live. På samme måte sensurerer analysen av total overlevelse pasienter som er tapt for oppfølging eller som forble i live på datoen sist kjent for å være i live.

For hver QoL-dimensjon vil endringer i skårer over tid sammenlignes mellom behandlingsarmene ved hjelp av passende grafisk representasjon eller beskrivende statistikk.

Det er ikke planlagt noen interimsanalyse for denne randomiserte fase II-studien.

14. ETISKE HENSYN

14.1 IRB/Etisk komité

Før studiestart vil protokollen forelegges for gjennomgang og godkjenning av sykehuset og Helsedepartementets forsknings- og etikkkomité eller tilsvarende gruppe. Godkjenning av protokollen og informert samtykke må innhentes.

14.2 Pasientinformasjon

Ansvarlig lege vil informere pasienten om bakgrunn og nåværende kunnskap om behandlingen som studeres med særlig referanse til kjent aktivitet og toksisitet. Pasienten vil bli fortalt om den undersøkende karakteren av denne behandlingen og spesielt randomiseringsprosessen involvert i denne studien. Pasienten vil bli informert om hans eller hennes rett til å trekke seg fra studien når som helst uten straff med hensyn til fortsettelse av omsorgen ved denne institusjonen og av de samme leger som han velger. Før opptjening vil alle pasienter signere et skriftlig, informert samtykkeskjema.

14.3 Informert samtykke

Informert samtykke bør oppfylle kravet til den siste revisjonen av Helsinki-erklæringen og eventuelle gjeldende forskrifter og retningslinjer som for eksempel Good Clinical Practice (Singapore).

Studien vil bli fullstendig forklart for hver potensiell kandidat, og forsøkspersonen må gi samtykke ved å signere og datere samtykkeskjemaet.

Samtykke må innhentes før protokollpåkrevde prosedyrer utføres, inkludert prosedyrer som ikke er en del av normal pasientbehandling.

Plasma dFdC og dFdU nivåer

Ti milliliter blod vil bli tappet etter 0 timer (grunnlinje), 10 minutter, 30 minutter, 10 minutter før slutten av infusjonen og 30 minutter, 1 time, 2 timer etter slutten av infusjonen. Blodet vil bli trukket inn i 10 ml rør (grønn topp) som inneholder heparin og 5 mikromol tetrahydrouridin. Rørene sentrifugeres deretter ved 3300 rpm i 15 minutter og supernatantplasmaet overføres deretter til vanlige rør (rød topp) for umiddelbar lagring ved -80oC. Prøver vil merkes med pasientens navn, ID-nummer, dato, nøyaktig tidspunkt for prøven og protokollnummer. Et farmakokinetisk skjema vil følge plasmaprøvene til farmakologilaboratoriet ved Institutt for farmakologi, National University of Singapore, c/o prof Lee How Sung.

DFdC- og dFdU-nivåer i plasma vil bli målt ved hjelp av omvendt fase HPLC, som beskrevet av Grunewald (22). Kort fortalt injiseres 20 mikrol til 50 mikrol plasma på en C18 mBondapak analytisk kolonne (Waters Associates, Inc.). Komponentene vil bli separert med en mobil fase bestående av en 30 minutters lineær gradient som starter med 100 % løsning A (0,5 M ammoniumacetat, pH = 6,8) og slutter med 60 % løsning B (50 % metanol i avionisert vann). Strømningshastighet er på 1,5 ml/min. Deteksjonsbølgelengder er 275 nm og 262 nm for henholdsvis dFdC og dFdU.

16.2 Intracellulære dFdCTP-nivåer

Blodprøver vil bli samlet for å analysere intracellulær dFdCTP. Kun 3 prøver per pasient, tatt 10 minutter etter start og 10 minutter før slutten av infusjonen av gemcitabin, og én i midten av infusjonen, vil bli analysert for dFdCTP.

Plasma separeres først fra blodet ved sentrifugering ved 3300 rpm i 20 minutter. Mononukleære celler blir deretter isolert ved Ficoll-Hypaque tetthetsgradientsentrifugering og deoksyribonukleosidtrifosfater ekstraheres med 0,4 NHClO4, og det syreuløselige materialet fjernes ved sentrifugering. Supernatanten nøytraliseres deretter forsiktig til pH 7 med kaliumhydroksid, og det utfelte KClO4 fjernes deretter ved sentrifugering. En ionebytter høyytelses væskekromatografimetode brukes deretter for å separere og kvantifisere dFdCTP.

17. STUDIEADMINISTRERING

17.1 Narkotikaansvar

Lagre av gemcitabin vil bli levert av Eli Lilly for prøveformål, og alle disse hetteglassene vil bli gjort rede for på stedets apotek.

17.2 Vedlikehold av pasientjournaler

CTRG kliniske rapportskjemaer vil bli brukt til å registrere data for denne studien. Alle skjemaer for kliniske pasientrapporter vil bli fakset til CTRG-kontoret (+65 777-5545). En kopi av hver pasients kvalifikasjonsrapportskjema, randomiseringsrapportskjema (for fase II), studieplan, samtykkeskjemaer, laboratorie- og radiologiske rapporter, og QoL-vurdering vil bli oppbevart på CTRG-kontoret. Alle journaler vil bli oppbevart i en periode på 6 år etter datoen for studieavslutning i henhold til Singapore GCP-retningslinjer