Fáze I/II studie infuzního gemcitabinu v kombinaci s karboplatinou u chemonaivního nemalobuněčného karcinomu

Cíle studia:

1. porovnat rychlost odpovědi karboplatiny a konstantní rychlosti infuze gemcitabinu s rychlostí odpovědi gemcitabinu podaného ve standardní 30minutové infuzi
2. porovnat zkušenosti s toxicitou v obou pažích
3. Porovnat dobu do progrese v obou ramenech studie a celkové přežití

4. Porovnat kvalitu života na obou ramenech studie pomocí EORTC QLQ-C30 a QLQ-LC13.

   Kritéria pro zařazení

   • Histologicky nebo cytologicky potvrzený NSCLC.
   • Stupeň IIIB nevhodný pro radikální záření (např. s cytologicky prokázaným maligním výpotkem) nebo onemocněním stadia IV, jak je definováno kritérii AJCC (viz příloha 1).
   • Stav výkonnosti podle Karnofského 70 % nebo vyšší (viz příloha 2).
   • Přítomnost alespoň jedné dvourozměrně nebo jednorozměrně měřitelné léze indikátoru mimo CNS definované radiologickou studií nebo fyzikálním vyšetřením.
   • Žádná předchozí chemoterapie pro pokročilé onemocnění. Předchozí neoadjuvantní nebo adjuvantní chemoterapie nebo chemoterapie podávaná současně s radioterapií u nemetastatického onemocnění je povolena, pokud byla poslední dávka podána 6 měsíců nebo déle před vstupem do studie.
   • Vhodné budou pacienti s recidivujícím onemocněním po primární operaci a/nebo radioterapii.
   • U pacientů s předchozí radioterapií nesmí indikační léze (léze) ležet v předchozím poli záření. Poslední dávka radioterapie by měla být alespoň 3 týdny před vstupem do studie. Celková přijatá radioterapie by neměla být větší než 30 % kostní dřeně.
   • Kritéria screeningové laboratoře:

   Počet bílých krvinek > 3500/mikrol Neutrofily > 2000/mikrol Počet krevních destiček > 100 000/mikrol Hemoglobin > 9 g/dl (transfuze povolena)

   Sérový kreatinin < 133 mikromol/l nebo clearance kreatininu > 30 ml/min, na základě Cockcroftova vzorce (viz bod 5.1.1)

   Bilirubin < 1,5 x horní hranice normy ALT/AST < 2 x horní hranice normy, pokud jaterní metastázy chybí < 5 x horní hranice normy, pokud jsou přítomny jaterní metastázy

   • Ve věku 18 let a více.
   • Předpokládaná délka života > 3 měsíce.
   • Písemný informovaný souhlas.

   4.2 Kritéria vyloučení

   Následující podmínky způsobí, že pacienti nebudou způsobilí k účasti na této studii:

   • Pacienti s pouze vyhodnotitelným onemocněním.
   • Aktivní nekontrolovaná infekce.
   • Těhotné nebo kojící ženy.
   • Ženy ve fertilním věku, které se po dobu trvání studie nechtějí vyhnout těhotenství.
   • Přítomnost jakéhokoli základního zdravotního stavu, který by podle názoru zkoušejících způsobil, že pacient není vhodný pro léčbu.
   • Souběžné malignity nebo předchozí malignity jiné než NSCLC během posledních 5 let, s výjimkou adekvátně léčeného bazaliomu nebo spinocelulárního karcinomu kůže, karcinomu in situ děložního čípku nebo karcinomu prostaty nízkého stupně ve stádiu A.
   • Pacienti s CNS a/nebo leptomeningeálními metastázami; pokud nejsou asymptomatické a nedostávají kortikosteroidní terapii.

   4.3 Kritéria pro zařazení a vyloučení pro pacienty fáze I

   Kritéria vyloučení jsou stejná jako výše.

   Kritéria pro zařazení jsou stejná jako výše s výjimkou následujících skupin pacientů, které jsou ve studii fáze I povoleny:

   • Pacienti pouze s vyhodnotitelným onemocněním (bez měřitelných lézí).
   • Pacienti s jednou (a pouze jednou) linií chemoterapie pokročilého NSCLC, s výjimkou pacientů, kteří dříve dostávali platinu a/nebo gemcitabin.
   • Pacienti s indikátorovými lézemi v předchozím radiačním poli.

   Měřitelnost indikátorových lézí

   • Měřitelné: Léze může být přesně změřena alespoň v jednom rozměru (nejdelší průměr, který má být zaznamenán) jako > 20 mm konvenčními technikami nebo jako > 10 mm pomocí spirálního CT skenu.
   • Neměřitelné: Všechny ostatní léze včetně malých lézí (nejdelší průměr < 20 mm s konvenčními technikami nebo < 10 mm se spirálním CT skenem) a skutečně neměřitelné léze. Léze považované za skutečně neměřitelné zahrnují následující: kostní léze, leptomeningeální onemocnění, ascites, pleurální/cutis/pulmonis, břišní masy, které nejsou potvrzeny a sledovány zobrazovacími technikami, a cystické léze.
   • Cílové léze: Všechny měřitelné léze až do maximálního počtu 5 lézí na orgán a 10 lézí v celkovém počtu reprezentativních pro všechny dotčené orgány by měly být identifikovány jako cílové léze a měly by být zaznamenávány a měřeny na začátku. Cílové léze by měly být vybrány na základě jejich velikosti (léze s nejdelším průměrem) a jejich vhodnosti pro přesná měření (buď zobrazovacími technikami nebo klinicky). Vypočte se součet nejdelšího průměru (LD) pro všechny cílové léze a uvede se jako základní součet LD. Základní součet LD se používá jako reference, pomocí které se charakterizuje objektivní odpověď nádoru. Pokud existuje > 10 měřitelných lézí, ty, které nebyly vybrány jako cílové léze, budou považovány spolu s neměřitelným onemocněním za necílové léze.
   • Necílové léze: Všechny neměřitelné léze (nebo místa onemocnění) plus jakékoli měřitelné léze nad 10 uvedených jako cílové léze. Měření nejsou vyžadována, ale tyto léze by měly být zaznamenány na začátku a měly by být sledovány jako „přítomné“ nebo „nepřítomné“.
   • Jakékoli měření nádoru založené pouze na fyzikálním vyšetření by mělo být ověřeno druhým lékařem.
   • K vyhodnocení lézí musí být během studie použita stejná diagnostická zobrazovací metoda.

5. LÉČEBNÝ PLÁN

   5.1 Fáze I studia

   5.1.1 Karboplatina

   Počáteční dávka karboplatiny se podává ve fixní dávce při cílové AUC 5 po dobu 1 hodiny v den 1 v obou ramenech studie. Karboplatina bude všem pacientům podána před gemcitabinem. Dávka se opakuje každých 21 dní a bude vypočítána pomocí Calvertova vzorce:

   Dávka karboplatiny (mg) = [vypočtená rychlost glomerulární filtrace (GFR) + 25] x 5

   GFŘ se vypočítá podle Cockroft-Gaultova vzorce:

   GFR (ml/min) = (140 - věk) x tělesná hmotnost (v kg) / 0,81 x sérový kreatinin (mikromol/l)

   Pro ženy je korekční faktor 0,85 (x vypočtená GFR)

   5.1.2 Infuzní gemcitabin

   Infuzní gemcitabin se podává konstantní rychlostí 10 mg/m2 za minutu všem pacientům 1. a 8. den, cyklus se opakuje každých 21 dní. Eskalace dávky je dosaženo prodloužením doby trvání infuze. Celková dávka gemcitabinu se rekonstituuje v 500 ml fyziologického roztoku a podává se infuzí periferní nebo centrální žilní cestou.

   5.2.1 Léčebné kúry

   Před zahájením léčby budou vhodní pacienti randomizováni tak, aby dostávali gemcitabin podávaný buď ve standardní krátké 30minutové infuzi, nebo prodloužené infuzi konstantní rychlostí po dobu stanovenou ve studii fáze I. Všichni pacienti v obou ramenech dostanou karboplatinu v dávce AUC 5 po dobu 1 hodiny.

   Standardní rameno

   AUC karboplatiny 5 za 1 hodinu, 1. den, následovaná gemcitabinem 1000 mg/m2 během 30 minut, 1. a 8. den Cyklus se opakuje každých 21 dní

   Studijní rameno

   AUC karboplatiny 5 během 1 hodiny, den 1, následovaná gemcitabinem 10 mg/m2/min při MTD, den 1 a 8 Cyklus se opakuje každých 21 dní

   Podpůrná léčba

   • Všichni pacienti by měli dostat premedikaci k prevenci nevolnosti a zvracení v souladu s místní politikou.
   • Nejsou povoleny žádné profylaktické růstové faktory.
   • Růstový faktor je povolen pouze v záchranném nastavení, např. prodloužená neutropenie 4. stupně po dobu delší než 7 dní nebo febrilní neutropenie.

   5.2.2 Dávkování v cyklu 2 a následujících cyklech

   Další léčebný cyklus začne podle plánu

   • Neexistuje žádný důkaz progrese nádoru

   • Neutrofily ~ 2 x 109/l
   • Krevní destičky ~ 100 000 x 109/l
   • Absence stupně 2 nebo vyšší nehematologické toxicity

   5.2.3 Úpravy dávek

   5.2.3.1 Obecná pravidla

   • Není povoleno žádné zvyšování dávky u pacienta.
   • Žádný pacient, který vyžaduje snížení dávky, nebude po zbytek studie způsobilý k žádnému zvyšování dávky.
   • Léčba může být odložena až na 35. den, aby se pacientovi poskytl dostatek času na zotavení z toxicity související s léčbou. Každý pacient, který nemůže postoupit do dalšího cyklu do 35. dne, bude ze studie vyřazen.

   5.2.3.2 Úpravy dávky na základě hematologické toxicity

   Úprava na základě počtu krevních destiček 8. dne (x 109/l) ANC (x 109/l) Akce > 75 a > 1,0 Pokračujte dávkou 8. dne > 75 a 0,5 - 1,0 Pokračujte sníženou dávkou 50 - 75 a ~ 0,5 Pokračujte sníženou dávka < 50 a/nebo < 0,5 Vynechat dávku Když se dávka 8. dne sníží, stejná snížená dávka se použije pro následující cyklus.

   Když je dávka 8. den vynechána, cyklus je dokončen a další cyklus bude naplánován na 22. den se snížením dávky.

   Úprava dávky na základě počtu nadir trombocytů (x 109/l) ANC (x 109/l) Akce ~ 25 bez krvácení a ~ 0,5 nebo < 0,5 po dobu < 7 dnů Žádná změna < 25 nebo < 50 s krvácením a/nebo < 0,5 po dobu > 7 dnů Snížení dávky (viz níže) Jakékoli a < 0,5 a horečka Snížení dávky Opakovaný výskyt kteréhokoli z výše uvedených po 2 sníženích dávky Mimo studii

   Úprava na základě počtu 22. dne Počet krevních destiček (x 109/l) ANC (x 109/l) Akce

   ~ 100 a > 2,0 Pokračujte dalším cyklem < 100 a/nebo < 2,0 Zpoždění 1 týden Maximální zpoždění 2 týdny (další cyklus musí začít do 35. dne, aby zůstal ve studii)

   Schéma snížení dávky První snížení Druhé snížení Třetí snížení Karboplatina AUC 4,5 AUC 4,0 Bez studie Gemcitabin (standardní rameno) 750 mg/m2 (1000 mg/m2 x 75 %) 500 mg/m2 (1000 mg/m2 x 50 %) Bez studie Infuzní Gemcitabin 75 % trvání fáze II 50 % předchozího trvání infuze Off studie

   5.2.3.3 Úprava dávky pro nehematologickou toxicitu

   Jakákoli nehematologická toxicita stupně 3 nebo 4, kromě nevolnosti a zvracení a únavy a reverzibilní transaminitidy, vyřadí pacienta ze studie.

   Nehematologická toxicita musí být nižší než stupeň 2 před pokračováním v dalším cyklu. Pokud jsou vyšší než stupeň 2, léčba se odloží o 1 týden. Léčba může být odložena maximálně o 2 týdny.

   5.2.4 Délka léčby

   Reagující pacienti dostanou až šest cyklů chemoterapie.

   Po ukončení léčby nebo jejím vysazení mohou pacienti pokračovat v další léčbě podle uvážení svého lékaře.

   Screeningová hodnocení

   Následující screeningová vyšetření musí být provedena do 28 dnů ode dne 1 1. cyklu:

   • Kompletní staging a dokumentace stavu nádoru – základní rentgen hrudníku, CT hrudníku, břicha, mozku a kostí, pokud je to klinicky indikováno.

   Následující screeningová hodnocení a vyšetření musí být provedena do 14 dnů od první dávky terapie a zahrnují následující:

   • Souhlas

   • Kompletní anamnéza, včetně podrobností o symptomech, předchozí léčbě, jakékoli zbytkové toxicitě, doprovodných zdravotních stavech a lécích

   • Fyzikální vyšetření, včetně dokumentace všech hmatných lézí, vitálních funkcí, tělesné hmotnosti a výšky a KPS.

   • Dokumentace indikátorové léze (lézí), která obsahuje datum hodnocení, popis místa léze, rozměry a typ diagnostické studie pro sledování léze. K vyhodnocení léze musí být během studie použita stejná diagnostická metoda.

   Následující testy musí být provedeny do 7 dnů od první dávky terapie a zahrnují následující:

   • Plný počet krvinek
   • Sérové ​​elektrolyty a jaterní enzymy, celkový vápník a hořčík
   • Sérový těhotenský test, je-li použit
   • Analýza moči měrkou – pokud je měrka pozitivní na protein nebo krev, je nutné kompletní mikroskopické vyšetření

   8.3 Hodnocení během léčby

   Před 1. dnem každého cyklu

   • Anamnéza a fyzikální vyšetření

   • Posuďte a zaznamenejte toxicitu z předchozího kurzu. Přiřaďte příslušné stupně toxicity (viz dodatek 4).

   • Zaznamenejte všechny léky užívané od posledního cyklu.

   • Měření hmotnosti pro přepočet plochy povrchu těla a clearance kreatininu

   • Posouzení příznaků onemocnění (dotazník kvality života by měl podat a vyplnit pacient před hodnocením zkoušejícím).

   • Posouzení stavu výkonu
   • Úplný krevní obraz, elektrolyty a jaterní enzymy (pokud jsou hladiny 15. dne abnormální).
   • Analýza močových proužků, pokud je výchozí výsledek abnormální
   • Před každým cyklem léčby by měla být provedena klinická měření nádoru
   • Po každých 2 cyklech léčby by mělo být provedeno radiografické měření nádoru.
   • V případě potřeby upravte dávku dalšího cyklu (viz bod 5.2.3).

   Hodnocení dne 8

   • Plný počet krvinek

   Hodnocení dne 15

   • Kompletní krevní obraz, elektrolyty a jaterní enzymy

   8.4 Vyhodnocení odezvy

   Pacienti budou hodnotitelní na odpověď po 2 cyklech terapie. Před každým cyklem léčby by měla být provedena klinická měření nádoru. Po každých 2 cyklech léčby by mělo být provedeno radiografické měření nádoru.

   Pokud pacient splní kritéria odpovědi (viz část 7) ​​pro CR, PR nebo SD poprvé, bude o 4 nebo více týdnů později provedeno další klinické a radiografické vyšetření nádoru, aby se zdokumentovalo, že odpověď trvala alespoň 4 týdny.

   Klinické hodnocení nádoru po každém cyklu a radiologická odpověď nádoru po každých 2 cyklech bude pokračovat až do dokončení léčby nebo vysazení pacienta.

   8.5 Sledování po léčbě

   Reagující pacienti budou po ukončení chemoterapie kontrolováni každé 2 měsíce. Klinické hodnocení nádoru bude prováděno 2 měsíčně. Radiografické vyšetření nádoru se bude provádět každé 4 měsíce. Ty budou pokračovat, dokud nebude zdokumentována progrese onemocnění.

   Pacienti, kteří nikdy neměli odpověď, a pacienti s progresí onemocnění po dříve zdokumentované odpovědi budou sledováni každé 3 měsíce kvůli údajům o přežití.

9. DOKONČENÍ LÉČBY A ODBĚR

Pacient bude považován za dokončeného, ​​pokud:

• Pacient absolvoval 6 cyklů terapie.
• Pacient má potvrzenou CR nebo potvrzenou PR a absolvoval nejméně 4 cykly terapie a zkoušející se nedomnívá, že je další terapie indikována.
• Pacient si udržoval status SD po dobu alespoň 8 týdnů léčby a dostal alespoň 2 cykly léčby.
• Pacient má PD po dokončení alespoň jednoho úplného cyklu léčby.
• Pacient je vyřazen ze studie kvůli nepřijatelné toxicitě.

Pacienti mohou být z léčby vyřazeni z následujících důvodů:

• Nežádoucí zkušenosti, včetně interkurentních onemocnění nebo nepřijatelné toxicity.
• Pokud se ošetřující lékař domnívá, že změna terapie by byla v nejlepším zájmu pacienta.
• Porušení protokolu (včetně nedodržení).
• Odstoupení pacienta na jeho žádost z jiných než výše uvedených důvodů.
• Ztraceno v následování.

U všech pacientů bude sledován stav onemocnění a přežití až do smrti. 10. HODNOCENÍ KVALITY ŽIVOTA (QoL).

Je nezbytné pacientovi vysvětlit, že hodnocení kvality života je důležitou součástí studie a že by měly být zodpovězeny všechny části, i když je pacient považuje za irelevantní. Je třeba zdůraznit, že vyplnění těchto formulářů pomáhá lékařům zjistit více o účincích léčby na pohodu pacientů.

Musí být jmenována jmenovaná kontaktní osoba jiná než odpovědný klinický lékař, který pacienta v kontextu studie řídí, aby převzal odpovědnost za administraci, sběr a kontrolu vyplněného dotazníku EORTC QLQ-C30 a QLQ-LC13. Dotazník je nutné vyplnit před konzultací s lékařem v souladu s pokyny EORTC pro hodnocení kvality života. Měly by být zkontrolovány, aby bylo zajištěno, že byly zodpovězeny všechny otázky; v případě potřeby se okamžitě vraťte k pacientovi a požádejte ho, aby doplnil chybějící položky. Pokud je hodnocení zmeškano z důvodu administrativního selhání, měl by být pacient kontaktován telefonicky nebo dopisem a mělo by být dohodnuto, že dotazník bude vyřízen do týdne od plánovaného hodnocení.

Dotazník může vyplnit pacient, pokud je schopen číst a rozumí jazyku dotazníku. Jinak by jmenovaná osoba pro správu QoL měla přečíst otázky tak, jak byly napsány, v jazyce, kterému pacient rozumí, a zaznamenat odpověď na každou otázku, aniž by tím byla dotčena její odpověď. Způsob doručení by měl být uveden v dotazníku.

11. NÁHODNÝ POSTUP

Účastníci studie budou náhodně rozděleni tak, aby dostávali buď gemcitabin podávaný v konvenční 30minutové infuzi, nebo protrahovanou infuzi, obojí v kombinaci s karboplatinou.

11.1 Stratifikace

Stratifikovaná randomizace bude provedena pomocí minimalizační metody založené na následujících faktorech:

(i) Centrum (National University Hospital, Sydney Cancer Centre, Johns Hopkins-NUH International Medical Centre) (ii) Karnofského výkonnostní stav (90 – 100 % vs. 70 – 80 %) (iii) Stádium onemocnění (IIIB vs. IV)

11.2 Registrace

Pacienti budou do studie zařazeni telefonickým hovorem na Národní lékařskou výzkumnou radu (NMRC) Clinical Trials & Epidemiology Research Unit (CTERU), Singapur (+65 220-1292) od pondělí do pátku od 830 do 1730 hodin a od 830 do 1230 hodin v sobotu (singapurský čas), nebo faxem (+65 220-1485), s uvedením, že pacient má být zařazen do studie CTRG L08 nebo SQLU02.

Před randomizací by měl být získán informovaný písemný souhlas se vstupem do studie. Před přidělením léčby budou zkontrolována všechna kritéria způsobilosti a formulář souhlasu a budou uvedeny stratifikační faktory. Pacient bude randomizován na dlouhou infuzi gemcitabinu (L) nebo 30minutovou krátkou infuzi gemcitabinu (S) a bude mu přiděleno číslo studie. Návrh bude zahrnovat stejné rozdělení pacientů na dvě léčby. Potvrzovací fax bude zaslán vyšetřovateli.

12. STATISTICKÉ ÚVAHY

Výpočet velikosti vzorku se provádí na základě kritéria statistické selekce, jak je podrobně popsáno v Simon et al (62) a Gibbons et al (63). Za předpokladu 90% pravděpodobnosti správného výběru nejlepší léčby a předvídání základní míry odpovědi 40 % by pak k detekci 15% převahy nejlepší léčby nad druhou bylo zapotřebí velikost studie 37 pacientů na léčebné rameno. Celkový akruální cíl by tak byl 74 pacientů.

13. STATISTICKÉ ANALÝZY

Statistická analýza všech sledovaných parametrů studie bude provedena na základě záměru léčby. V případě ztráty ve sledování budou pacienti stále zahrnuti do analýzy po dobu, po kterou jsou sledováni. Inherentní srovnatelnost výsledků v tomto randomizovaném návrhu fáze II využívající teorii statistického výběru zajišťuje, že tyto dvě léčby lze spolehlivě seřadit, když jsou získány velké rozdíly.

Nejlepší odpověď bude použita při analýze objektivní odpovědi nádoru. V případě nežádoucí příhody, kdy se u pacienta vyskytlo více příhod stejného druhu, bude pro analýzu dokumentován pouze maximální stupeň. Míry nádorové odpovědi a toxicity mezi léčebnými skupinami budou popisně porovnány pomocí odhadů podílů.

Doba trvání odezvy a doba do odezvy u reagujících pacientů budou hodnoceny pomocí vhodných popisných statistik. Hodnocení přežití bez progrese a celkového přežití bude provedeno pomocí Kaplan-Meierovy techniky při jednoročním sledování. V případě přežití bez progrese budou pacienti, jejichž onemocnění neprogredovalo, cenzurováni k datu, o kterém je známo, že jsou naposledy naživu. Podobně analýza celkového přežití cenzoruje pacienty, kteří byli ztraceni při sledování nebo kteří zůstali naživu k datu, o kterém je známo, že byli naposledy naživu.

Pro každou dimenzi QoL budou porovnány změny ve skóre v průběhu času mezi léčebnými rameny pomocí vhodného grafického znázornění nebo popisné statistiky.

Pro tuto randomizovanou studii fáze II není plánována žádná prozatímní analýza.

14. ETICKÉ ÚVAHY

14.1 IRB/Etická komise

Před zahájením studie bude protokol předložen ke kontrole a schválení nemocnicí a výzkumnou a etickou komisí Ministerstva zdravotnictví nebo ekvivalentní skupinou. Je nutné získat schválení protokolu a informovaný souhlas.

14.2 Informace pro pacienta

Odpovědný lékař bude pacienta informovat o pozadí a současných znalostech zkoumané léčby se zvláštním zřetelem na známou aktivitu a toxicitu. Pacient bude informován o vyšetřovací povaze této léčby a zejména o procesu randomizace, který je součástí této studie. Pacient bude poučen o svém právu kdykoli odstoupit ze studie bez jakékoli sankce s ohledem na pokračování péče v tomto zařízení a stejnými lékaři, které si zvolí. Před načítáním všichni pacienti podepíší písemný informovaný souhlas.

14.3 Informovaný souhlas

Informovaný souhlas by měl splňovat požadavek poslední revize Helsinské deklarace a všech platných předpisů a pokynů, jako je Správná klinická praxe (Singapur).

Studie bude kompletně vysvětlena každému potenciálnímu kandidátovi a subjekt musí dát souhlas podpisem a datováním formuláře souhlasu.

Před provedením jakýchkoliv protokolem požadovaných postupů, včetně postupů, které nejsou součástí běžné péče o pacienta, je nutné získat souhlas.

Plazmatické hladiny dFdC a dFdU

Deset mililitrů krve bude odebráno 0 hodin (základní hodnota), 10 minut, 30 minut, 10 minut před koncem infuze a 30 minut, 1 hodinu, 2 hodiny po ukončení infuze. Krev se odebere do 10ml zkumavek (zelené zakončení) obsahujících heparin a 5 mikromolů tetrahydrouridinu. Zkumavky se poté odstřeďují při 3300 otáčkách za minutu po dobu 15 minut a supernatantová plazma se poté přenese do obyčejných zkumavek (s červeným uzávěrem) pro okamžité skladování při -80 °C. Vzorky budou označeny jménem pacienta, identifikačním číslem, datem, přesným časem odběru a číslem protokolu. Farmakokinetická forma bude doprovázet vzorky plazmy do farmakologické laboratoře na katedře farmakologie, National University of Singapore, c/o Prof Lee How Sung.

Hladiny DFdC a dFdU v plazmě budou měřeny pomocí HPLC s reverzní fází, jak popsal Grunewald (22). Stručně řečeno, 20 mikrol až 50 mikrol plazmy se vstříkne na analytickou kolonu C18 mBondapak (Waters Associates, Inc.). Složky budou separovány mobilní fází sestávající z 30minutového lineárního gradientu počínaje 100% roztokem A (0,5M octan amonný, pH = 6,8) a konče 60% roztokem B (50% methanol v deionizované vodě). Průtok je 1,5 ml/min. Detekční vlnové délky jsou 275 nm a 262 nm pro dFdC a dFdU, v daném pořadí.

16.2 Intracelulární hladiny dFdCTP

Budou odebírány vzorky krve pro testování intracelulárního dFdCTP. Pouze 3 vzorky na pacienta, získané 10 minut po začátku a 10 minut před koncem infuze gemcitabinu a jeden uprostřed infuze, budou testovány na dFdCTP.

Plazma se nejprve oddělí od krve odstředěním při 3300 otáčkách za minutu po dobu 20 minut. Mononukleární buňky se pak izolují Ficoll-Hypaque odstředěním v hustotním gradientu a deoxyribonukleosidtrifosfáty se extrahují 0,4 NHCl04 a materiál nerozpustný v kyselině se odstraní odstředěním. Supernatant se poté opatrně neutralizuje na pH 7 hydroxidem draselným a vysrážený KC104 se poté odstraní centrifugací. K separaci a kvantifikaci dFdCTP se pak použije metoda iontoměničové vysokoúčinné kapalinové chromatografie.

17. ADMINISTRACE STUDIA

17.1 Drogová odpovědnost

Zásoby gemcitabinu dodá Eli Lilly pro zkušební účely a všechny tyto lahvičky budou zaúčtovány v místní lékárně.

17.2 Vedení záznamů pacientů

Pro záznam dat pro tuto studii budou použity formuláře klinické zprávy CTRG. Všechny formuláře klinické zprávy pacienta budou faxem zaslány do kanceláře CTRG (+65 777-5545). Kopie formuláře zprávy o způsobilosti každého pacienta, formuláře zprávy o randomizaci (pro fázi II), harmonogramu studie, formulářů souhlasu, laboratorních a radiologických zpráv a hodnocení kvality života bude uložena v kanceláři CTRG. Všechny záznamy budou uchovávány po dobu 6 let od data uzavření studie podle singapurských směrnic GCP