Ensayo de fase I/II de infusión de gemcitabina en combinación con carboplatino en el carcinoma de células no pequeñas Chemonaive

Objetivos de estudio:

1. comparar la tasa de respuesta de carboplatino y gemcitabina en infusión a tasa constante con la tasa de respuesta de gemcitabina administrada en la infusión estándar de 30 minutos
2. comparar la experiencia de toxicidad en ambos brazos
3. Comparar el tiempo hasta la progresión en ambos brazos del estudio y la supervivencia general

4. Comparar la calidad de vida en ambos brazos del estudio utilizando EORTC QLQ-C30 y QLQ-LC13.

   Criterios de inclusión

   • NSCLC confirmado histológica o citológicamente.
   • Estadio IIIB inadecuado para la radiación radical (p. con derrame maligno probado citológicamente) o enfermedad en estadio IV según lo definido por los criterios del AJCC (ver apéndice 1).
   • Estado funcional de Karnofsky 70% o superior (ver apéndice 2).
   • Presencia de al menos una lesión indicadora medible bidimensional o unidimensionalmente, fuera del SNC, definida por estudio radiológico o examen físico.
   • Sin quimioterapia previa para enfermedad avanzada. Se permite la quimioterapia adyuvante o neoadyuvante previa, o la quimioterapia administrada simultáneamente con radioterapia para la enfermedad no metastásica, si la última dosis se administró 6 meses o más antes del ingreso al estudio.
   • Serán elegibles los pacientes con enfermedad recurrente después de la cirugía primaria y/o radioterapia.
   • Para pacientes con radioterapia previa, la(s) lesión(es) indicadora(s) no debe(n) estar dentro del campo de radiación anterior. La última dosis de radioterapia debe ser al menos 3 semanas antes del ingreso al estudio. La radioterapia total recibida no debe ser superior al 30% de la médula ósea.
   • Criterios de laboratorio de cribado:

   Recuento de leucocitos > 3500/microl Neutrófilos > 2000/microl Recuento de plaquetas > 100 000/microl Hemoglobina > 9 g/dl (transfusión permitida)

   Creatinina sérica < 133 micromol/l, o aclaramiento de creatinina > 30 ml/min, según la fórmula de Cockcroft (ver sección 5.1.1)

   Bilirrubina < 1,5 x límite superior normal ALT/AST < 2 x límite superior normal si no hay metástasis hepáticas < 5 x límite superior normal si hay metástasis hepáticas

   • Mayores de 18 años.
   • Esperanza de vida > 3 meses.
   • Consentimiento informado por escrito.

   4.2 Criterios de exclusión

   Las siguientes condiciones harán que los pacientes no sean elegibles para participar en este estudio:

   • Pacientes con enfermedad evaluable solamente.
   • Infección activa no controlada.
   • Mujeres embarazadas o lactantes.
   • Mujeres en edad fértil que no estén dispuestas a evitar el embarazo, durante la duración del estudio.
   • Presencia de cualquier condición médica subyacente que, en opinión de los investigadores, haría que el paciente no fuera apto para el tratamiento.
   • Neoplasias malignas concomitantes o neoplasias malignas anteriores distintas del NSCLC en los últimos 5 años, con la excepción de carcinoma de células basales o de células escamosas de la piel, carcinoma in situ del cuello uterino o cáncer de próstata de bajo grado en estadio A tratado adecuadamente.
   • Pacientes con metástasis del SNC y/o leptomeníngeas; a menos que sea asintomático y no esté recibiendo terapia con corticosteroides.

   4.3 Criterios de inclusión y exclusión para pacientes en fase I

   Los criterios de exclusión son los mismos que los anteriores.

   Los criterios de inclusión son los mismos que los anteriores excepto para los siguientes grupos de pacientes, que están permitidos en el estudio de fase I:

   • Pacientes con enfermedad evaluable únicamente (sin lesiones medibles).
   • Pacientes con una (y solo una) línea de quimioterapia para NSCLC avanzado, excluyendo pacientes que habían recibido previamente platino y/o gemcitabina.
   • Pacientes con lesiones indicadoras en campo de radiación previo.

   Mensurabilidad de las lesiones indicadoras

   • Mensurable: la lesión se puede medir con precisión en al menos una dimensión (diámetro más largo a registrar) como > 20 mm con técnicas convencionales o como > 10 mm con tomografía computarizada en espiral.
   • No medibles: todas las demás lesiones, incluidas las lesiones pequeñas (diámetro más largo <20 mm con técnicas convencionales o <10 mm con tomografía computarizada en espiral) y lesiones verdaderamente no medibles. Las lesiones consideradas verdaderamente no medibles incluyen las siguientes: lesiones óseas, enfermedad leptomeníngea, ascitis, pleural/cutis/pulmonis, masas abdominales no confirmadas y seguidas por técnicas de imagen y lesiones quísticas.
   • Lesiones diana: todas las lesiones medibles hasta un máximo de 5 lesiones por órgano y 10 lesiones en total representativas de todos los órganos afectados deben identificarse como lesiones diana y registrarse y medirse al inicio del estudio. Las lesiones objetivo deben seleccionarse en función de su tamaño (lesión con el diámetro más largo) y su idoneidad para mediciones precisas (ya sea mediante técnicas de imagen o clínicamente). Se calculará una suma del diámetro más largo (LD) para todas las lesiones diana y se informará como la suma de referencia LD. La suma de la línea de base LD se utiliza como referencia para caracterizar la respuesta tumoral objetiva. Si hay > 10 lesiones medibles, aquellas no seleccionadas como lesiones diana se considerarán junto con la enfermedad no medible como lesiones no diana.
   • Lesiones no objetivo: todas las lesiones no medibles (o sitios de enfermedad) más cualquier lesión medible por encima de las 10 enumeradas como lesiones objetivo. No se requieren mediciones, pero estas lesiones deben anotarse al inicio del estudio y deben seguirse como "presentes" o "ausentes".
   • Cualquier medición del tumor que se base únicamente en el examen físico debe ser verificada por un segundo médico.
   • Se debe utilizar el mismo método de diagnóstico por imagen durante todo el estudio para evaluar las lesiones.

5. PLAN DE TRATAMIENTO

   5.1 Estudio de fase I

   5.1.1 Carboplatino

   La dosis inicial de carboplatino se administra a una dosis fija con un AUC objetivo de 5 durante 1 hora el día 1 en ambos brazos del estudio. El carboplatino se administrará antes que la gemcitabina en todos los pacientes. La dosis se repite cada 21 días y se calculará mediante la fórmula de Calvert:

   Dosis de carboplatino (mg) = [tasa de filtración glomerular calculada (TFG) + 25] x 5

   El FG se calculará según la fórmula de Cockroft-Gault:

   TFG (ml/min) = (140 - edad) x peso corporal (en kg) / 0,81 x creatinina sérica (micromol/l)

   Para mujeres, el factor de corrección es 0.85 (x GFR calculado)

   5.1.2 Gemcitabina para infusión

   La gemcitabina en infusión se administra a una velocidad constante de 10 mg/m2 por minuto en todos los pacientes los días 1 y 8, el ciclo se repite cada 21 días. El aumento de la dosis se logra aumentando la duración de la infusión. La dosis total de gemcitabina se reconstituye en 500 ml de solución salina normal y se infunde a través de una vía venosa central o periférica.

   5.2.1 Cursos de tratamiento

   Antes de iniciar el tratamiento, los pacientes elegibles serán aleatorizados para recibir gemcitabina administrada en la infusión corta estándar de 30 minutos o en la infusión prolongada a velocidad constante durante la duración determinada en el estudio de fase I. Todos los pacientes de ambos brazos recibirán carboplatino a una dosis de AUC de 5 durante 1 hora.

   Brazo estándar

   Carboplatino AUC de 5 durante 1 hora, día 1, seguido de gemcitabina 1000 mg/m2 durante 30 min, día 1 y 8 El ciclo se repite cada 21 días

   brazo de estudio

   AUC de carboplatino de 5 durante 1 hora, día 1, seguido de 10 mg/m2/min de gemcitabina en MTD, día 1 y 8 El ciclo se repite cada 21 días

   Tratamiento de apoyo

   • Todos los pacientes deben recibir medicamentos previos para prevenir las náuseas y los vómitos de acuerdo con la política local.
   • No se permiten factores de crecimiento profilácticos.
   • El factor de crecimiento solo se permite en el entorno de rescate, p. neutropenia prolongada de grado 4 durante más de 7 días, o neutropenia febril.

   5.2.2 Dosificación en ciclo 2 y ciclos posteriores

   El siguiente ciclo de tratamiento comenzará según lo programado proporcionando

   • No hay evidencia de progresión del tumor

   • Neutrófilos ~ 2 x 109/L
   • Plaquetas ~ 100.000 x 109/l
   • Ausencia de toxicidad no hematológica de grado 2 o superior

   5.2.3 Modificaciones de dosis

   5.2.3.1 Reglas generales

   • No se permite aumentar la dosis intrapaciente.
   • Cualquier paciente que requiera una reducción de la dosis no será elegible para ningún aumento de la dosis durante el resto del estudio.
   • El tratamiento se puede retrasar hasta el día 35 para que el paciente tenga tiempo suficiente para recuperarse de la toxicidad relacionada con el tratamiento. Cualquier paciente que no pueda continuar con el siguiente ciclo para el día 35 será descontinuado del estudio.

   5.2.3.2 Modificaciones de dosis en función de la toxicidad hematológica

   Ajuste basado en el recuento del día 8 Plaquetas (x 109/l) ANC (x 109/l) Acción > 75 y > 1,0 Continúe con la dosis del día 8 > 75 y 0,5 - 1,0 Continúe con la dosis reducida 50 - 75 y ~ 0,5 Continúe con la dosis reducida dosis < 50 y/o < 0,5 Omitir dosis Cuando se reduce la dosis del día 8, se utilizará la misma dosis reducida para el siguiente ciclo.

   Cuando se omite la dosis del día 8, el ciclo se completa y el próximo ciclo se programará para el día 22, con reducción de la dosis.

   Ajuste de dosis basado en el recuento nadir Plaquetas (x 109/l) ANC (x 109/l) Acción ~ 25 sin sangrado y ~ 0,5 o < 0,5 durante < 7 días Sin cambios < 25 o < 50 con sangrado y/o < 0,5 durante > 7 días Reducción de dosis (ver más abajo) Cualquiera y < 0,5 y fiebre Reducción de dosis Recurrencia de cualquiera de los anteriores después de 2 reducciones de dosis Fuera del estudio

   Ajuste basado en el recuento del día 22 Plaquetas (x 109/l) ANC (x 109/l) Acción

   ~ 100 y > 2,0 Continuar con el siguiente ciclo < 100 y/o < 2,0 Retraso 1 semana Retraso máximo de 2 semanas (el próximo ciclo debe comenzar el día 35 para permanecer en el estudio)

   Esquema de reducción de dosis Primera reducción Segunda reducción Tercera reducción Carboplatino AUC 4,5 AUC 4,0 Fuera del estudio Gemcitabina (brazo estándar) 750 mg/m2 (1000 mg/m2 x 75 %) 500 mg/m2 (1000 mg/m2 x 50 %) Fuera del estudio Infusión Gemcitabina 75 % de la duración de la Fase II 50 % de la duración de la infusión anterior Fuera del estudio

   5.2.3.3 Modificaciones de dosis por toxicidad no hematológica

   Cualquier toxicidad no hematológica de grado 3 o 4, excepto náuseas y vómitos y fatiga y transaminitis reversible, hará que el paciente deje de estudiar.

   La toxicidad no hematológica debe ser inferior al grado 2 antes de pasar al siguiente ciclo. Si son superiores al grado 2, el tratamiento se retrasa 1 semana. El tratamiento puede retrasarse un máximo de 2 semanas.

   5.2.4 Duración del tratamiento

   Los pacientes que respondan recibirán hasta seis ciclos de quimioterapia.

   Después de completar o retirar el tratamiento, los pacientes pueden continuar recibiendo tratamiento adicional a discreción de su médico.

   Evaluaciones de detección

   Las siguientes investigaciones de detección deben realizarse dentro de los 28 días del día 1 del ciclo 1:

   • Estadificación completa y documentación del estado del tumor: radiografía de tórax inicial, tomografía computarizada de tórax, abdomen, cerebro y gammagrafía ósea si está clínicamente indicado.

   Las siguientes evaluaciones e investigaciones de detección deben realizarse dentro de los 14 días posteriores a la primera dosis de la terapia e incluyen lo siguiente:

   • Consentir

   • Historial médico completo, incluye detalles de síntomas, tratamientos previos, cualquier toxicidad residual, condiciones médicas concomitantes y medicamentos

   • Exámenes físicos, incluida la documentación de todas las lesiones palpables, signos vitales, peso corporal y altura, y KPS.

   • Documentación de la(s) lesión(es) indicador(es) que incluya la fecha de evaluación, descripción del sitio de la lesión, dimensiones y tipo de estudio de diagnóstico para seguir la lesión. Se debe utilizar el mismo método de diagnóstico durante todo el estudio para evaluar una lesión.

   Las siguientes pruebas deben realizarse dentro de los 7 días posteriores a la primera dosis de la terapia e incluyen lo siguiente:

   • Cuenta llena de sangre
   • Electrolitos séricos y enzimas hepáticas, calcio total y magnesio
   • Prueba de embarazo en suero, si corresponde
   • Análisis de orina con tira reactiva: si la tira reactiva es positiva para proteínas o sangre, se requiere un examen microscópico completo

   8.3 Evaluación durante el tratamiento

   Antes del día 1 de cada ciclo

   • Historia y examen físico

   • Evaluar y registrar las toxicidades del curso anterior. Asigne los grados de toxicidad apropiados (consulte el Apéndice 4).

   • Registrar todos los medicamentos tomados desde el último ciclo.

   • Medición del peso para volver a calcular el área de superficie corporal y el aclaramiento de creatinina

   • Evaluación de los síntomas de la enfermedad (el cuestionario de calidad de vida debe ser administrado y completado por el paciente antes de la evaluación por parte del investigador).

   • Evaluación del estado de desempeño
   • Hemograma completo, electrolitos y enzimas hepáticas (si los niveles del día 15 son anormales).
   • Análisis de orina con tira reactiva, si el resultado inicial es anormal
   • Las mediciones clínicas del tumor deben obtenerse antes de cada ciclo de tratamiento.
   • Las mediciones tumorales radiográficas deben obtenerse después de cada 2 ciclos de tratamiento.
   • Modificar la dosis del próximo ciclo si es necesario (ver sección 5.2.3).

   Evaluación del día 8

   • Cuenta llena de sangre

   Evaluación del día 15

   • Hemograma completo, electrolitos y enzimas hepáticas

   8.4 Evaluación de la respuesta

   Los pacientes serán evaluables para la respuesta después de 2 ciclos de terapia. Las mediciones clínicas del tumor deben realizarse antes de cada ciclo de tratamiento. Las mediciones tumorales radiográficas deben obtenerse después de cada 2 ciclos de tratamiento.

   Si un paciente cumple los criterios de respuesta (consulte la sección 7) para RC, PR o SD por primera vez, se realizará otra evaluación clínica y radiográfica del tumor 4 semanas o más después para documentar que la respuesta ha durado al menos 4 semanas.

   La evaluación clínica del tumor después de cada ciclo y la respuesta radiográfica del tumor después de cada 2 ciclos continuarán hasta la finalización del tratamiento o el retiro del paciente.

   8.5 Seguimiento posterior al tratamiento

   Los pacientes que respondan serán revisados ​​cada 2 meses después de completar la quimioterapia. La valoración clínica del tumor se realizará 2 veces al mes. La evaluación radiográfica del tumor se realizará cada 4 meses. Estos continuarán hasta que se documente la progresión de la enfermedad.

   Los pacientes que nunca tuvieron una respuesta y los pacientes con progresión de la enfermedad después de una respuesta previamente documentada serán seguidos cada 3 meses para obtener datos de supervivencia.

9. FINALIZACIÓN DEL TRATAMIENTO Y RETIRADA

Se considerará que un paciente ha completado el tratamiento si:

• El paciente ha completado 6 ciclos de terapia.
• El paciente tiene una RC confirmada o una RP confirmada y recibió al menos 4 ciclos de terapia y el investigador considera que no está indicada una terapia adicional.
• El paciente mantuvo un estado SD durante al menos 8 semanas de tratamiento y recibió al menos 2 ciclos de tratamiento.
• El paciente tiene EP después de completar al menos un curso completo de tratamiento.
• Un paciente es retirado del estudio debido a una toxicidad inaceptable.

Los pacientes pueden ser retirados del tratamiento por las siguientes razones:

• Experiencia adversa, incluyendo enfermedades intercurrentes o toxicidad inaceptable.
• Si el médico tratante cree que un cambio de terapia sería lo mejor para el paciente.
• Violación del protocolo (incluido el incumplimiento).
• Retirada del paciente a petición suya, por motivos distintos a los anteriores.
• Pérdida de seguimiento.

Todos los pacientes serán seguidos por el estado de la enfermedad y la supervivencia hasta la muerte. 10 EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE VIDA (QoL)

Es fundamental explicarle al paciente que la evaluación de la calidad de vida es una parte importante del ensayo y que todas las secciones deben responderse incluso si el paciente las considera irrelevantes. Se debe enfatizar que completar estos formularios ayuda a los médicos a obtener más información sobre los efectos del tratamiento en el bienestar de los pacientes.

Se debe designar a una persona de contacto designada que no sea el médico responsable que atiende al paciente en el contexto del ensayo para que asuma la responsabilidad de la administración, recopilación y verificación del cuestionario EORTC QLQ-C30 y QLQ-LC13 completado. El cuestionario debe tomarse antes de la consulta con el médico, de acuerdo con las pautas de la EORTC para la evaluación de la calidad de vida. Deben verificarse para asegurarse de que todas las preguntas hayan sido respondidas; si es necesario, vuelva con el paciente inmediatamente y pídale que rellene los elementos que falten. Si se pierde una evaluación debido a una falla administrativa, se debe contactar al paciente por teléfono o carta y se debe hacer un arreglo para que el cuestionario se responda dentro de una semana de la evaluación programada.

El paciente puede completar el cuestionario si es capaz de leer y comprender el idioma del cuestionario. De lo contrario, la persona designada para administrar la CV debe leer las preguntas tal como están escritas, en el idioma que el paciente entienda, y registrar la respuesta a cada pregunta sin prejuzgar su respuesta. El modo de entrega debe anotarse en el cuestionario.

11. PROCEDIMIENTO DE ALEATORIZACIÓN

Los participantes del estudio serán asignados al azar para recibir gemcitabina en infusión convencional de 30 minutos o infusión prolongada, ambas en combinación con carboplatino.

11.1 Estratificación

La aleatorización estratificada se realizará mediante el método de minimización en función de los siguientes factores:

(i) Centro (Hospital Universitario Nacional, Centro del Cáncer de Sídney, Centro Médico Internacional Johns Hopkins-NUH) (ii) Estado funcional de Karnofsky (90 - 100 % frente a 70 - 80 %) (iii) Estadio de la enfermedad (IIIB frente a IV)

11.2 Registro

Los pacientes participarán en el ensayo mediante una llamada telefónica a la Unidad de Investigación de Ensayos Clínicos y Epidemiología (CTERU) del Consejo Nacional de Investigación Médica (NMRC), Singapur (+65 220-1292) entre las 08.30 y las 17.30 horas de lunes a viernes, y de 08.30 a sábado a las 12:30 horas (hora de Singapur), o por fax (+65 220-1485), indicando que el paciente debe ingresar al ensayo CTRG L08 o SQLU02.

Se debe obtener el consentimiento informado por escrito para ingresar al estudio antes de la aleatorización. Se verificarán todos los criterios de elegibilidad y el formulario de consentimiento, y se indicarán los factores de estratificación antes de asignar el tratamiento. El paciente será aleatorizado para recibir gemcitabina en infusión larga (L) o gemcitabina en infusión corta de 30 minutos (S) y se le asignará un número de ensayo. El diseño implicará la asignación equitativa de pacientes a los dos tratamientos. Se enviará un fax de confirmación al investigador.

12. CONSIDERACIONES ESTADÍSTICAS

El cálculo del tamaño de la muestra se lleva a cabo con base en el criterio de la teoría de la selección estadística como se detalla en Simon et al (62) y Gibbons et al (63). Suponiendo una probabilidad del 90 % de seleccionar correctamente el mejor tratamiento y anticipando una tasa de respuesta inicial del 40 %, para detectar una superioridad del 15 % del mejor tratamiento sobre el otro, se requeriría un tamaño de prueba de 37 pacientes por grupo de tratamiento. El objetivo de acumulación total sería, por lo tanto, de 74 pacientes.

13. ANÁLISIS ESTADÍSTICOS

El análisis estadístico de todos los criterios de valoración del estudio se realizará por intención de tratar. En caso de pérdida durante el seguimiento, los pacientes seguirán estando incluidos en el análisis mientras estén bajo observación. La comparabilidad inherente de los resultados en este diseño aleatorizado de fase II que usa la teoría de la selección estadística asegura que los dos tratamientos se pueden clasificar de manera confiable cuando se obtienen grandes diferencias.

La mejor respuesta se utilizará en el análisis de la respuesta tumoral objetiva. En el caso de evento adverso, cuando se hayan producido múltiples eventos del mismo tipo en un paciente, solo se documentará el grado máximo para el análisis. Las tasas de respuesta tumoral y las toxicidades entre los grupos de tratamiento se compararán de forma descriptiva utilizando estimaciones de proporciones.

La duración de la respuesta y el tiempo de respuesta para los pacientes que responden se evaluarán mediante estadísticas descriptivas apropiadas. La evaluación de la supervivencia libre de progresión y global se realizará mediante la técnica de Kaplan-Meier al año de seguimiento. En el caso de supervivencia libre de progresión, los pacientes cuya enfermedad no haya progresado serán censurados en la última fecha conocida de estar vivos. De manera similar, el análisis de la supervivencia global censura a los pacientes que se pierden durante el seguimiento o que seguían vivos en la última fecha en que se sabía que estaban vivos.

Para cada dimensión de la calidad de vida, los cambios en las puntuaciones a lo largo del tiempo se compararán entre los brazos de tratamiento mediante una representación gráfica adecuada o estadísticas descriptivas.

No se planea ningún análisis intermedio para este ensayo aleatorizado de fase II.

14. CONSIDERACIONES ÉTICAS

14.1 IRB/Comité de ética

Antes del inicio del estudio, el protocolo se presentará para su revisión y aprobación por parte del hospital y el comité de ética e investigación del Ministerio de Salud o un grupo equivalente. Se debe obtener la aprobación del protocolo y el consentimiento informado.

14.2 Información del paciente

El médico responsable informará al paciente sobre los antecedentes y conocimientos actuales del tratamiento en estudio con especial referencia a la actividad y toxicidad conocidas. Se informará al paciente sobre la naturaleza investigativa de este tratamiento y, en particular, sobre el proceso de aleatorización involucrado en este estudio. Se informará al paciente de su derecho a retirarse del estudio en cualquier momento sin penalización alguna con respecto a la continuación de la atención en esta institución y por los mismos médicos que él elija. Antes de la acumulación, todos los pacientes firmarán un formulario de consentimiento informado por escrito.

14.3 Consentimiento informado

El consentimiento informado debe cumplir con los requisitos de la última revisión de la Declaración de Helsinki y las normas y directrices aplicables, como las Buenas Prácticas Clínicas (Singapur).

El estudio se explicará completamente a cada posible candidato y el sujeto debe dar su consentimiento firmando y fechando el formulario de consentimiento.

Se debe obtener el consentimiento antes de realizar cualquier procedimiento requerido por el protocolo, incluidos los procedimientos que no forman parte de la atención normal del paciente.

Niveles plasmáticos de dFdC y dFdU

Se extraerán diez mililitros de sangre a las 0 horas (línea de base), 10 minutos, 30 minutos, 10 minutos antes del final de la infusión y 30 minutos, 1 hora, 2 horas después del final de la infusión. La sangre se extraerá en tubos de 10 ml (con tapa verde) que contienen heparina y 5 micromol de tetrahidrouridina. A continuación, los tubos se centrifugan a 3300 rpm durante 15 minutos y el plasma sobrenadante se transfiere a tubos simples (con la parte superior roja) para su almacenamiento inmediato a -80 °C. Las muestras se etiquetarán con el nombre del paciente, número de identificación, fecha, hora exacta de la muestra y número de protocolo. Un formulario farmacocinético acompañará las muestras de plasma al laboratorio de Farmacología en el Departamento de Farmacología de la Universidad Nacional de Singapur, c/o Prof Lee How Sung.

Los niveles de DFdC y dFdU en plasma se medirán mediante HPLC de fase inversa, como describe Grunewald (22). Brevemente, se inyectan de 20 microl a 50 microl de plasma en una columna analítica C18 mBondapak (Waters Associates, Inc.). Los componentes se separarán con una fase móvil que consiste en un gradiente lineal de 30 minutos que comienza con la solución A al 100 % (acetato de amonio 0,5 M, pH = 6,8) y finaliza con la solución B al 60 % (50 % de metanol en agua desionizada). El caudal es de 1,5 ml/min. Las longitudes de onda de detección son 275 nm y 262 nm para dFdC y dFdU, respectivamente.

16.2 Niveles intracelulares de dFdCTP

Se recolectarán muestras de sangre para analizar el dFdCTP intracelular. Solo se analizarán dFdCTP en 3 muestras por paciente, obtenidas 10 minutos después del inicio y 10 minutos antes del final de la infusión de gemcitabina, y una en el medio de la infusión.

Primero se separa el plasma de la sangre por centrifugación a 3300 rpm durante 20 minutos. A continuación, las células mononucleares se aíslan mediante centrifugación en gradiente de densidad de Ficoll-Hypaque y los trifosfatos de desoxirribonucleósido se extraen con 0,4 NHClO4, y el material insoluble en ácido se elimina mediante centrifugación. El sobrenadante luego se neutraliza cuidadosamente a pH 7 con hidróxido de potasio y el KClO4 precipitado luego se elimina por centrifugación. A continuación, se utiliza un método de cromatografía líquida de alto rendimiento de intercambio iónico para separar y cuantificar el dFdCTP.

17. ADMINISTRACIÓN DEL ESTUDIO

17.1 Responsabilidad por las drogas

Eli Lilly suministrará existencias de gemcitabina para fines de prueba, y todos estos viales se contabilizarán en la farmacia del sitio.

17.2 Mantenimiento de registros de pacientes

Los formularios de informes clínicos de CTRG se utilizarán para registrar los datos de este estudio. Todos los formularios de informes clínicos de pacientes se enviarán por fax a la oficina de CTRG (+65 777-5545). En la oficina de CTRG se mantendrá una copia del formulario de informe de elegibilidad de cada paciente, el formulario de informe de aleatorización (para la fase II), el cronograma del estudio, los formularios de consentimiento, los informes de laboratorio y radiológicos y la evaluación de calidad de vida. Todos los registros se conservarán durante un período de 6 años a partir de la fecha de cierre del estudio de acuerdo con las pautas de BPC de Singapur.