Fase I/II forsøg med infusionsgemcitabin i kombination med carboplatin i kemonisk ikke-småcellet karcinom

Undersøgelsens mål:

1. at sammenligne responsraten for carboplatin og konstanthastighedsinfusion af gemcitabin med responsraten for gemcitabin givet i standard 30-minutters infusionen
2. at sammenligne toksicitetsoplevelsen i begge arme
3. At sammenligne tiden til progression i begge undersøgelsesarme og den samlede overlevelse

4. At sammenligne livskvaliteten på begge undersøgelsesarme ved hjælp af EORTC QLQ-C30 og QLQ-LC13.

   Inklusionskriterier

   • Histologisk eller cytologisk bekræftet NSCLC.
   • Trin IIIB uegnet til radikal stråling (f. med cytologisk påvist malign effusion) eller stadium IV-sygdom som defineret af AJCC-kriterierne (se bilag 1).
   • Karnofsky præstationsstatus 70 % eller højere (se bilag 2).
   • Tilstedeværelse af mindst én todimensionelt eller endimensionelt målbar, ikke-CNS, indikatorlæsion defineret ved radiologisk undersøgelse eller fysisk undersøgelse.
   • Ingen tidligere kemoterapi for fremskreden sygdom. Forudgående neoadjuverende eller adjuverende kemoterapi eller kemoterapi givet samtidig med strålebehandling for ikke-metastatisk sygdom er tilladt, hvis den sidste dosis blev givet 6 måneder eller mere før studiestart.
   • Patienter med tilbagevendende sygdom efter primær operation og/eller strålebehandling vil være berettiget.
   • For patienter med tidligere strålebehandling må indikatorlæsionen/-erne ikke være inden for tidligere strålefelt. Den sidste dosis strålebehandling bør være mindst 3 uger før studiestart. Den samlede strålebehandling, der modtages, bør ikke være mere end 30 % af knoglemarven.
   • Screening laboratoriekriterier:

   WBC-tal > 3500/mikrol Neutrofiler > 2000/mikrol Trombocyttal > 100.000/mikrol Hæmoglobin > 9 g/dl (transfusion tilladt)

   Serumkreatinin < 133 mikromol/l, eller kreatininclearance > 30 ml/min, baseret på Cockcroft-formlen (se afsnit 5.1.1)

   Bilirubin < 1,5 x øvre grænse for normal ALAT/AST < 2 x øvre normalgrænse, hvis levermetastaser er fraværende < 5 x øvre normalgrænse, hvis levermetastaser er til stede

   • I alderen 18 år og derover.
   • Forventet levetid > 3 måneder.
   • Skriftligt informeret samtykke.

   4.2 Eksklusionskriterier

   Følgende forhold vil gøre patienter ude af stand til at deltage i denne undersøgelse:

   • Patienter med kun evaluerbar sygdom.
   • Aktiv ukontrolleret infektion.
   • Gravide eller ammende kvinder.
   • Kvinder i den fødedygtige alder, som ikke er villige til at undgå graviditet, i hele undersøgelsens varighed.
   • Tilstedeværelse af underliggende medicinske tilstande, som efter efterforskernes mening ville gøre patienten uegnet til behandling.
   • Samtidige maligniteter eller tidligere maligniteter andre end NSCLC inden for de sidste 5 år, med undtagelse af tilstrækkeligt behandlet basal- eller pladecellecarcinom i huden, carcinom-in-situ i livmoderhalsen eller lavgradig prostatacancer i stadium A.
   • Patienter med CNS og/eller leptomeningeale metastaser; medmindre den er asymptomatisk og ikke får kortikosteroidbehandling.

   4.3 Inklusions- og eksklusionskriterier for fase I-patienter

   Eksklusionskriterierne er de samme som ovenfor.

   Inklusionskriterierne er de samme som ovenfor bortset fra følgende grupper af patienter, som er tilladt i fase I-studiet:

   • Kun patienter med evaluerbar sygdom (uden målbare læsioner).
   • Patienter med én (og kun én) linje af kemoterapi til fremskreden NSCLC, eksklusive patienter, der tidligere havde fået platinium og/eller gemcitabin.
   • Patienter med indikatorlæsioner i tidligere strålefelt.

   Målbarhed af indikatorlæsioner

   • Målbar: Læsionen kan måles nøjagtigt i mindst én dimension (længste diameter, der skal registreres) som > 20 mm med konventionelle teknikker eller som > 10 mm med spiral CT-scanning.
   • Ikke-målbare: Alle andre læsioner inklusive små læsioner (længste diameter <20 mm med konventionelle teknikker eller < 10 mm med spiral CT-scanning) og virkelig ikke-målbare læsioner. Læsioner, der anses for at være virkelig ikke-målbare, omfatter følgende: knoglelæsioner, leptomeningeal sygdom, ascites, pleural/cutis/pulmonis, abdominale masser, der ikke er bekræftet og efterfulgt af billeddannelsesteknikker, og cystiske læsioner.
   • Mållæsioner: Alle målbare læsioner op til et maksimum på 5 læsioner pr. organ og 10 læsioner i alt, der er repræsentative for alle involverede organer, bør identificeres som mållæsioner og registreres og måles ved baseline. Mållæsioner bør udvælges på basis af deres størrelse (læsion med den længste diameter) og deres egnethed til nøjagtige målinger (enten ved billeddannelsesteknikker eller klinisk). En sum af den længste diameter (LD) for alle mållæsioner vil blive beregnet og rapporteret som baseline sum LD. Baseline summen LD bruges som reference til at karakterisere den objektive tumorrespons. Hvis der er > 10 målbare læsioner, vil de, der ikke er udvalgt som mållæsioner, blive betragtet sammen med ikke-målbar sygdom som ikke-mållæsioner.
   • Ikke-mållæsioner: Alle ikke-målbare læsioner (eller sygdomssteder) plus eventuelle målbare læsioner ud over de 10, der er angivet som mållæsioner. Målinger er ikke påkrævet, men disse læsioner skal noteres ved baseline og skal følges som "til stede" eller "fraværende".
   • Enhver tumormåling, der udelukkende er baseret på fysisk undersøgelse, bør verificeres af en anden læge.
   • Den samme billeddiagnostiske metode skal anvendes gennem hele undersøgelsen for at evaluere læsionerne.

5. BEHANDLINGSPLAN

   5.1 Fase I undersøgelse

   5.1.1 Carboplatin

   Startdosis carboplatin gives i en fast dosis ved en mål-AUC på 5 over 1 time på dag 1 i begge dele af undersøgelsen. Carboplatin vil blive givet før gemcitabin til alle patienter. Dosis gentages hver 21. dag og vil blive beregnet ved hjælp af Calvert-formlen:

   Dosis af carboplatin (mg) = [beregnet glomerulær filtrationshastighed (GFR) + 25] x 5

   GFR vil blive beregnet i henhold til Cockroft-Gault formlen:

   GFR (ml/min) = (140 - alder) x kropsvægt (i kg) / 0,81 x serumkreatinin (mikromol/l)

   For kvinder er korrektionsfaktoren 0,85 (x beregnet GFR)

   5.1.2 Infusionsgemcitabin

   Infusionsgemcitabin gives med en konstant hastighed på 10 mg/m2 pr. minut til alle patienter på dag 1 og 8, cyklussen gentages hver 21. dag. Dosiseskalering opnås ved at øge varigheden af ​​infusionen. Den samlede dosis gemcitabin rekonstitueres i 500 ml normalt saltvand og infunderes gennem en perifer eller central venelinje.

   5.2.1 Behandlingsforløb

   Forud for påbegyndelse af behandling vil kvalificerede patienter blive randomiseret til at modtage gemcitabin givet enten som standard korte 30 minutters infusion eller forlænget infusion med konstant hastighed over varigheden bestemt i fase I-studiet. Alle patienter i begge arme vil modtage carboplatin i en dosis på AUC på 5 over 1 time.

   Standard arm

   Carboplatin AUC på 5 over 1 time, dag 1, efterfulgt af Gemcitabin 1000 mg/m2 over 30 minutter, dag 1 og 8. Cyklus gentages hver 21. dag

   Studiearm

   Carboplatin AUC på 5 over 1 time, dag 1, efterfulgt af Gemcitabin 10 mg/m2/min ved MTD, dag 1 og 8. Cyklus gentages hver 21. dag

   Understøttende behandling

   • Alle patienter bør modtage præ-medicin for at forhindre kvalme og opkastning i henhold til lokal politik.
   • Ingen profylaktiske vækstfaktorer er tilladt.
   • Vækstfaktor er kun tilladt i redningsindstillingen, f.eks. forlænget grad 4 neutropeni i mere end 7 dage eller for febril neutropeni.

   5.2.2 Dosering i cyklus 2 og efterfølgende cyklusser

   Den næste behandlingscyklus begynder efter planen

   • Der er ingen tegn på tumorprogression

   • Neutrofiler ~ 2 x 109/L
   • Blodplader ~ 100.000 x 109/l
   • Fravær af grad 2 eller derover ikke-hæmatologisk toksicitet

   5.2.3 Dosisændringer

   5.2.3.1 Generelle regler

   • Ingen intra-patient dosiseskalering er tilladt.
   • Enhver patient, der har behov for en dosisreduktion, vil ikke være berettiget til nogen dosiseskalering i resten af ​​undersøgelsen.
   • Behandlingen kan forsinkes op til dag 35 for at give en patient tilstrækkelig tid til at komme sig fra behandlingsrelateret toksicitet. Enhver patient, der ikke kan fortsætte til næste cyklus på dag 35, vil blive afbrudt fra undersøgelsen.

   5.2.3.2 Dosisændringer baseret på hæmatologisk toksicitet

   Justering baseret på dag 8 antal Blodplader (x 109/l) ANC (x 109/l) Handling > 75 og > 1,0 Fortsæt med dag 8 dosis > 75 og 0,5 - 1,0 Fortsæt med reduceret dosis 50 - 75 og ~ 0,5 Fortsæt med reduceret dosis < 50 og/eller < 0,5 Udelad dosis Når dosis på dag 8 reduceres, vil den samme reducerede dosis blive brugt til den følgende cyklus.

   Når dosis på dag 8 udelades, er cyklussen afsluttet, og den næste cyklus vil blive planlagt til dag 22 med dosisreduktion.

   Dosisjustering baseret på nadirantal Trombocytter (x 109/l) ANC (x 109/l) Virkning ~ 25 uden blødning og ~ 0,5 eller < 0,5 i < 7 dage Ingen ændring < 25 eller < 50 med blødning og/eller < 0,5 i > 7 dage Dosisreduktion (se nedenfor) Enhver og < 0,5 og feber Dosisreduktion Gentagelse af ovenstående efter 2 dosisreduktioner Off undersøgelse

   Justering baseret på dag 22 antal Blodplader (x 109/l) ANC (x 109/l) Handling

   ~ 100 og > 2,0 Fortsæt med næste cyklus < 100 og/eller < 2,0 Forsinkelse 1 uge Maksimal forsinkelse på 2 uger (næste cyklus skal starte på dag 35 for at forblive på undersøgelsen)

   Dosisreduktionsskema Første reduktion Anden reduktion Tredje reduktion Carboplatin AUC 4,5 AUC 4,0 Off-studie Gemcitabin (standardarm) 750 mg/m2 (1000 mg/m2 x 75%) 500 mg/m2 (1000 mg/m2 x 50%) Off-studie Infusions Gemcitabin 75 % af fase II-varighed 50 % af tidligere infusionsvarighed Off-studie

   5.2.3.3 Dosisændringer for ikke-hæmatologisk toksicitet

   Enhver ikke-hæmatologisk toksicitet af grad 3 eller 4, med undtagelse af kvalme og opkastning og træthed og reversibel transaminitis, vil gøre patienten ude af undersøgelsen.

   Ikke-hæmatologisk toksicitet skal være mindre end grad 2, før du fortsætter til næste cyklus. Hvis de er højere end grad 2, udskydes behandlingen i 1 uge. Behandlingen kan højst udskydes i 2 uger.

   5.2.4 Behandlingens varighed

   Reagerende patienter vil modtage op til seks cyklusser med kemoterapi.

   Efter afslutning eller seponering af behandlingen kan patienter fortsætte med at modtage yderligere behandling efter lægens skøn.

   Screeningsevalueringer

   Følgende screeningsundersøgelser skal udføres inden for 28 dage efter dag 1 i cyklus 1:

   • Komplet stadieinddeling og dokumentation af tumorstatus - baseline røntgen af ​​thorax, CT thorax, abdomen, hjerne og knoglescanning, hvis det er klinisk indiceret.

   Følgende screeningsevalueringer og -undersøgelser skal udføres inden for 14 dage efter den første dosis af behandlingen og omfatter følgende:

   • Samtykke

   • Fuldstændig sygehistorie, inkludere detaljer om symptomer, tidligere behandlinger, eventuel resterende toksicitet, samtidige medicinske tilstande og medicin

   • Fysiske undersøgelser, herunder dokumentation af alle palpable læsioner, vitale tegn, kropsvægt og højde og KPS.

   • Dokumentation af indikatorlæsioner for at inkludere vurderingsdato, beskrivelse af læsionssted, dimensioner og type diagnostisk undersøgelse, der skal følge læsionen. Den samme diagnostiske metode skal bruges gennem hele undersøgelsen for at evaluere en læsion.

   Følgende test skal udføres inden for 7 dage efter den første dosis af behandlingen og omfatter følgende:

   • Fuld blodtal
   • Serumelektrolytter og leverenzymer, total calcium og magnesium
   • Serumgraviditetstest, hvis relevant
   • Dipstick urinalyse - hvis oliepinden er positiv for protein eller blod, kræves en komplet mikroskopisk undersøgelse

   8.3 Evaluering under behandlingen

   Før dag 1 i hver cyklus

   • Anamnese og fysisk undersøgelse

   • Vurdere og registrere toksiciteter fra tidligere kursus. Tildel passende toksicitetsgrader (se tillæg 4).

   • Registrer al medicin taget siden sidste cyklus.

   • Vægtmåling til genberegning af kropsoverfladeareal og kreatininclearance

   • Vurdering af symptomer på sygdom (QoL-spørgeskema bør gives og udfyldes af patienten før vurdering af investigator).

   • Vurdering af præstationsstatus
   • Fuldt blodtal, elektrolytter og leverenzymer (hvis dag 15-niveauer er unormale).
   • Analyse af urinstik, hvis baseline-resultatet er unormalt
   • Kliniske tumormålinger bør foretages før hver behandlingscyklus
   • Radiografiske tumormålinger bør foretages efter hver 2 behandlingscyklusser.
   • Ændr dosis af den næste cyklus om nødvendigt (se afsnit 5.2.3).

   Dag 8 vurdering

   • Fuld blodtælling

   Dag 15 vurdering

   • Fuldt blodtal, elektrolytter og leverenzymer

   8.4 Evaluering af svar

   Patienter vil kunne evalueres for respons efter 2 behandlingscyklusser. Kliniske tumormålinger bør udføres før hver behandlingscyklus. Radiografiske tumormålinger bør foretages efter hver 2 behandlingscyklusser.

   Hvis en patient opfylder responskriterierne (se afsnit 7) for CR, PR eller SD for første gang, vil en anden klinisk og radiografisk tumorvurdering blive udført 4 eller flere uger senere for at dokumentere, at responsen har varet mindst 4 uger.

   Klinisk tumorvurdering efter hver cyklus og radiografisk tumorrespons efter hver 2 cyklusser vil fortsætte indtil afslutning af behandlingen eller patientens seponering.

   8.5 Efterbehandlingsopfølgning

   Responderende patienter vil blive gennemgået hver anden måned efter afslutning af kemoterapi. Klinisk tumorvurdering vil blive udført 2 månedligt. Radiografisk tumorvurdering vil blive udført hver 4. måned. Disse vil fortsætte, indtil sygdomsprogression er dokumenteret.

   Patienter, der aldrig har haft respons, og patienter med sygdomsprogression efter et tidligere dokumenteret respons vil blive fulgt hver 3. måned for overlevelsesdata.

9. BEHANDLING AFSLUTNING OG TILBAGETRÆKNING

En patient vil blive anset for at have afsluttet behandlingen, hvis:

• Patienten har gennemført 6 behandlingscyklusser.
• Patienten har en bekræftet CR eller bekræftet PR og har modtaget mindst 4 behandlingscyklusser, og investigator føler ikke, at yderligere behandling er indiceret.
• Patienten opretholdt en status SD i mindst 8 uger under behandling og modtog mindst 2 behandlingscyklusser.
• Patienten har PD efter at have afsluttet mindst ét ​​fuldt behandlingsforløb.
• En patient fjernes fra undersøgelsen på grund af uacceptabel toksicitet.

Patienter kan blive trukket tilbage fra behandlingen af ​​følgende årsager:

• Uønsket oplevelse, herunder interkurrent sygdom eller uacceptabel toksicitet.
• Hvis den behandlende læge mener, at en ændring af behandlingen vil være i patientens bedste interesse.
• Protokolbrud (herunder manglende overholdelse).
• Patienttilbagetrækning på hans/hendes anmodning af andre årsager end ovenstående.
• Tabte til opfølgning.

Alle patienter vil blive fulgt for sygdomsstatus og overlevelse indtil døden. 10. VURDERING AF LIVSKVALITET (QoL).

Det er væsentligt at forklare patienten, at QoL-vurderingen er en vigtig del af forsøget, og at alle afsnit skal besvares, selvom patienten føler, at de er irrelevante. Det skal understreges, at udfyldelsen af ​​disse skemaer hjælper lægerne med at finde ud af mere om behandlingens effekt på patienternes velbefindende.

En anden navngiven kontaktperson end den ansvarlige kliniker, der administrerer patienten i forbindelse med forsøget, skal udpeges til at tage ansvar for administration, indsamling og kontrol af det udfyldte EORTC QLQ-C30 og QLQ-LC13 spørgeskema. Spørgeskemaet skal udfyldes før konsultation med klinikeren i henhold til EORTC-retningslinjerne for vurdering af QoL. De bør kontrolleres for at sikre, at alle spørgsmål er blevet besvaret; om nødvendigt gå tilbage til patienten med det samme og bed ham eller hende om at udfylde eventuelle manglende punkter. Hvis en vurdering udebliver på grund af administrativ svigt, skal patienten kontaktes telefonisk eller brev, og der bør aftales, at spørgeskemaet udfyldes inden for en uge efter den planlagte vurdering.

Spørgeskemaet kan udfyldes af patienten, hvis han/hun er i stand til at læse og forstå spørgeskemaets sprog. Ellers bør den navngivne person til administration af QoL læse spørgsmålene op som skrevet, på det sprog, patienten forstår, og registrere svaret på hvert spørgsmål uden at påvirke hans/hendes svar. Leveringsmåden skal noteres i spørgeskemaet.

11. RANDOMISERINGSPROCEDURE

Studiedeltagere vil blive tilfældigt tildelt til at modtage enten gemcitabin givet i den konventionelle 30 minutters infusion eller langvarig infusion, begge i kombination med carboplatin.

11.1 Stratificering

Stratificeret randomisering vil blive udført ved hjælp af minimeringsmetoden baseret på følgende faktorer:

(i) Center (National University Hospital, Sydney Cancer Centre, Johns Hopkins-NUH International Medical Centre) (ii) Karnofsky præstationsstatus (90 - 100 % vs. 70 - 80 %) (iii) Stadium af sygdom (IIIB vs IV)

11.2 Registrering

Patienter vil blive inddraget i forsøget ved et telefonopkald til National Medical Research Council (NMRC) Clinical Trials & Epidemiology Research Unit (CTERU), Singapore (+65 220-1292) mellem 0830 til 1730 timer mandag til fredag ​​og 0830 til 1230 timer lørdag (Singapore-tid), eller pr. fax (+65 220-1485), med angivelse af, at patienten skal indgå i CTRG L08- eller SQLU02-forsøget.

Informeret skriftligt samtykke til deltagelse i undersøgelsen bør indhentes før randomisering. Alle berettigelseskriterier og samtykkeformular vil blive kontrolleret, og stratifikationsfaktorerne angivet, før behandlingen tildeles. Patienten vil blive randomiseret til lang infusionsgemcitabin (L) eller 30 minutters kort infusionsgemcitabin (S) og tildelt et forsøgsnummer. Designet vil involvere ligelig fordeling af patienter til de to behandlinger. Bekræftelsesfax vil blive sendt til efterforskeren.

12. STATISTISKE OVERVEJELSER

Stikprøvestørrelsesberegningen udføres baseret på det statistiske udvælgelsesteorikriterium som beskrevet i Simon et al (62) og Gibbons et al (63). Forudsat en 90 % sandsynlighed for korrekt udvælgelse af den bedste behandling og forudsigelse af en baseline responsrate på 40 %, så for at detektere en 15 % overlegenhed af den bedste behandling i forhold til den anden, ville det være nødvendigt med en forsøgsstørrelse på 37 patienter pr. behandlingsarm. Det samlede optjeningsmål ville således være 74 patienter.

13. STATISTISKE ANALYSER

Statistisk analyse af alle undersøgelsens endepunkter vil blive udført på en intention-to-treat-basis. I tilfælde af tabt til opfølgning vil patienterne stadig indgå i analysen i den varighed, de observeres. Den iboende sammenlignelighed af resultater i dette randomiserede fase II-design ved hjælp af den statistiske selektionsteori sikrer, at de to behandlinger kan rangeres pålideligt, når der opnås store forskelle.

Det bedste respons vil blive brugt i analysen af ​​objektiv tumorrespons. I tilfælde af uønsket hændelse, hvor der er opstået flere hændelser af samme art hos en patient, vil kun den maksimale karakter blive dokumenteret til analysen. Tumorresponsraterne og toksiciteten mellem behandlingsgrupper vil blive sammenlignet beskrivende ved brug af skøn over proportioner.

Responsvarigheden og tiden til respons for responderende patienter vil blive vurderet ved hjælp af passende beskrivende statistik. Evalueringen af ​​progressionsfri og samlet overlevelse vil blive udført ved hjælp af Kaplan-Meier-teknikken ved 1-års opfølgning. I tilfælde af progressionsfri overlevelse vil patienter, hvis sygdom ikke er progredieret, blive censureret på den dato, der sidst vides at være i live. På samme måde censurerer analysen af ​​overordnet overlevelse patienter, der er tabt til opfølgning, eller som forblev i live på den dato, man sidst vidste, var i live.

For hver QoL-dimension vil ændringer i score over tid blive sammenlignet mellem behandlingsarme ved hjælp af passende grafisk repræsentation eller beskrivende statistik.

Der er ikke planlagt nogen interimanalyse for dette randomiserede fase II-forsøg.

14. ETISKE OVERVEJELSER

14.1 IRB/Etisk komité

Inden studiestart vil protokollen blive forelagt til gennemgang og godkendelse af hospitalet og sundhedsministeriets forsknings- og etikudvalg eller tilsvarende gruppe. Godkendelse af protokollen og informeret samtykke skal indhentes.

14.2 Patientoplysninger

Den ansvarlige læge vil informere patienten om baggrunden og den aktuelle viden om den undersøgte behandling med særlig henvisning til kendt aktivitet og toksicitet. Patienten vil blive fortalt om den undersøgende karakter af denne behandling og især randomiseringsprocessen involveret i denne undersøgelse. Patienten vil blive informeret om hans eller hendes ret til at trække sig fra undersøgelsen til enhver tid uden nogen form for straf med hensyn til fortsættelse af behandlingen på denne institution og af de samme læger, som han vælger. Inden optjening vil alle patienter underskrive en skriftlig, informeret samtykkeerklæring.

14.3 Informeret samtykke

Informeret samtykke bør opfylde kravet i den seneste revision af Helsinki-erklæringen og eventuelle gældende regler og retningslinjer, såsom god klinisk praksis (Singapore).

Undersøgelsen vil blive fuldstændig forklaret for hver potentiel kandidat, og forsøgspersonen skal give samtykke ved at underskrive og datere samtykkeerklæringen.

Der skal indhentes samtykke, før protokolkrævede procedurer udføres, herunder procedurer, der ikke er en del af normal patientbehandling.

Plasma dFdC og dFdU niveauer

Ti milliliter blod vil blive udtaget efter 0 timer (baseline), 10 minutter, 30 minutter, 10 minutter før afslutningen af ​​infusionen og 30 minutter, 1 time, 2 timer efter afslutningen af ​​infusionen. Blodet vil blive udtaget i 10 ml rør (grøn toppet) indeholdende heparin og 5 mikromol tetrahydrouridin. Rørene centrifugeres derefter ved 3300 rpm i 15 minutter, og supernatantplasmaet overføres derefter til almindelige rør (rød toppet) til øjeblikkelig opbevaring ved -80oC. Prøver vil blive mærket med patientens navn, ID-nummer, dato, nøjagtige tidspunkt for prøven og protokolnummer. En farmakokinetisk formular vil ledsage plasmaprøverne til farmakologilaboratoriet i Department of Pharmacology, National University of Singapore, c/o Prof Lee How Sung.

DFdC og dFdU niveauer i plasma vil blive målt ved hjælp af omvendt fase HPLC, som beskrevet af Grunewald (22). Kort fortalt injiceres 20 mikrol til 50 mikrol plasma på en C18 mBondapak analytisk søjle (Waters Associates, Inc.). Komponenter vil blive adskilt med en mobil fase bestående af en 30 minutters lineær gradient startende med 100 % opløsning A (0,5 M ammoniumacetat, pH = 6,8) og slutter med 60 % opløsning B (50 % methanol i deioniseret vand). Flowhastigheden er på 1,5 ml/min. Detektionsbølgelængder er 275 nm og 262 nm for henholdsvis dFdC og dFdU.

16.2 Intracellulære dFdCTP-niveauer

Blodprøver vil blive indsamlet for at analysere intracellulær dFdCTP. Kun 3 prøver pr. patient, opnået 10 minutter efter starten og 10 minutter før afslutningen af ​​infusionen af ​​gemcitabin, og en i midten af ​​infusionen, vil blive analyseret for dFdCTP.

Plasma separeres først fra blodet ved centrifugering ved 3300 rpm i 20 minutter. Mononukleære celler isoleres derefter ved Ficoll-Hypaque-densitetsgradientcentrifugering, og deoxyribonukleosidtriphosphater ekstraheres med 0,4 NHClO4, og det syreuopløselige materiale fjernes ved centrifugering. Supernatanten neutraliseres derefter forsigtigt til pH 7 med kaliumhydroxid, og det udfældede KClO4 fjernes derefter ved centrifugering. En ionbytter højtydende væskekromatografimetode bruges derefter til at adskille og kvantificere dFdCTP'en.

17. STUDIEADMINISTRATION

17.1 Narkotikaansvar

Lagre af gemcitabin vil blive leveret af Eli Lilly til forsøgsformål, og alle disse hætteglas vil blive behandlet på stedets apotek.

17.2 Vedligeholdelse af patientjournaler

CTRG kliniske rapportformularer vil blive brugt til at registrere data til denne undersøgelse. Alle formularer til kliniske patientrapporter vil blive faxet til CTRG-kontoret (+65 777-5545). En kopi af hver patientberettigelsesrapportformular, randomiseringsrapportformular (for fase II), undersøgelsesplan, samtykkeformularer, laboratorie- og radiologiske rapporter og vurdering af QoL vil blive opbevaret på CTRG-kontoret. Alle optegnelser vil blive opbevaret i en periode på 6 år efter datoen for undersøgelsens lukning i henhold til Singapore GCP-retningslinjer