Sperimentazione di fase I/II della gemcitabina infusionale in combinazione con carboplatino nel carcinoma non a piccole cellule chemonaive

Obiettivi di studio:

1. per confrontare il tasso di risposta di carboplatino e gemcitabina per infusione a velocità costante con il tasso di risposta di gemcitabina somministrato nell'infusione standard di 30 minuti
2. per confrontare l'esperienza di tossicità in entrambi i bracci
3. Per confrontare il tempo alla progressione in entrambi i bracci dello studio e la sopravvivenza globale

4. Confrontare la qualità della vita in entrambi i bracci dello studio utilizzando EORTC QLQ-C30 e QLQ-LC13.

   Criterio di inclusione

   • NSCLC confermato istologicamente o citologicamente.
   • Stadio IIIB inadatto alla radiazione radicalica (es. con versamento maligno accertato citologicamente) o malattia in stadio IV come definito dai criteri AJCC (vedi appendice 1).
   • Karnofsky performance status 70% o superiore (vedi appendice 2).
   • Presenza di almeno una lesione indicatrice bidimensionale o unidimensionale misurabile, non SNC, definita da studio radiologico o esame fisico.
   • Nessuna precedente chemioterapia per malattia avanzata. È consentita una precedente chemioterapia neoadiuvante o adiuvante, o chemioterapia somministrata in concomitanza con la radioterapia per malattia non metastatica, se l'ultima dose è stata somministrata 6 mesi o più prima dell'ingresso nello studio.
   • Saranno ammissibili i pazienti con recidiva di malattia dopo chirurgia primaria e/o radioterapia.
   • Per i pazienti con precedente radioterapia, la/e lesione/i indicatrice/i non devono trovarsi all'interno del precedente campo di radiazioni. L'ultima dose di radioterapia deve essere almeno 3 settimane prima dell'ingresso nello studio. La radioterapia totale ricevuta non deve superare il 30% del midollo osseo.
   • Criteri del laboratorio di screening:

   Conta leucocitaria > 3500/microl Neutrofili > 2000/microl Conta piastrinica > 100.000/microl Emoglobina > 9 g/dl (trasfusione consentita)

   Creatinina sierica < 133 micromol/l, o clearance della creatinina > 30 ml/min, in base alla formula di Cockcroft (vedere paragrafo 5.1.1)

   Bilirubina < 1,5 x limite superiore della norma ALT/AST < 2 x limite superiore della norma se sono assenti metastasi epatiche < 5 x limite superiore della norma se sono presenti metastasi epatiche

   • Dai 18 anni in su.
   • Aspettativa di vita > 3 mesi.
   • Consenso informato scritto.

   4.2 Criteri di esclusione

   Le seguenti condizioni renderanno i pazienti non idonei a partecipare a questo studio:

   • Pazienti con unica malattia valutabile.
   • Infezione attiva incontrollata.
   • Donne in gravidanza o in allattamento.
   • Donne in età fertile che non sono disposte a evitare la gravidanza, per la durata dello studio.
   • Presenza di eventuali condizioni mediche sottostanti che, secondo l'opinione degli investigatori, renderebbero il paziente inadatto al trattamento.
   • Tumori maligni concomitanti o precedenti tumori maligni diversi dal NSCLC negli ultimi 5 anni, ad eccezione di carcinoma a cellule basali o squamose della pelle adeguatamente trattato, carcinoma in situ della cervice o carcinoma della prostata in stadio A di basso grado.
   • Pazienti con metastasi al SNC e/o leptomeningee; a meno che non sia asintomatico e non riceva terapia con corticosteroidi.

   4.3 Criteri di inclusione ed esclusione per i pazienti in fase I

   I criteri di esclusione sono gli stessi di cui sopra.

   I criteri di inclusione sono gli stessi di cui sopra ad eccezione dei seguenti gruppi di pazienti, che sono ammessi nello studio di fase I:

   • Solo pazienti con malattia valutabile (senza lesioni misurabili).
   • Pazienti con una (e una sola) linea di chemioterapia per NSCLC avanzato, esclusi i pazienti che avevano ricevuto in precedenza platino e/o gemcitabina.
   • Pazienti con lesioni indicatrici nel precedente campo di radiazioni.

   Misurabilità delle lesioni indicatore

   • Misurabile: la lesione può essere misurata accuratamente in almeno una dimensione (diametro più lungo da registrare) come > 20 mm con tecniche convenzionali o come > 10 mm con scansione TC spirale.
   • Non misurabili: tutte le altre lesioni comprese le piccole lesioni (diametro più lungo <20 mm con tecniche convenzionali o <10 mm con scansione TC spirale) e lesioni veramente non misurabili. Le lesioni considerate veramente non misurabili includono le seguenti: lesioni ossee, malattia leptomeningea, ascite, masse pleuriche/cutanee/polmonari, masse addominali non confermate e seguite da tecniche di imaging e lesioni cistiche.
   • Lesioni target: tutte le lesioni misurabili fino a un massimo di 5 lesioni per organo e 10 lesioni in totale rappresentative di tutti gli organi coinvolti devono essere identificate come lesioni target ed essere registrate e misurate al basale. Le lesioni target dovrebbero essere selezionate sulla base della loro dimensione (lesione con il diametro più lungo) e della loro idoneità per misurazioni accurate (mediante tecniche di imaging o clinicamente). Verrà calcolata una somma del diametro più lungo (LD) per tutte le lesioni target e riportata come somma di baseline LD. La somma basale LD viene utilizzata come riferimento con cui caratterizzare la risposta obiettiva del tumore. Se ci sono > 10 lesioni misurabili, quelle non selezionate come lesioni bersaglio saranno considerate insieme alla malattia non misurabile come lesioni non bersaglio.
   • Lesioni non target: tutte le lesioni non misurabili (o siti di malattia) più eventuali lesioni misurabili oltre le 10 elencate come lesioni target. Le misurazioni non sono richieste, ma queste lesioni devono essere annotate al basale e devono essere seguite come "presenti" o "assenti".
   • Qualsiasi misurazione del tumore basata esclusivamente sull'esame fisico deve essere verificata da un secondo medico.
   • Lo stesso metodo di diagnostica per immagini deve essere utilizzato durante tutto lo studio per valutare le lesioni.

5. PIANO DI TRATTAMENTO

   5.1 Studio di fase I

   5.1.1 Carboplatino

   La dose iniziale di carboplatino viene somministrata a una dose fissa a un AUC target di 5 nell'arco di 1 ora il giorno 1 in entrambi i bracci dello studio. Il carboplatino verrà somministrato prima della gemcitabina in tutti i pazienti. La dose viene ripetuta ogni 21 giorni e sarà calcolata utilizzando la formula di Calvert:

   Dose di carboplatino (mg) = [velocità di filtrazione glomerulare calcolata (GFR) + 25] x 5

   Il GFR sarà calcolato secondo la formula di Cockroft-Gault:

   GFR (ml/min) = (140 - età) x peso corporeo (in kg) / 0,81 x creatinina sierica (micromol/l)

   Per le donne, il fattore di correzione è 0,85 (x GFR calcolato)

   5.1.2 Gemcitabina infusionale

   La gemcitabina infusionale viene somministrata a una velocità costante di 10 mg/m2 al minuto in tutti i pazienti nei giorni 1 e 8, il ciclo viene ripetuto ogni 21 giorni. L'escalation della dose si ottiene aumentando la durata dell'infusione. La dose totale di gemcitabina viene ricostituita in 500 ml di soluzione fisiologica normale e infusa attraverso una linea venosa periferica o centrale.

   5.2.1 Cicli di trattamento

   Prima di iniziare il trattamento, i pazienti idonei saranno randomizzati a ricevere gemcitabina somministrata nell'infusione breve standard di 30 minuti o nell'infusione prolungata a velocità costante per la durata determinata nello studio di fase I. Tutti i pazienti in entrambi i bracci riceveranno carboplatino a una dose di AUC di 5 nell'arco di 1 ora.

   Braccio standard

   Carboplatino AUC di 5 in 1 ora, giorno 1, seguito da Gemcitabina 1000 mg/m2 in 30 min, giorno 1 e 8 Il ciclo viene ripetuto ogni 21 giorni

   Braccio di studio

   Carboplatino AUC di 5 in 1 ora, giorno 1, seguito da Gemcitabina 10 mg/m2/min alla MTD, giorno 1 e 8 Il ciclo viene ripetuto ogni 21 giorni

   Trattamento di supporto

   • Tutti i pazienti devono ricevere premedicazioni per prevenire nausea e vomito secondo la politica locale.
   • Non sono ammessi fattori di crescita profilattici.
   • Il fattore di crescita è consentito solo nell'ambiente di salvataggio, ad es. neutropenia prolungata di grado 4 per più di 7 giorni o per neutropenia febbrile.

   5.2.2 Dosaggio nel ciclo 2 e cicli successivi

   Il prossimo ciclo di trattamento inizierà nei tempi previsti

   • Non c'è evidenza di progressione tumorale

   • Neutrofili ~ 2 x 109/L
   • Piastrine ~ 100.000 x 109/l
   • Assenza di tossicità non ematologica di grado 2 o superiore

   5.2.3 Modifiche della dose

   5.2.3.1 Regole generali

   • Non è consentita alcuna escalation della dose intra-paziente.
   • Qualsiasi paziente che richieda una riduzione della dose non sarà idoneo per alcun aumento della dose per il resto dello studio.
   • Il trattamento può essere ritardato fino al giorno 35 per consentire al paziente un tempo sufficiente per riprendersi dalla tossicità correlata al trattamento. Qualsiasi paziente che non può procedere al ciclo successivo entro il giorno 35 verrà interrotto dallo studio.

   5.2.3.2 Modifiche della dose basate sulla tossicità ematologica

   Aggiustamento basato sulla conta del giorno 8 Piastrine (x 109/l) ANC (x 109/l) Azione > 75 e > 1,0 Procedere con la dose del giorno 8 > 75 e 0,5 - 1,0 Procedere con la dose ridotta 50 - 75 e ~ 0,5 Procedere con la dose ridotta dose < 50 e/o < 0,5 Omettere la dose Quando la dose del giorno 8 viene ridotta, la stessa dose ridotta verrà utilizzata per il ciclo successivo.

   Quando la dose del giorno 8 viene omessa, il ciclo è completato e il ciclo successivo sarà programmato il giorno 22, con riduzione della dose.

   Aggiustamento della dose basato sulla conta nadir Piastrine (x 109/l) ANC (x 109/l) Azione ~ 25 senza sanguinamento e ~ 0,5 o < 0,5 per < 7 giorni Nessun cambiamento < 25 o < 50 con sanguinamento e/o < 0,5 per > 7 giorni Riduzione della dose (vedere di seguito) Qualsiasi e < 0,5 e febbre Riduzione della dose Ricorrenza di uno qualsiasi dei suddetti eventi dopo 2 riduzioni della dose Fuori dallo studio

   Aggiustamento basato sulla conta del giorno 22 Piastrine (x 109/l) ANC (x 109/l) Azione

   ~ 100 e > 2,0 Procedere con il ciclo successivo < 100 e/o < 2,0 Ritardo 1 settimana Ritardo massimo di 2 settimane (il ciclo successivo deve iniziare entro il giorno 35 per rimanere nello studio)

   Schema di riduzione della dose Prima riduzione Seconda riduzione Terza riduzione Carboplatino AUC 4,5 AUC 4,0 Fuori studio Gemcitabina (braccio standard) 750 mg/m2 (1000 mg/m2 x 75%) 500 mg/m2 (1000 mg/m2 x 50%) Fuori studio Infusione Gemcitabina 75% della durata della Fase II 50% della durata dell'infusione precedente Fuori dallo studio

   5.2.3.3 Modifiche della dose per tossicità non ematologica

   Qualsiasi tossicità non ematologica di grado 3 o 4, ad eccezione di nausea e vomito, affaticamento e transaminite reversibile, renderà il paziente fuori dallo studio.

   La tossicità non ematologica deve essere inferiore al grado 2 prima di procedere al ciclo successivo. Se sono superiori al grado 2, il trattamento viene ritardato di 1 settimana. Il trattamento può essere ritardato per un massimo di 2 settimane.

   5.2.4 Durata del trattamento

   I pazienti che rispondono riceveranno fino a sei cicli di chemioterapia.

   Dopo il completamento o la sospensione del trattamento, i pazienti possono continuare a ricevere ulteriori trattamenti a discrezione del proprio medico.

   Valutazioni di screening

   Le seguenti indagini di screening devono essere eseguite entro 28 giorni dal giorno 1 del ciclo 1:

   • Stadiazione completa e documentazione dello stato del tumore: radiografia del torace al basale, TC torace, addome, cervello e scintigrafia ossea se clinicamente indicato.

   Le seguenti valutazioni e indagini di screening devono essere eseguite entro 14 giorni dalla prima dose di terapia e comprendono quanto segue:

   • Consenso

   • Completare l'anamnesi medica, includere dettagli sui sintomi, trattamenti precedenti, eventuale tossicità residua, condizioni mediche concomitanti e farmaci

   • Esami fisici, compresa la documentazione di tutte le lesioni palpabili, segni vitali, peso corporeo e altezza e KPS.

   • Documentazione della(e) lesione(i) indicatrice(i) che includa data di valutazione, descrizione della sede della lesione, dimensioni e tipo di studio diagnostico per seguire la lesione. Lo stesso metodo diagnostico deve essere utilizzato durante lo studio per valutare una lesione.

   I seguenti test devono essere eseguiti entro 7 giorni dalla prima dose di terapia e includono quanto segue:

   • Emocromo completo
   • Elettroliti sierici ed enzimi epatici, calcio e magnesio totali
   • Test di gravidanza su siero, se applicabile
   • Analisi delle urine con dipstick: se il dipstick è positivo per proteine ​​o sangue, è necessario un esame microscopico completo

   8.3 Valutazione durante il trattamento

   Prima del giorno 1 di ogni ciclo

   • Anamnesi ed esame fisico

   • Valutare e registrare le tossicità del corso precedente. Assegnare i gradi di tossicità appropriati (vedi Appendice 4).

   • Registrare tutti i farmaci assunti dall'ultimo ciclo.

   • Misurazione del peso per il ricalcolo della superficie corporea e della clearance della creatinina

   • Valutazione dei sintomi della malattia (il questionario QoL deve essere somministrato e compilato dal paziente prima della valutazione da parte dello sperimentatore).

   • Valutazione dello stato delle prestazioni
   • Emocromo completo, elettroliti ed enzimi epatici (se i livelli del giorno 15 sono anormali).
   • Analisi del dipstick delle urine, se il risultato basale è anormale
   • Le misurazioni cliniche del tumore devono essere ottenute prima di ogni ciclo di trattamento
   • Le misurazioni radiografiche del tumore devono essere ottenute dopo ogni 2 cicli di trattamento.
   • Modificare la dose del ciclo successivo se necessario (vedere paragrafo 5.2.3).

   Valutazione dell'ottavo giorno

   • Emocromo completo

   Valutazione del giorno 15

   • Emocromo completo, elettroliti ed enzimi epatici

   8.4 Valutazione della risposta

   I pazienti saranno valutabili per la risposta dopo 2 cicli di terapia. Le misurazioni cliniche del tumore devono essere eseguite prima di ogni ciclo di trattamento. Le misurazioni radiografiche del tumore devono essere ottenute dopo ogni 2 cicli di trattamento.

   Se un paziente soddisfa i criteri di risposta (vedere la sezione 7) per CR, PR o SD per la prima volta, verrà eseguita un'altra valutazione clinica e radiografica del tumore 4 o più settimane dopo per documentare che la risposta è durata almeno 4 settimane.

   La valutazione clinica del tumore dopo ogni ciclo e la risposta radiografica del tumore dopo ogni 2 cicli continueranno fino al completamento del trattamento o al ritiro del paziente.

   8.5 Follow-up post-trattamento

   I pazienti che rispondono saranno rivisti ogni 2 mesi dopo il completamento della chemioterapia. La valutazione clinica del tumore sarà effettuata 2 mesi. La valutazione radiografica del tumore verrà eseguita ogni 4 mesi. Questi continueranno fino a quando la progressione della malattia non sarà documentata.

   I pazienti che non hanno mai avuto una risposta e i pazienti con progressione della malattia dopo una risposta precedentemente documentata saranno seguiti ogni 3 mesi per i dati di sopravvivenza.

9. CONCLUSIONE DEL TRATTAMENTO E RITIRO

Un paziente sarà considerato come aver completato il trattamento se:

• Il paziente ha completato 6 cicli di terapia.
• Il paziente ha una CR confermata o una PR confermata e ha ricevuto almeno 4 cicli di terapia e lo sperimentatore non ritiene che sia indicata un'ulteriore terapia.
• Il paziente ha mantenuto uno stato SD per almeno 8 settimane durante il trattamento e ha ricevuto almeno 2 cicli di trattamento.
• Il paziente ha PD dopo aver completato almeno un ciclo completo di trattamento.
• Un paziente viene rimosso dallo studio a causa di una tossicità inaccettabile.

I pazienti possono essere sospesi dal trattamento per i seguenti motivi:

• Esperienza avversa, inclusa malattia intercorrente o tossicità inaccettabile.
• Se il medico curante ritiene che un cambiamento di terapia sarebbe nel migliore interesse del paziente.
• Violazione del protocollo (inclusa la non conformità).
• Ritiro del paziente su sua richiesta, per motivi diversi da quelli di cui sopra.
• Perso al follow-up.

Tutti i pazienti saranno seguiti per lo stato della malattia e la sopravvivenza fino alla morte. 10. VALUTAZIONE DELLA QUALITÀ DELLA VITA (QoL).

È essenziale spiegare al paziente che la valutazione della QoL è una parte importante della sperimentazione e che si dovrebbe rispondere a tutte le sezioni anche se il paziente le ritiene irrilevanti. Va sottolineato che la compilazione di questi moduli aiuta i medici a saperne di più sugli effetti del trattamento sul benessere dei pazienti.

Una persona di contatto nominata diversa dal medico responsabile che gestisce il paziente nel contesto della sperimentazione, deve essere nominata per assumersi la responsabilità della somministrazione, della raccolta e del controllo del questionario EORTC QLQ-C30 e QLQ-LC13 compilato. Il questionario deve essere compilato prima della consultazione con il medico, secondo le linee guida EORTC per la valutazione della QoL. Dovrebbero essere controllati per garantire che tutte le domande abbiano ricevuto risposta; se necessario tornare immediatamente dal paziente e chiedergli di compilare eventuali voci mancanti. Se una valutazione viene persa a causa di un errore amministrativo, il paziente deve essere contattato telefonicamente o per lettera e deve essere preso un accordo affinché il questionario venga compilato entro una settimana dalla valutazione programmata.

Il questionario può essere compilato dal paziente se è in grado di leggere e comprendere la lingua del questionario. Altrimenti, la persona designata per la gestione della QoL dovrebbe leggere le domande come scritte, nella lingua che il paziente comprende, e registrare la risposta a ciascuna domanda senza pregiudicare la sua risposta. La modalità di consegna deve essere annotata nel questionario.

11. PROCEDURA DI RANDOMIZZAZIONE

I partecipanti allo studio saranno assegnati in modo casuale a ricevere gemcitabina somministrata nell'infusione convenzionale di 30 minuti o infusione prolungata, entrambe in combinazione con carboplatino.

11.1 Stratificazione

La randomizzazione stratificata sarà effettuata utilizzando il metodo di minimizzazione basato sui seguenti fattori:

(i) Centro (National University Hospital, Sydney Cancer Centre, Johns Hopkins-NUH International Medical Centre) (ii) Karnofsky performance status (90 - 100% vs 70 - 80%) (iii) Stadio della malattia (IIIB vs IV)

11.2 Registrazione

I pazienti verranno inseriti nella sperimentazione tramite una telefonata al National Medical Research Council (NMRC) Clinical Trials & Epidemiology Research Unit (CTERU), Singapore (+65 220-1292) tra le 08:30 e le 17:30 dal lunedì al venerdì e dalle 08:30 alle Sabato alle 12:30 (ora di Singapore) o via fax (+65 220-1485), dichiarando che il paziente deve essere inserito nello studio CTRG L08 o SQLU02.

Il consenso informato scritto per l'ingresso nello studio deve essere ottenuto prima della randomizzazione. Tutti i criteri di ammissibilità e il modulo di consenso saranno controllati e i fattori di stratificazione indicati prima dell'assegnazione del trattamento. Il paziente verrà randomizzato a gemcitabina per infusione lunga (L) o gemcitabina per infusione breve di 30 minuti (S) e assegnato un numero di prova. Il progetto comporterà un'assegnazione uguale di pazienti ai due trattamenti. Il fax di conferma sarà inviato all'investigatore.

12. CONSIDERAZIONI STATISTICHE

Il calcolo della dimensione del campione viene effettuato in base al criterio della teoria della selezione statistica come dettagliato in Simon et al (62) e Gibbons et al (63). Supponendo una probabilità del 90% di selezionare correttamente il trattamento migliore e anticipando un tasso di risposta al basale del 40%, quindi per rilevare una superiorità del 15% del miglior trattamento rispetto all'altro, sarebbe necessaria una dimensione dello studio di 37 pazienti per braccio di trattamento. L'obiettivo di accrual totale sarebbe quindi di 74 pazienti.

13. ANALISI STATISTICHE

L'analisi statistica di tutti gli endpoint dello studio sarà effettuata sulla base dell'intenzione al trattamento. In caso di perdita al follow-up, i pazienti saranno comunque inclusi nell'analisi per la durata della loro osservazione. La comparabilità intrinseca dei risultati in questo disegno randomizzato di fase II che utilizza la teoria della selezione statistica assicura che i due trattamenti possano essere classificati in modo affidabile quando si ottengono grandi differenze.

La migliore risposta verrà utilizzata nell'analisi della risposta obiettiva del tumore. In caso di evento avverso, in cui si sono verificati più eventi dello stesso tipo in un paziente, solo il grado massimo sarà documentato per l'analisi. I tassi di risposta del tumore e le tossicità tra i gruppi di trattamento saranno confrontati in modo descrittivo utilizzando stime di proporzioni.

La durata della risposta e il tempo di risposta per i pazienti che rispondono saranno valutati utilizzando statistiche descrittive appropriate. La valutazione della sopravvivenza libera da progressione e globale sarà effettuata utilizzando la tecnica di Kaplan-Meier a 1 anno di follow-up. Nel caso di sopravvivenza libera da progressione, i pazienti la cui malattia non è progredita saranno censurati alla data dell'ultima nota per essere vivi. Allo stesso modo, l'analisi della sopravvivenza globale censura i pazienti persi al follow-up o che sono rimasti in vita alla data dell'ultima nota per essere vivi.

Per ogni dimensione QoL, i cambiamenti nei punteggi nel tempo saranno confrontati tra i bracci di trattamento mediante un'appropriata rappresentazione grafica o statistiche descrittive.

Non è prevista alcuna analisi ad interim per questo studio randomizzato di fase II.

14. CONSIDERAZIONI ETICHE

14.1 IRB/Comitato etico

Prima dell'inizio dello studio, il protocollo sarà sottoposto a revisione e approvazione da parte dell'ospedale e del comitato etico e di ricerca del Ministero della Salute o gruppo equivalente. È necessario ottenere l'approvazione del protocollo e il consenso informato.

14.2 Informazioni sul paziente

Il medico responsabile informerà il paziente sullo sfondo e sulle attuali conoscenze del trattamento in studio con particolare riferimento all'attività e alla tossicità note. Il paziente verrà informato della natura investigativa di questo trattamento e, in particolare, del processo di randomizzazione coinvolto in questo studio. Il paziente sarà informato del suo diritto di ritirarsi dallo studio in qualsiasi momento senza alcuna penalità per quanto riguarda la continuazione delle cure presso questa istituzione e dagli stessi medici di sua scelta. Prima della maturazione, tutti i pazienti firmeranno un modulo di consenso informato scritto.

14.3 Consenso informato

Il consenso informato deve soddisfare i requisiti dell'ultima revisione della Dichiarazione di Helsinki e di eventuali regolamenti e linee guida applicabili come la Good Clinical Practice (Singapore).

Lo studio sarà completamente spiegato a ciascun potenziale candidato e il soggetto dovrà dare il proprio consenso firmando e datando il modulo di consenso.

È necessario ottenere il consenso prima di eseguire qualsiasi procedura richiesta dal protocollo, comprese eventuali procedure che non fanno parte della normale cura del paziente.

Livelli plasmatici di dFdC e dFdU

Verranno prelevati dieci millilitri di sangue a 0 ore (basale), 10 minuti, 30 minuti, 10 minuti prima della fine dell'infusione e 30 minuti, 1 ora, 2 ore dopo la fine dell'infusione. Il sangue verrà prelevato in provette da 10 ml (con tappo verde) contenenti eparina e 5 micromol di tetraidrouridina. Le provette vengono quindi centrifugate a 3300 rpm per 15 minuti e il plasma supernatante viene quindi trasferito in provette lisce (con il tappo rosso) per la conservazione immediata a -80°C. I campioni saranno etichettati con il nome del paziente, il numero ID, la data, l'ora esatta del campione e il numero di protocollo. Una scheda di farmacocinetica accompagnerà i campioni di plasma al laboratorio di Farmacologia del Department of Pharmacology, National University of Singapore, c/o Prof Lee How Sung.

I livelli di DFdC e dFdU nel plasma saranno misurati mediante HPLC in fase inversa, come descritto da Grunewald (22). In breve, da 20 microl a 50 microl di plasma vengono iniettati su una colonna analitica C18 mBondapak (Waters Associates, Inc.). I componenti saranno separati con una fase mobile costituita da un gradiente lineare di 30 minuti che inizia con la soluzione A al 100% (acetato di ammonio 0.5M, pH = 6.8) e termina con la soluzione B al 60% (metanolo al 50% in acqua deionizzata). La portata è di 1,5 ml/min. Le lunghezze d'onda di rilevamento sono rispettivamente di 275 nm e 262 nm per dFdC e dFdU.

16.2 Livelli intracellulari di dFdCTP

Verranno prelevati campioni di sangue per saggiare il dFdCTP intracellulare. Solo 3 campioni per paziente, prelevati 10 minuti dopo l'inizio e 10 minuti prima della fine dell'infusione di gemcitabina, e uno nel mezzo dell'infusione, saranno dosati per dFdCTP.

Il plasma viene prima separato dal sangue mediante centrifugazione a 3300 rpm per 20 minuti. Le cellule mononucleate vengono quindi isolate mediante centrifugazione in gradiente di densità Ficoll-Hypaque e i desossiribonucleosidi trifosfati vengono estratti con 0,4 NHClO4 e il materiale insolubile in acido viene rimosso mediante centrifugazione. Il supernatante viene quindi accuratamente neutralizzato a pH 7 con idrossido di potassio e il KClO4 precipitato viene quindi rimosso mediante centrifugazione. Un metodo di cromatografia liquida ad alte prestazioni a scambio ionico viene quindi utilizzato per separare e quantificare il dFdCTP.

17. AMMINISTRAZIONE DELLO STUDIO

17.1 Responsabilità della droga

Le scorte di gemcitabina saranno fornite da Eli Lilly a scopo di sperimentazione e tutte queste fiale saranno contabilizzate presso la farmacia del sito.

17.2 Tenuta dei registri dei pazienti

I moduli di rapporto clinico CTRG verranno utilizzati per registrare i dati per questo studio. Tutti i moduli di referto clinico del paziente saranno inviati via fax all'Ufficio CTRG (+65 777-5545). Una copia del modulo di rapporto di ammissibilità di ciascun paziente, del modulo di rapporto di randomizzazione (per la fase II), del programma di studio, dei moduli di consenso, dei rapporti di laboratorio e radiologici e della valutazione della qualità di vita sarà conservata presso l'Ufficio CTRG. Tutti i registri saranno conservati per un periodo di 6 anni dalla data di chiusura dello studio secondo le linee guida GCP di Singapore