Folinsyre og vaskulær reaktivitet i HIV

Design og deltakere Dette var en randomisert, dobbeltblind, placebokontrollert studie. Kvalifiserte deltakere var individer med kjent HIV-sykdom i henhold til Centers for Disease Controls reviderte kriterier, 18 år eller eldre, på ART i minst 6 måneder, med uoppdagbar virusmengde (mindre enn 50 kopier/ml), og CD4 teller mer enn 200 celler /mm3. Eksklusjonskriterier var diabetes mellitus, enhver aktiv infeksjon, leversykdom, nyresykdom, kardiovaskulær sykdom eller ukontrollert hypertensjon, graviditet, bruk av ulovlige stoffer og psykiske lidelser som ville kompromittere forståelse og samarbeid med studien. Pasienter som bruker tobakk, tar kosttilskudd (som folsyre eller antioksidanter) eller kvinner som tar hormonbehandling ble også ekskludert. Alle medisiner i vanlig bruk ble opprettholdt gjennom hele studieperioden. Protokollen ble godkjent av komiteen for etikk i forskning ved Hospital de Clínicas de Porto Alegre, og alle deltakerne ga skriftlig informert samtykke.

Studieinnstillinger Studien fant sted ved HIV-poliklinikken til Hospital de Clínicas de Porto Alegre, et nasjonalt referansesenter for HIV/AIDS i Sør-Brasil, fra august 2009 til september 2011.

Intervensjoner Deltakerne ble tilfeldig tildelt en 4-ukers behandling med enten folinsyre (n=15) eller placebo (n=15). Studietilskuddsregimene besto av kapslene som inneholdt 5 mg folinsyre eller placebo. Deltakerne fikk 1 flaske, som inneholdt 30 kapsler. Forsøkspersonene ble bedt om å ta 1 kapsel daglig om morgenen.

Utfall Det primære utfallsmålet var vurdering av vaskulære responser i brachialis arterie under reaktiv hyperemi. Sekundære utfall var endringene på de biokjemiske og hemodynamiske variablene.

Vaskulære målinger Etter faste over natten ble vurderingene utført i et temperaturkontrollert (20-22°C), stille rom, med forsøkspersoner i ryggleie. Gjennom hele protokollen ble blodtrykk (BP) og hjertefrekvens målt i den dominerende armen ved bruk av en kalibrert oscillometrisk automatisk enhet (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Florida, USA). Underarmens blodstrøm ble målt ved venøs okklusjonspletysmografi (D.E Hokanson, Washington, USA), i det ikke-dominante lemmet, som tidligere beskrevet. Kort fortalt ble en hurtig oppblåsingsmansjett brukt i overarmen for å okkludere venøs utstrømning og håndsirkulasjonen ble stoppet ved å plassere en mansjett rundt håndleddet. Reaktiv hyperemi (RH) ble indusert ved å plassere en mansjett i overarmen ved 250 mmHg, og frigjøre etter 5 min. Alle flytregistreringer ble sporet manuelt av en operatør som ble blindet for gruppene og tid. Reproduserbarheten av strømningsmålinger i vårt laboratorium har intradag- og interdag-variasjonskoeffisienter på henholdsvis 6,9 og 9,2 %. Etter 15 minutters hvile ble 2,5 mg sublingualt isosorbiddinitrat (Isordil®, Sigma, Brasil) administrert som en endotel-uavhengig vasodilator. Fem minutter senere ble endotel-uavhengig vasodilatasjon av arterien brachialis målt.

Laboratoriemålinger Alle prøver ble tatt etter faste over natten, før og etter 4 ukers intervensjon. For hvert individ ble total plasma homocysteinkonsentrasjon, serumfolat, vitamin B12, glukose, kreatinin, totalkolesterol, høydensitetslipoproteinkolesterol (HDL-C) og triglyserider målt. Serumfolat- og vitamin B12-nivåer ble målt ved en konkurrerende immunanalyse ved bruk av direkte kjemiluminescerende teknologi (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Tyskland). Plasmahomocysteinnivåer ble også målt ved en konkurrerende immunanalyse ved bruk av direkte kjemiluminescerende teknologi (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, USA). Glukose, kreatinin, totalkolesterol, HDL-c og triglyserider ble målt med standard laboratoriemetoder.

Prøvestørrelse og randomisering Kraftberegninger viste at et totalt antall på 15 deltakere per gruppe ville være i stand til å oppdage en endring på 4ml/min/100ml i vaskulær respons under reaktiv hyperemi mellom grupper, med en styrke på 80 % og α=0,05. For tildeling av deltakerne ble randomisering oppnådd ved hjelp av en datamaskingenerert liste over tilfeldige tall, og etterforskerne forble blinde til studien var fullført. Deltakerne ble tilfeldig fordelt på placebo- eller folinsyrebehandlingsgrupper. Randomiseringsprosedyren ble utført i tre blokker på 10 og ble stratifisert etter kjønn, for å sikre et relativt likt antall menn og kvinner i hver behandlingsgruppe.

Folinsyre og placebokapsler var umulig å skille i form, størrelse og farge. De ble forhåndspakket i identiske flasker og fortløpende nummerert for hver pasient, i henhold til randomiseringsplanen. Tillegg ble kodet slik at verken etterforskerne eller deltakerne var klar over innholdet. En person som ikke var tilknyttet studien var den eneste som ble betrodd identifikasjonskoden for de individuelt innpakkede flaskene med kapsler.

Statistisk analyse Alle variabler ble testet for normalfordeling med Kolmogorov-Smirnov-testen. Normalfordelte variabler uttrykkes som gjennomsnitt ± SEM. Variabler som ikke er normalfordelte presenteres som median (25.-75. persentil). Grunnlinjesammenlikninger av gruppekarakteristikker ble utført ved uparet t-test eller Mann-Whitney U-test. For å sammenligne svar etter 4 ukers intervensjon, ble en toveis variansanalyse (ANOVA) for gjentatte mål (gruppe, tid og interaksjon) brukt. Assosiasjoner mellom endringer i serumfolsyre og endringer i RH og assosiasjoner mellom endringer i plasmahomocystein og endringer i RH ble evaluert ved Spearmans rangkorrelasjonskoeffisient. En to-halet P-verdi på mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.