Ácido folínico e reatividade vascular no HIV

Projeto e participantes Este foi um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo. Os participantes elegíveis eram indivíduos com doença conhecida pelo HIV de acordo com os critérios revisados ​​do Centers for Disease Control, com 18 anos ou mais, em TARV por pelo menos 6 meses, com carga viral indetectável (menos de 50 cópias/ml) e contagem de CD4 superior a 200 células /mm3. Os critérios de exclusão foram diabetes mellitus, qualquer infecção ativa, doença hepática, doença renal, história de doença cardiovascular ou hipertensão não controlada, gravidez, uso de drogas ilícitas e doença mental que comprometesse a compreensão e colaboração com o estudo. Também foram excluídos pacientes tabagistas, em uso de algum suplemento dietético (como ácido fólico ou antioxidantes) ou mulheres em terapia de reposição hormonal. Todos os medicamentos de uso regular foram mantidos durante todo o período do estudo. O protocolo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e todos os participantes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido.

Cenários do estudo O estudo foi realizado no ambulatório de HIV do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, referência nacional em HIV/AIDS no sul do Brasil, no período de agosto de 2009 a setembro de 2011.

Intervenções Os participantes foram aleatoriamente designados para um tratamento de 4 semanas com ácido folínico (n=15) ou placebo (n=15). Os regimes de suplementação do estudo consistiram em cápsulas contendo 5 mg de ácido folínico ou placebo. Os participantes receberam 1 frasco, que continha 30 cápsulas. Os indivíduos foram instruídos a tomar 1 cápsula por dia, pela manhã.

Desfechos O ​​desfecho primário foi a avaliação das respostas vasculares da artéria braquial durante a hiperemia reativa. Os desfechos secundários foram as alterações nas variáveis ​​bioquímicas e hemodinâmicas.

Medidas vasculares Após jejum noturno, as avaliações foram realizadas em sala silenciosa, com temperatura controlada (20-22°C), com os indivíduos em decúbito dorsal. Durante todo o protocolo, a pressão arterial (PA) e a frequência cardíaca foram medidas no braço dominante por meio de um aparelho automático oscilométrico calibrado (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Flórida, EUA). O fluxo sanguíneo do antebraço foi medido por pletismografia de oclusão venosa (D.E Hokanson, Washington, EUA), no membro não dominante, conforme descrito anteriormente. Em suma, um manguito de insuflação rápida foi usado na parte superior do braço para obstruir o fluxo venoso e a circulação da mão foi interrompida colocando um manguito em volta do pulso. A hiperemia reativa (HR) foi induzida colocando um manguito no braço a 250 mmHg e liberando após 5 min. Todos os registros de fluxo foram rastreados manualmente por um operador que desconhecia os grupos e o tempo. A reprodutibilidade das medidas de vazão em nosso laboratório apresenta coeficientes de variação intradia e interdia de 6,9 ​​e 9,2%, respectivamente. Após 15 min de repouso, 2,5 mg de dinitrato de isossorbida sublingual (Isordil®, Sigma, Brasil) foi administrado como vasodilatador independente do endotélio. Cinco minutos depois, mediu-se a vasodilatação independente do endotélio da artéria braquial.

Medidas laboratoriais Todas as amostras foram obtidas após jejum noturno, antes e após 4 semanas de intervenção. Para cada indivíduo, a concentração plasmática total de homocisteína, folato sérico, vitamina B12, glicose, creatinina, colesterol total, colesterol de lipoproteína de alta densidade (HDL-C) e triglicerídeos foram medidos. Os níveis séricos de folato e vitamina B12 foram medidos por um imunoensaio competitivo usando tecnologia quimioluminescente direta (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Alemanha). Os níveis plasmáticos de homocisteína também foram medidos por um imunoensaio competitivo usando tecnologia quimioluminescente direta (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, EUA). Glicose, creatinina, colesterol total, HDL-c e triglicerídeos foram medidos com métodos laboratoriais padrão.

Tamanho da amostra e randomização Os cálculos de poder mostraram que um número total de 15 participantes por grupo seria capaz de detectar uma mudança de 4ml/min/100ml na resposta vascular durante a hiperemia reativa entre os grupos, com um poder de 80% e α=0,05. Para a alocação dos participantes, a randomização foi realizada por meio de uma lista de números aleatórios gerada por computador, e os investigadores permaneceram cegos até que o estudo fosse concluído. Os participantes foram aleatoriamente designados para grupos de tratamento com placebo ou ácido folínico. O procedimento de randomização foi realizado em três blocos de 10 e foi estratificado de acordo com o sexo, para garantir um número relativamente igual de homens e mulheres em cada grupo de tratamento.

As cápsulas de ácido folínico e placebo eram indistinguíveis em forma, tamanho e cor. Eles foram pré-embalados em frascos idênticos e numerados consecutivamente para cada paciente, de acordo com o cronograma de randomização. Os suplementos foram codificados para que nem os investigadores nem os participantes estivessem cientes do conteúdo. Uma pessoa não vinculada ao estudo foi a única a quem foi confiado o código de identificação dos frascos de cápsulas embalados individualmente.

Análise estatística Todas as variáveis ​​foram testadas para distribuição normal com o teste de Kolmogorov-Smirnov. Variáveis ​​normalmente distribuídas são expressas como média ± SEM. As variáveis ​​com distribuição não normal são apresentadas como mediana (25º-75º percentis). As comparações iniciais das características do grupo foram realizadas pelo teste t não pareado ou pelo teste U de Mann-Whitney. Para comparar as respostas após 4 semanas de intervenção, uma análise de variância (ANOVA) de duas vias para medidas repetidas (grupo, tempo e interação) foi usada. Associações entre alterações no ácido fólico sérico e alterações no RH e associações entre alterações na homocisteína plasmática e alterações no RH foram avaliadas pelo coeficiente de correlação de Spearman. Um valor de P bicaudal inferior a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.