Kwas foliowy i reaktywność naczyniowa w HIV

Projekt i uczestnicy Było to randomizowane, podwójnie ślepe badanie kontrolowane placebo. Kwalifikującymi się uczestnikami były osoby ze stwierdzoną chorobą HIV zgodnie ze zrewidowanymi kryteriami Centers for Disease Control, w wieku 18 lat lub starsze, stosujące ART przez co najmniej 6 miesięcy, z niewykrywalnym mianem wirusa (mniej niż 50 kopii/ml) i liczbą CD4 powyżej 200 komórek /mm3. Kryteriami wykluczenia były cukrzyca, jakakolwiek aktywna infekcja, choroba wątroby, choroba nerek, historia chorób układu krążenia lub niekontrolowane nadciśnienie, ciąża, używanie nielegalnych narkotyków i choroby psychiczne, które mogłyby zagrozić zrozumieniu i współpracy z badaniem. Wykluczono również pacjentki aktualnie palące tytoń, przyjmujące jakiekolwiek suplementy diety (takie jak kwas foliowy lub przeciwutleniacze) oraz kobiety stosujące hormonalną terapię zastępczą. Wszystkie regularnie stosowane leki były utrzymywane przez cały okres badania. Protokół został zatwierdzony przez komisję ds. etyki w badaniach Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę.

Warunki badania Badanie odbyło się w ambulatorium HIV Hospital de Clínicas de Porto Alegre, krajowego ośrodka referencyjnego ds. HIV/AIDS w południowej Brazylii, od sierpnia 2009 do września 2011.

Interwencje Uczestnicy zostali losowo przydzieleni do 4-tygodniowego leczenia kwasem folinowym (n=15) lub placebo (n=15). Schematy suplementacji w ramach badania obejmowały kapsułki zawierające 5 mg kwasu folinowego lub placebo. Uczestnicy otrzymali 1 butelkę, która zawierała 30 kapsułek. Badanych poinstruowano, aby przyjmowali 1 kapsułkę dziennie, rano.

Wyniki Podstawową miarą wyniku była ocena odpowiedzi naczyniowej tętnicy ramiennej podczas odczynowego przekrwienia. Drugorzędnymi wynikami były zmiany w zakresie zmiennych biochemicznych i hemodynamicznych.

Pomiary naczyniowe Po całonocnym poście oceny przeprowadzono w cichym pokoju z kontrolowaną temperaturą (20-22°C), z osobnikami w pozycji leżącej. W całym protokole mierzono ciśnienie krwi (BP) i częstość akcji serca w ramieniu dominującym za pomocą skalibrowanego automatycznego urządzenia oscylometrycznego (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Floryda, USA). Przepływ krwi w przedramieniu mierzono za pomocą pletyzmografii żylnej (DE Hokanson, Washington, USA) w kończynie niedominującej, jak opisano wcześniej. Krótko mówiąc, na ramieniu zastosowano mankiet do szybkiego napełniania, aby zamknąć odpływ żylny, a krążenie w dłoni zostało zatrzymane przez założenie mankietu wokół nadgarstka. Przekrwienie reaktywne (RH) wywołano przez założenie mankietu na ramię pod ciśnieniem 250 mmHg i zwolnienie go po 5 minutach. Wszystkie zapisy przepływu były ręcznie śledzone przez operatora, który nie znał grup i czasu. Powtarzalność pomiarów przepływów w naszym laboratorium charakteryzuje się śróddziennymi i międzydniowymi współczynnikami zmienności odpowiednio 6,9 i 9,2%. Po 15 minutach odpoczynku podano podjęzykowo 2,5 mg diazotanu izosorbidu (Isordil®, Sigma, Brazylia) jako niezależny od śródbłonka środek rozszerzający naczynia krwionośne. Pięć minut później zmierzono niezależne od śródbłonka rozszerzenie naczyń tętnicy ramiennej.

Pomiary laboratoryjne Wszystkie próbki pobrano po całonocnej głodówce, przed i po 4 tygodniach interwencji. Dla każdego osobnika zmierzono całkowite stężenie homocysteiny w osoczu, kwas foliowy w surowicy, witaminę B12, glukozę, kreatyninę, cholesterol całkowity, cholesterol lipoprotein o wysokiej gęstości (HDL-C) i trójglicerydy. Poziomy kwasu foliowego i witaminy B12 w surowicy mierzono za pomocą konkurencyjnego testu immunologicznego z użyciem technologii bezpośredniej chemiluminescencji (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Niemcy). Poziomy homocysteiny w osoczu mierzono również za pomocą kompetycyjnego testu immunologicznego z użyciem technologii bezpośredniej chemiluminescencji (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, USA). Stężenie glukozy, kreatyniny, cholesterolu całkowitego, HDL-c i triglicerydów oznaczano standardowymi metodami laboratoryjnymi.

Wielkość próby i randomizacja Obliczenia mocy wykazały, że całkowita liczba 15 uczestników na grupę byłaby w stanie wykryć zmianę odpowiedzi naczyniowej o 4 ml/min/100 ml podczas przekrwienia reaktywnego między grupami, z mocą 80% i α=0,05. W celu przydziału uczestników randomizację uzyskano za pomocą wygenerowanej komputerowo listy liczb losowych, a badacze pozostawali ślepi aż do zakończenia badania. Uczestnicy zostali losowo przydzieleni do grup otrzymujących placebo lub kwas folinowy. Procedura randomizacji została przeprowadzona w trzech blokach po 10 i została podzielona na warstwy według płci, aby zapewnić względnie równą liczbę mężczyzn i kobiet w każdej grupie leczenia.

Kapsułki z kwasem foliowym i placebo były nie do odróżnienia pod względem kształtu, rozmiaru, a także koloru. Zostały one wstępnie zapakowane w identyczne butelki i kolejno ponumerowane dla każdego pacjenta, zgodnie z harmonogramem randomizacji. Suplementy zostały zakodowane w taki sposób, aby ani badacze, ani uczestnicy nie byli świadomi ich zawartości. Osobie niezwiązanej z badaniem jako jedynej powierzono kod identyfikacyjny indywidualnie pakowanych butelek kapsułek.

Analiza statystyczna Wszystkie zmienne zostały przetestowane pod kątem rozkładu normalnego za pomocą testu Kołmogorowa-Smirnowa. Zmienne o rozkładzie normalnym wyrażono jako średnią ± SEM. Zmienne o rozkładzie innym niż normalny przedstawiono jako mediany (25-75 percentyl). Porównania linii bazowych cech grup przeprowadzono za pomocą testu t dla nieparzystych lub testu U Manna-Whitneya. Aby porównać odpowiedzi po 4 tygodniach interwencji, zastosowano dwukierunkową analizę wariancji (ANOVA) dla powtarzanych pomiarów (grupa, czas i interakcja). Zależności między zmianami stężenia kwasu foliowego w surowicy a zmianami wilgotności względnej oraz zależności między zmianami stężenia homocysteiny w osoczu a zmianami wilgotności względnej oceniono za pomocą współczynnika korelacji rang Spearmana. Dwustronna wartość P mniejsza niż 0,05 została uznana za statystycznie istotną.