Acido folinico e reattività vascolare nell'HIV

Design e partecipanti Questo è stato uno studio randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo. I partecipanti eleggibili erano individui con malattia da HIV nota secondo i criteri rivisti dei Centers for Disease Control, di età pari o superiore a 18 anni, in terapia antiretrovirale da almeno 6 mesi, con carica virale non rilevabile (meno di 50 copie/ml) e conta di CD4 superiore a 200 cellule /mm3. I criteri di esclusione erano diabete mellito, qualsiasi infezione attiva, malattia epatica, malattia renale, storia di malattie cardiovascolari o ipertensione incontrollata, gravidanza, uso di droghe illecite e malattie mentali che avrebbero compromesso la comprensione e la collaborazione con lo studio. Sono stati esclusi anche i pazienti che attualmente fanno uso di tabacco, assumono qualsiasi integratore alimentare (come acido folico o antiossidanti) o donne che assumono terapia ormonale sostitutiva. Tutti i farmaci in uso regolare sono stati mantenuti per tutto il periodo di studio. Il protocollo è stato approvato dal comitato per l'etica nella ricerca dell'Hospital de Clínicas de Porto Alegre e tutti i partecipanti hanno dato il consenso informato scritto.

Ambienti dello studio Lo studio si è svolto presso l'ambulatorio per l'HIV dell'Hospital de Clínicas de Porto Alegre, un centro di riferimento nazionale per l'HIV/AIDS nel sud del Brasile, da agosto 2009 a settembre 2011.

Interventi I partecipanti sono stati assegnati in modo casuale a un trattamento di 4 settimane con acido folinico (n=15) o placebo (n=15). I regimi di integrazione dello studio consistevano nelle capsule contenenti 5 mg di acido folinico o placebo. Ai partecipanti è stato fornito 1 flacone, che conteneva 30 capsule. I soggetti sono stati istruiti a prendere 1 capsula al giorno, al mattino.

Risultati L'outcome primario era la valutazione delle risposte vascolari dell'arteria brachiale durante l'iperemia reattiva. Gli esiti secondari erano i cambiamenti nelle variabili biochimiche ed emodinamiche.

Misurazioni vascolari Dopo un digiuno notturno, le valutazioni sono state eseguite in una stanza silenziosa a temperatura controllata (20-22°C), con i soggetti in posizione supina. Durante tutto il protocollo, la pressione sanguigna (BP) e la frequenza cardiaca sono state misurate nel braccio dominante utilizzando un dispositivo automatico oscillometrico calibrato (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Florida, USA). Il flusso sanguigno dell'avambraccio è stato misurato mediante pletismografia dell'occlusione venosa (D.E Hokanson, Washington, USA), nell'arto non dominante, come descritto in precedenza. In breve, nella parte superiore del braccio è stato utilizzato un bracciale di gonfiaggio rapido per occludere il deflusso venoso e la circolazione della mano è stata arrestata posizionando un bracciale attorno al polso. L'iperemia reattiva (RH) è stata indotta posizionando un bracciale nella parte superiore del braccio a 250 mmHg e rilasciandolo dopo 5 minuti. Tutte le registrazioni del flusso sono state tracciate manualmente da un operatore che non conosceva i gruppi e l'ora. La riproducibilità delle misure di flusso nel nostro laboratorio ha coefficienti di variazione intraday e interday rispettivamente del 6,9 e del 9,2%. Dopo 15 minuti di riposo, sono stati somministrati 2,5 mg di isosorbide dinitrato sublinguale (Isordil®, Sigma, Brasile), come vasodilatatore endotelio-indipendente. Cinque minuti dopo, è stata misurata la vasodilatazione endotelio-indipendente dell'arteria brachiale.

Misurazioni di laboratorio Tutti i campioni sono stati ottenuti dopo un digiuno notturno, prima e dopo 4 settimane di intervento. Per ogni soggetto sono stati misurati la concentrazione plasmatica totale di omocisteina, il folato sierico, la vitamina B12, il glucosio, la creatinina, il colesterolo totale, il colesterolo delle lipoproteine ​​ad alta densità (HDL-C) e i trigliceridi. I livelli sierici di folato e vitamina B12 sono stati misurati mediante un test immunologico competitivo utilizzando la tecnologia chemiluminescente diretta (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Germania). I livelli plasmatici di omocisteina sono stati misurati anche mediante un saggio immunologico competitivo utilizzando la tecnologia chemiluminescente diretta (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, USA). Glucosio, creatinina, colesterolo totale, HDL-c e trigliceridi sono stati misurati con metodi di laboratorio standard.

Dimensione del campione e randomizzazione I calcoli della potenza hanno mostrato che un numero totale di 15 partecipanti per gruppo sarebbe stato in grado di rilevare un cambiamento di 4 ml/min/100 ml nella risposta vascolare durante l'iperemia reattiva tra i gruppi, con una potenza dell'80% e α=0,05. Per l'assegnazione dei partecipanti, la randomizzazione è stata ottenuta mediante un elenco di numeri casuali generato dal computer e gli investigatori sono rimasti ciechi fino al completamento dello studio. I partecipanti sono stati assegnati in modo casuale a gruppi di trattamento con placebo o acido folinico. La procedura di randomizzazione è stata eseguita in tre blocchi da 10 ed è stata stratificata in base al sesso, per garantire un numero relativamente uguale di uomini e donne in ciascun gruppo di trattamento.

Le capsule di acido folinico e placebo erano indistinguibili per forma, dimensione e colore. Sono stati preconfezionati in flaconi identici e numerati consecutivamente per ciascun paziente, secondo il programma di randomizzazione. I supplementi sono stati codificati in modo tale che né i ricercatori né i partecipanti fossero a conoscenza del contenuto. Una persona non affiliata allo studio è stata l'unica a cui è stato affidato il codice identificativo dei flaconi di capsule confezionati singolarmente.

Analisi statistica Tutte le variabili sono state testate per la distribuzione normale con il test di Kolmogorov-Smirnov. Le variabili normalmente distribuite sono espresse come media ± SEM. Le variabili non distribuite normalmente sono presentate come mediane (dal 25° al 75° percentile). I confronti di base delle caratteristiche del gruppo sono stati effettuati mediante test t non appaiati o test U di Mann-Whitney. Per confrontare le risposte dopo 4 settimane di intervento, è stata utilizzata un'analisi della varianza a due vie (ANOVA) per misure ripetute (gruppo, tempo e interazione). Le associazioni tra le variazioni dell'acido folico sierico e le variazioni dell'UR e le associazioni tra le variazioni dell'omocisteina plasmatica e le variazioni dell'UR sono state valutate mediante il coefficiente di correlazione per ranghi di Spearman. Un valore P a due code inferiore a 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.