Kyselina folinová a vaskulární reaktivita u HIV

Design a účastníci Jednalo se o randomizovanou, dvojitě zaslepenou, placebem kontrolovanou studii. Způsobilými účastníky byli jedinci se známým onemocněním HIV podle revidovaných kritérií Centers for Disease Control, ve věku 18 nebo více let, na ART po dobu alespoň 6 měsíců, s nedetekovatelnou virovou zátěží (méně než 50 kopií/ml) a počtem CD4 více než 200 buněk. /mm3. Kritéria vyloučení byla diabetes mellitus, jakákoli aktivní infekce, onemocnění jater, onemocnění ledvin, kardiovaskulární onemocnění v anamnéze nebo nekontrolovaná hypertenze, těhotenství, užívání nelegálních drog a duševní onemocnění, které by ohrozilo porozumění a spolupráci se studií. Vyloučeni byli také pacienti, kteří v současnosti užívají tabák, užívají jakýkoli doplněk stravy (jako je kyselina listová nebo antioxidanty) nebo ženy užívající hormonální substituční terapii. Všechny léky v pravidelném užívání byly udržovány po celou dobu studie. Protokol byl schválen komisí pro etiku ve výzkumu Nemocnice de Clínicas de Porto Alegre a všichni účastníci dali písemný informovaný souhlas.

Nastavení studie Studie probíhala na HIV ambulanci nemocnice de Clínicas de Porto Alegre, národního referenčního centra pro HIV/AIDS v jižní Brazílii, od srpna 2009 do září 2011.

Intervence Účastníci byli náhodně přiřazeni ke 4týdenní léčbě buď kyselinou folinovou (n=15) nebo placebem (n=15). Studijní suplementační režimy sestávaly z kapslí obsahujících 5 mg kyseliny folinové nebo placeba. Účastníkům byla poskytnuta 1 lahvička, která obsahovala 30 kapslí. Subjekty byly instruovány, aby užívaly 1 kapsli denně, ráno.

Výsledky Primárním výstupním měřítkem bylo hodnocení vaskulárních odpovědí brachiální artérie během reaktivní hyperémie. Sekundárním výstupem byly změny biochemických a hemodynamických proměnných.

Cévní měření Po celonočním hladovění byla hodnocení provedena v tiché místnosti s řízenou teplotou (20-22 °C) se subjekty v poloze na zádech. V průběhu protokolu byly měřeny krevní tlak (BP) a srdeční frekvence v dominantní paži pomocí kalibrovaného oscilometrického automatického zařízení (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Florida, USA). Průtok krve předloktím byl měřen žilní okluzní pletysmografií (D.E Hokanson, Washington, USA), v nedominantní končetině, jak bylo popsáno dříve. Stručně řečeno, v horní části paže byla použita rychlá nafukovací manžeta k uzavření venózního odtoku a oběh ruky byl zastaven umístěním manžety kolem zápěstí. Reaktivní hyperémie (RH) byla vyvolána umístěním manžety do horní části paže při 250 mmHg a jejím uvolněním po 5 minutách. Všechny záznamy toku byly ručně sledovány operátorem, který byl slepý ke skupinám a času. Reprodukovatelnost měření průtoku v naší laboratoři má vnitrodenní a mezidenní variační koeficienty 6,9 a 9,2 %. Po 15 minutách klidu bylo podáno 2,5 mg sublingválního isosorbiddinitrátu (Isordil®, Sigma, Brazílie) jako vazodilatátor nezávislý na endotelu. O pět minut později byla změřena na endotelu nezávislá vazodilatace brachiální arterie.

Laboratorní měření Všechny vzorky byly získány po celonočním hladovění, před a po 4 týdnech intervence. U každého subjektu byla měřena celková koncentrace homocysteinu v plazmě, sérový folát, vitamín B12, glukóza, kreatinin, celkový cholesterol, cholesterol lipoproteinů s vysokou hustotou (HDL-C) a triglyceridy. Hladiny folátu a vitaminu B12 v séru byly měřeny kompetitivním imunotestem za použití přímé chemiluminiscenční technologie (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Německo). Hladiny homocysteinu v plazmě byly také měřeny kompetitivním imunotestem za použití přímé chemiluminiscenční technologie (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, USA). Glukóza, kreatinin, celkový cholesterol, HDL-c a triglyceridy byly měřeny standardními laboratorními metodami.

Velikost vzorku a randomizace Výpočty síly ukázaly, že celkový počet 15 účastníků na skupinu by bylo schopno detekovat změnu vaskulární odpovědi 4 ml/min/100 ml během reaktivní hyperémie mezi skupinami, se silou 80 % a α=0,05. Pro rozdělení účastníků bylo dosaženo randomizace pomocí počítačem generovaného seznamu náhodných čísel a vyšetřovatelé zůstali slepí, dokud nebyla studie dokončena. Účastníci byli náhodně rozděleni do skupin léčených placebem nebo kyselinou folinovou. Randomizační postup byl proveden ve třech blocích po 10 a byl stratifikován podle pohlaví, aby se zajistil relativně stejný počet mužů a žen v každé léčebné skupině.

Kapsle kyseliny folinové a placeba byly nerozlišitelné ve tvaru, velikosti a také barvě. Byly předem zabaleny do identických lahviček a postupně očíslovány pro každého pacienta podle schématu randomizace. Doplňky byly kódovány tak, aby si vyšetřovatelé ani účastníci nebyli vědomi obsahu. Identifikační kód pro jednotlivě zabalené lahvičky s kapslemi byl pověřen pouze člověk, který nebyl zapojen do studie.

Statistická analýza Všechny proměnné byly testovány na normální rozdělení pomocí Kolmogorova-Smirnovova testu. Normálně rozdělené proměnné jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM. Proměnné, které nejsou normálně distribuovány, jsou prezentovány jako medián (25.-75. percentil). Základní srovnání skupinových charakteristik byla provedena nepárovým t-testem nebo Mann-Whitney U testem. K porovnání odpovědí po 4 týdnech intervence byla použita dvoucestná analýza rozptylu (ANOVA) pro opakovaná měření (skupina, čas a interakce). Asociace mezi změnami sérové ​​kyseliny listové a změnami RH a asociace mezi změnami plazmatického homocysteinu a změnami RH byly hodnoceny Spearmanovým koeficientem pořadové korelace. Dvoustranná hodnota P menší než 0,05 byla považována za statisticky významnou.