Folinsäure und vaskuläre Reaktivität bei HIV

Design und Teilnehmer Dies war eine randomisierte, doppelblinde, Placebo-kontrollierte Studie. Geeignete Teilnehmer waren Personen mit bekannter HIV-Erkrankung gemäß den überarbeiteten Kriterien der Centers for Disease Control, im Alter von 18 Jahren oder älter, die mindestens 6 Monate lang ART erhielten, mit einer nicht nachweisbaren Viruslast (weniger als 50 Kopien/ml) und einer CD4-Zahl von mehr als 200 Zellen /mm3. Ausschlusskriterien waren Diabetes mellitus, aktive Infektionen, Lebererkrankungen, Nierenerkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen in der Vorgeschichte oder unkontrollierter Bluthochdruck, Schwangerschaft, Konsum illegaler Drogen und psychische Erkrankungen, die das Verständnis und die Zusammenarbeit mit der Studie beeinträchtigen würden. Patienten, die derzeit Tabak konsumieren, Nahrungsergänzungsmittel (wie Folsäure oder Antioxidantien) einnehmen oder Frauen, die sich einer Hormonersatztherapie unterziehen, wurden ebenfalls ausgeschlossen. Alle regelmäßig verwendeten Medikamente wurden während des gesamten Studienzeitraums beibehalten. Das Protokoll wurde vom Komitee für Ethik in der Forschung des Hospital de Clínicas de Porto Alegre genehmigt, und alle Teilnehmer gaben eine schriftliche Einwilligung nach Aufklärung.

Studienumfeld Die Studie wurde von August 2009 bis September 2011 in der HIV-Ambulanz des Hospital de Clínicas de Porto Alegre, einem nationalen Referenzzentrum für HIV/AIDS in Südbrasilien, durchgeführt.

Interventionen Die Teilnehmer wurden nach dem Zufallsprinzip einer 4-wöchigen Behandlung mit entweder Folinsäure (n=15) oder Placebo (n=15) zugeteilt. Die Nahrungsergänzungsschemata der Studie bestanden aus Kapseln mit 5 mg Folinsäure oder Placebo. Den Teilnehmern wurde 1 Flasche mit 30 Kapseln zur Verfügung gestellt. Die Probanden wurden angewiesen, täglich morgens 1 Kapsel einzunehmen.

Ergebnisse Die primäre Ergebnismessung war die Beurteilung der vaskulären Reaktionen der Brachialarterie während der reaktiven Hyperämie. Sekundäre Ergebnisse waren die Veränderungen der biochemischen und hämodynamischen Variablen.

Gefäßmessungen Nach einem Fasten über Nacht wurden die Bewertungen in einem temperaturgeregelten (20–22°C), ruhigen Raum durchgeführt, wobei sich die Probanden in Rückenlage befanden. Während des gesamten Protokolls wurden Blutdruck (BP) und Herzfrequenz im dominanten Arm mit einem kalibrierten oszillometrischen automatischen Gerät (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Florida, USA) gemessen. Der Blutfluss im Unterarm wurde durch venöse Okklusionsplethysmographie (D.E. Hokanson, Washington, USA) in der nichtdominanten Extremität, wie zuvor beschrieben, gemessen. Kurz gesagt, am Oberarm wurde eine Schnellaufblasmanschette verwendet, um den venösen Abfluss zu verschließen, und die Handzirkulation wurde durch Anlegen einer Manschette um das Handgelenk angehalten. Eine reaktive Hyperämie (RH) wurde induziert, indem eine Manschette bei 250 mmHg am Oberarm angelegt und nach 5 min losgelassen wurde. Alle Flussaufzeichnungen wurden manuell von einem Bediener verfolgt, der für die Gruppen und die Zeit blind war. Die Reproduzierbarkeit der Durchflussmessungen in unserem Labor hat Intraday- und Interday-Variationskoeffizienten von 6,9 bzw. 9,2 %. Nach 15 min Ruhe wurden 2,5 mg Isosorbiddinitrat (Isordil®, Sigma, Brasilien) sublingual als Endothel-unabhängiger Vasodilatator verabreicht. Fünf Minuten später wurde eine Endothel-unabhängige Vasodilatation der A. brachialis gemessen.

Labormessungen Alle Proben wurden nach nächtlichem Fasten vor und nach 4-wöchiger Intervention entnommen. Bei jedem Probanden wurden die Gesamtplasmahomocysteinkonzentration, Serumfolat, Vitamin B12, Glucose, Kreatinin, Gesamtcholesterin, High-Density-Lipoprotein-Cholesterin (HDL-C) und Triglyceride gemessen. Serum-Folat- und Vitamin-B12-Spiegel wurden durch einen kompetitiven Immunoassay unter Verwendung von direkter Chemilumineszenz-Technologie (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Deutschland) gemessen. Plasma-Homocysteinspiegel wurden auch durch einen kompetitiven Immunoassay unter Verwendung von direkter Chemilumineszenz-Technologie (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, USA) gemessen. Glukose, Kreatinin, Gesamtcholesterin, HDL-c und Triglyceride wurden mit Standardlabormethoden gemessen.

Stichprobengröße und Randomisierung Power-Berechnungen zeigten, dass eine Gesamtzahl von 15 Teilnehmern pro Gruppe in der Lage wäre, eine Änderung von 4 ml/min/100 ml in der Gefäßreaktion während einer reaktiven Hyperämie zwischen den Gruppen zu erkennen, mit einer Power von 80 % und α = 0,05. Für die Zuteilung der Teilnehmer wurde eine Randomisierung durch eine computergenerierte Liste von Zufallszahlen erreicht, und die Untersucher blieben bis zum Abschluss der Studie blind. Die Teilnehmer wurden nach dem Zufallsprinzip Placebo- oder Folinsäure-Behandlungsgruppen zugeordnet. Das Randomisierungsverfahren wurde in drei 10er-Blöcken durchgeführt und nach Geschlecht stratifiziert, um eine relativ gleiche Anzahl von Männern und Frauen in jeder Behandlungsgruppe sicherzustellen.

Folinsäure- und Placebo-Kapseln waren in Form, Größe und Farbe nicht zu unterscheiden. Sie wurden in identischen Flaschen vorverpackt und gemäß dem Randomisierungsplan für jeden Patienten fortlaufend nummeriert. Die Beilagen wurden so kodiert, dass weder die Untersucher noch die Teilnehmer den Inhalt kannten. Eine Person, die nicht mit der Studie verbunden war, war die einzige, die mit dem Identifizierungscode für die einzeln verpackten Kapselflaschen betraut war.

Statistische Analyse Alle Variablen wurden mit dem Kolmogorov-Smirnov-Test auf Normalverteilung getestet. Normalverteilte Variablen werden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt. Nicht normalverteilte Variablen werden als Median (25.-75. Perzentil) dargestellt. Baseline-Vergleiche der Gruppenmerkmale wurden mit dem ungepaarten t-Test oder dem Mann-Whitney-U-Test durchgeführt. Um die Reaktionen nach 4 Wochen Intervention zu vergleichen, wurde eine zweifache Varianzanalyse (ANOVA) für wiederholte Messungen (Gruppe, Zeit und Interaktion) verwendet. Assoziationen zwischen Änderungen der Folsäure im Serum und Änderungen der RH und Assoziationen zwischen Änderungen des Homocysteins im Plasma und Änderungen der RH wurden mit dem Rangkorrelationskoeffizienten nach Spearman bewertet. Ein zweiseitiger P-Wert von weniger als 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.