Folinsyra och vaskulär reaktivitet i HIV

Design och deltagare Detta var en randomiserad, dubbelblind, placebokontrollerad studie. Kvalificerade deltagare var individer med känd HIV-sjukdom enligt Centers for Disease Controls reviderade kriterier, 18 år eller äldre, på ART i minst 6 månader, med odetekterbar virusmängd (mindre än 50 kopior/ml) och CD4-tal över 200 celler /mm3. Uteslutningskriterier var diabetes mellitus, någon aktiv infektion, leversjukdom, njursjukdom, historia av hjärt-kärlsjukdom eller okontrollerad hypertoni, graviditet, användning av olaglig drog och psykisk sjukdom som skulle äventyra förståelsen och samarbetet med studien. Patienter som för närvarande använder tobak, tar något kosttillskott (som folsyra eller antioxidanter) eller kvinnor som tar hormonersättningsterapi exkluderades också. Alla mediciner i regelbunden användning bibehölls under hela studieperioden. Protokollet godkändes av kommittén för etik i forskning vid Hospital de Clínicas de Porto Alegre, och alla deltagare gav skriftligt informerat samtycke.

Studiemiljöer Studien ägde rum på HIV-polikliniken på Hospital de Clínicas de Porto Alegre, ett nationellt referenscenter för HIV/AIDS i södra Brasilien, från augusti 2009 till september 2011.

Interventioner Deltagarna tilldelades slumpmässigt en 4-veckors behandling med antingen folinsyra (n=15) eller placebo (n=15). Studiens kompletteringsregimer bestod av kapslarna innehållande 5 mg folinsyra eller placebo. Deltagarna fick 1 flaska, som innehöll 30 kapslar. Försökspersonerna instruerades att ta 1 kapsel dagligen på morgonen.

Resultat Det primära utfallsmåttet var bedömning av vaskulära svar i armartären under reaktiv hyperemi. Sekundära utfall var förändringarna på de biokemiska och hemodynamiska variablerna.

Vaskulära mätningar Efter fasta över natten utfördes bedömningarna i ett temperaturkontrollerat (20-22°C), tyst rum, med försökspersonerna i ryggläge. Under hela protokollet mättes blodtryck (BP) och hjärtfrekvens i den dominerande armen med användning av en kalibrerad oscillometrisk automatisk enhet (Dinamap 1846 SX/P; Critikon, Florida, USA). Underarmsblodflöde mättes med venös ocklusionspletysmografi (D.E. Hokanson, Washington, USA), i den icke-dominanta extremiteten, som tidigare beskrivits. Kort sagt användes en snabb uppblåsningsmanschett i överarmen för att blockera venöst utflöde och handcirkulationen stoppades genom att man placerade en manschett runt handleden. Reaktiv hyperemi (RH) inducerades genom att placera en manschett i överarmen vid 250 mmHg och släppa efter 5 min. Alla flödesregistreringar spårades manuellt av en operatör som var blind för grupperna och tid. Reproducerbarheten av flödesmätningar i vårt laboratorium har intradag- och interday-variationskoefficienter på 6,9 respektive 9,2 %. Efter 15 minuters vila administrerades 2,5 mg sublingualt isosorbiddinitrat (Isordil®, Sigma, Brasilien) som en endoteloberoende vasodilator. Fem minuter senare mättes endoteloberoende vasodilatation av brachialisartären.

Laboratoriemätningar Alla prover togs efter fasta över natten, före och efter 4 veckors intervention. För varje individ mättes total plasmakoncentration av homocystein, serumfolat, vitamin B12, glukos, kreatinin, totalkolesterol, högdensitetslipoproteinkolesterol (HDL-C) och triglycerider. Nivåer av folat och vitamin B12 i serum mättes med en kompetitiv immunanalys med användning av direkt kemiluminescerande teknologi (Bayer ADVIA Centaur, Leverkusen, Tyskland). Homocysteinnivåer i plasma mättes också med en kompetitiv immunanalys med användning av direkt kemiluminescent teknologi (IMMULITE 2000 Siemens, Illinois, USA). Glukos, kreatinin, totalt kolesterol, HDL-c och triglycerider mättes med standardlaboratoriemetoder.

Provstorlek och randomisering Kraftberäkningar visade att totalt 15 deltagare per grupp skulle kunna detektera en förändring på 4ml/min/100ml i vaskulär respons under reaktiv hyperemi mellan grupper, med en styrka på 80% och α=0,05. För tilldelning av deltagarna uppnåddes randomisering genom datorgenererad lista med slumptal, och utredarna förblev blinda tills studien var klar. Deltagarna fördelades slumpmässigt till placebo- eller folinsyrabehandlingsgrupper. Randomiseringsproceduren utfördes i tre block om 10 och stratifierades efter kön, för att säkerställa ett relativt lika antal män och kvinnor i varje behandlingsgrupp.

Folinsyra och placebokapslar var omöjliga att särskilja i form, storlek och färg. De var förpackade i identiska flaskor och numrerade i följd för varje patient, enligt randomiseringsschemat. Tilläggen kodades så att varken utredarna eller deltagarna kände till innehållet. En person som inte var ansluten till studien var den enda som anförtroddes identifieringskoden för de individuellt förpackade flaskorna med kapslar.

Statistisk analys Alla variabler testades för normalfördelning med Kolmogorov-Smirnov-testet. Normalfördelade variabler uttrycks som medelvärde ± SEM. Variabler som inte är normalfördelade presenteras som median (25:e-75:e percentilen). Baslinjejämförelser av gruppegenskaper utfördes med oparat t-test eller Mann-Whitney U-test. För att jämföra svar efter 4 veckors intervention användes en tvåvägsvariansanalys (ANOVA) för upprepade mätningar (grupp, tid och interaktion). Samband mellan förändringar i serumfolsyra och förändringar i RH och samband mellan förändringar i plasmahomocystein och förändringar i RH utvärderades med Spearmans rangkorrelationskoefficient. Ett tvåsidigt P-värde på mindre än 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.