Spermmorfologi ved høy forstørrelse hos fertilitetsmenn (FERTIFORT)

Populasjonen som ble studert besto av 50 menn i alderen 18 til 45 år med påvist spontan fertilitet. Alle forsøkspersoner ga sitt informerte samtykke til å delta i studien. Etter avhør om fullstendig medisinsk og andrologisk historie, ble sædprøver samlet ved onani etter 2 til 5 dager med seksuell avholdenhet og ble behandlet for analyse etter flytendegjøring i 20 minutter ved 37 °C. Vi utførte en spermtelling, motilitet, vitalitet og konvensjonell morfologianalyse samt en detaljert morfometrisk analyse av vakuolene ved høy forstørrelse ved hjelp av en bildeanalyseprogramvare. For analysen ved høy forstørrelse ble femti mikroliter fersk sperm vasket i 2,5 ml vaskeløsning ved sentrifugering i 5 minutter ved 400 g. Pelleten ble resuspendert i 100 ul vaskeløsning og spermatozoene ble fiksert ved tilsetning av 100 ul fosfatbuffer saltvann-formaldehyd 3,7 %. To mikroliter av denne suspensjonen ble plassert i en skål med glassbunn og undersøkt ved Nomarski interferenskontrastmikroskopi med et kamera montert på et mikroskop med en nedsenkingsobjektivlinse x100. For hver prøve ble spermhodevakuoler analysert på 100 spermatozoer som ble tilfeldig fotografert og separat analysert ved bruk av digitalt bildesystemprogramvare. Målinger ved hjelp av programvaren ble utført av en enkelt operatør. Den interaktive målemodulen tillater måling av spermhodeområder og vakuoleområder ved å avbilde omrisset manuelt. Arealet og posisjonen til hver vakuole ble registrert.