Morfología de espermatozoides por alta magnificación en hombres de fertilidad (FERTIFORT)

La población estudiada estuvo constituida por 50 hombres de 18 a 45 años con fertilidad espontánea comprobada. Todos los sujetos dieron su consentimiento informado para participar en el estudio. Después de un interrogatorio sobre el historial médico y andrológico completo, las muestras de semen se recolectaron por masturbación después de 2 a 5 días de abstinencia sexual y se procesaron para su análisis después de la licuefacción durante 20 min a 37°C. Realizamos un análisis de conteo espermático, motilidad, vitalidad y morfología convencional, así como un análisis morfométrico detallado de las vacuolas a gran aumento utilizando un software de análisis de imágenes. Para el análisis a gran aumento, se lavaron cincuenta microlitros de semen fresco en 2,5 ml de solución de lavado por centrifugación durante 5 minutos a 400 g. El sedimento se resuspendió en 100 µl de solución de lavado y los espermatozoides se fijaron mediante la adición de 100 µl de tampón fosfato salino-formaldehído al 3,7 %. Se colocaron dos microlitros de esta suspensión en un plato con fondo de vidrio y se examinaron por microscopía de contraste de interferencia Nomarski con una cámara montada en un microscopio con una lente de objetivo de inmersión x100. Para cada muestra, las vacuolas de la cabeza de los espermatozoides se analizaron en 100 espermatozoides que se fotografiaron al azar y se analizaron por separado utilizando un software de sistema de imágenes digitales. Las mediciones con el software fueron realizadas por un solo operador. El módulo de Medición Interactiva permite medir las áreas de la cabeza del espermatozoide y las áreas de las vacuolas representando manualmente su contorno. Se registraron el área y la posición de cada vacuola.