Spermamorfologie door hoge vergroting bij vruchtbaarheidsmannen (FERTIFORT)

De onderzochte populatie bestond uit 50 mannen van 18 tot 45 jaar met bewezen spontane vruchtbaarheid. Alle proefpersonen gaven hun geïnformeerde toestemming om deel te nemen aan het onderzoek. Na ondervraging van de volledige medische en andrologische geschiedenis werden spermamonsters verzameld door middel van masturbatie na 2 tot 5 dagen seksuele onthouding en werden verwerkt voor analyse na liquefactie gedurende 20 minuten bij 37°C. We voerden een spermatelling, motiliteit, vitaliteit en conventionele morfologieanalyse uit, evenals een gedetailleerde morfometrische analyse van de vacuolen bij sterke vergroting met behulp van beeldanalysesoftware. Voor de analyse bij sterke vergroting werd vijftig microliter vers sperma gewassen in 2,5 ml wasoplossing door middel van centrifugatie gedurende 5 minuten bij 400 g. De pellet werd opnieuw gesuspendeerd in 100 µl wasoplossing en de spermatozoa werden gefixeerd door toevoeging van 100 µl fosfaatbuffer Saline-formaldehyde 3,7%. Twee microliter van deze suspensie werd in een schaal met glazen bodem geplaatst en onderzocht door middel van Nomarski interferentiecontrastmicroscopie met een camera gemonteerd op een microscoop met een immersie objectieflens x100. Voor elk monster werden spermakopvacuolen geanalyseerd op 100 spermatozoa die willekeurig werden gefotografeerd en afzonderlijk werden geanalyseerd met behulp van digitale beeldvormingssysteemsoftware. Metingen met behulp van de software werden uitgevoerd door één operator. Met de interactieve meetmodule kunnen gebieden van spermakoppen en vacuoles worden gemeten door hun omtrek handmatig weer te geven. Het gebied en de positie van elke vacuole werden geregistreerd.