Spermamorfologi genom hög förstoring hos fertilitetsmän (FERTIFORT)

Den studerade populationen bestod av 50 män i åldrarna 18 till 45 år med bevisad spontan fertilitet. Alla försökspersoner gav sitt informerade samtycke till att delta i studien. Efter förhör om fullständig medicinsk och andrologisk historia, samlades spermaprover genom onani efter 2 till 5 dagars sexuell avhållsamhet och bearbetades för analys efter flytande under 20 minuter vid 37°C. Vi genomförde en spermieräkning, rörlighet, vitalitet och konventionell morfologianalys samt en detaljerad morfometrisk analys av vakuolerna vid hög förstoring med hjälp av en bildanalysmjukvara. För analysen vid hög förstoring tvättades femtio mikroliter färsk sperma i 2,5 ml tvättlösning genom centrifugering under 5 minuter vid 400 g. Pelleten återsuspenderades i 100 µl tvättlösning och spermierna fixerades genom tillsats av 100 µl fosfatbuffert Salin-formaldehyd 3,7 %. Två mikroliter av denna suspension placerades i en skål med glasbotten och undersöktes med Nomarski interferenskontrastmikroskopi med en kamera monterad på ett mikroskop med en immersionsobjektiv x100. För varje prov analyserades spermiehuvudvakuoler på 100 spermier som fotograferades slumpmässigt och analyserades separat med användning av programvara för digital bildbehandling. Mätningar med hjälp av programvaran utfördes av en enda operatör. Den interaktiva mätningsmodulen tillåter mätning av spermiehuvudområden och vakuolområden genom att manuellt avbilda deras konturer. Arean och positionen för varje vakuol registrerades.