Infusjon av donorregulerende T-celler hos pasienter med kronisk graft-versus-host-sykdom (GVHD)

BEHANDLINGSPLAN

1 Immunsuppressive legemidler (DTI og kontrollarmer)

• Rapa vil bli startet innen 2 uker etter inkludering. Rapa vil bli gitt med 2-6 mg startdose i én dag, etterfulgt av ca. 1 mg daglig for å oppnå et bunnnivå på 5 til 10 ng/ml. Hyppigheten av bunnnivåmålinger vil bli gjort i henhold til utrederens valg;
• Rapa kan seponeres ved opphør av kronisk GVHD ≥ 3 måneder eller ved uhåndterbare bivirkninger eller progresjon av kronisk GVHD.
• Seponering av kalsineurinhemmer innen 2 uker etter rapa-start. Ingen annen modifikasjon av immunsuppressive legemidler og spesielt ingen reduksjon i dosen av steroider (med mindre det er nødvendig for bivirkninger).

• Evaluering av kronisk GVHD 60 dager etter rapa-initiering. DTI vil ikke bli gitt til pasienter som hadde progresjon av GVHD på dag 60, og heller ikke hos de som er i CR av GVHD.

  2. Innsamling av donorlymfocytter (DTI-arm)

• Aferese av donor vil bli utført 60-90 dager etter første dag med rapa-administrering til pasienten. Det vil ikke være noen spesiell forberedelse av donor før leukaferese. Etter skriftlig informert samtykke vil donor gjennomgå leukafereser på 1 dag. Leukaferese vil bli utført ved å bruke en kontinuerlig blodcelleseparator og følge en mononukleær celleinnsamlingsprotokoll. Volumet av behandlet blod vil være 20 liter. Antikoagulering vil bli utført med ACD-A/heparinløsningen.

  3. Tregseleksjon og infusjon (DTI-arm)

• Treg vil bli isolert ved LTCG til CHU i Liège fra afereseprodukt med CliniMACS-separasjonssystemet (MiltenyiBiotec) etter en to-trinns prosedyre (CD8- og CD19-utarming etterfulgt av CD25-positiv seleksjon) i henhold til produsentens anbefaling. Alikvoter (≈ 3 mL) av Treg-produktet vil bli lagret for analyser.
• Treg vil bli infundert i.v.60-90 dager etter første dag med rapa-administrasjon og etter seponering av kalsineurinhemmer. Ingen DTI vil bli utført i kontrollarmen.
• Lavdose Il-2 (1x106 IE/dag) vil bli startet dagen med DTI og vil fortsette i en periode på 2 måneder for å utvide infundert donor Tregs.

PASIENTERS OPPFØLGING

1. Kvalitetskontroll av celleprodukter 1.1 Perifert blod.

   Følgende laboratorieanalyser vil bli utført i det perifere blodet til giveren på dagene med lymfocyttsamling:

   • Nukleert celletall og differensial i en automatisert celleteller;

   1.1.2 Leukafereseprodukt samt start-, mellom- og sluttfraksjoner av Treg-utvalg.

   Følgende laboratorieanalyser vil bli utført i lymfocyttsamlingen samt start-, mellom- og sluttfraksjoner av Treg-utvalget:

   • Antall kjerneceller og differensial på en automatisert celleteller;

   • FACS-analyse med bestemmelse av %-cellene (på total WBC) med markørene: CD20-FITC (Miltenyi #130-091-110), CD14-PE (Miltenyi #130-091-412), CD15-PE (Miltenyi #130 -091-390), CD56-PE (Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue (Miltenyi #130-092-497), CD8-APC (Miltenyi #130-091-083), PropidiumIodid #130yi -093-233), T reg Detection Kit (CD4/Cd25/CD127) (Miltenyi #130-096-076), og Treg Detection Kit#2 (CD4/CD25/Foxp3)-APC (Miltenyi #130-094-158 ).
   • Treg-fenotype ved bruk av følgende markører: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 og KI67.
   • Estimering av Treg-funksjon42.
   • Metyleringsstatus for CpG-dinukleotider lokalisert i en konservert region av FoxP3-intron
   • Cellelevedyktighet ved utelukkelse av trypanblått.
   • Mikrobiologitesting inkludert standard virologi og bakteriekultur.

   1.1.3 Utgivelseskriterier.

   Følgende kriterier må oppfylles for utgivelse:

   • ≥ 0,5 x 106 celler/kg mottaker;

   • ≥ 55 % CD4+FoxP3+;
   • Levedyktighet > 80 %;
   • <0,05 x 106 CD45+CD8+ celler/kg.
2. Giftighet ved celleinfusjoner. Potensielle toksisiteter forbundet med Treg-infusjoner vil bli nøye overvåket i henhold til standardprosedyrer.

3. Kliniske data

   Pasienten vil bli nøye observert og følgende kliniske parametere vil bli registrert:

   • Forekomst, tidspunkt og alvorlighetsgrad av akutt GVHD etter DTI, dens behandling og utfall;

   • Evolusjon av kronisk GVHD, dens behandling og utfall. Mer spesifikt vil kronisk GVHD (inkludert gjeldende immunsuppressiv terapi) bli vurdert for hvert organ i henhold til den reviderte NIH-konsensus:
   • Forekomst, tidspunkt og alvorlighetsgrad av sekundær cytopeni, dens behandling og utfall;
   • Forekomst, tidspunkt og alvorlighetsgrad av bakterielle, virale, sopp- og protozoinfeksjoner
   • Varighet av sykehusinnleggelse hvis noen;
   • Evolusjon av den primære ondartede sykdommen: respons hvis ikke i CR på tidspunktet for inkludering, tilbakefall, dens behandling og utfall;
   • Enhver annen alvorlig komplikasjon forbundet med transplantasjonsprosedyren;
   • Død og overlevelse.
4. Immunologiske data (utført i GIGA ved ULG for alle unntatt analysene av metyleringsstatus for CpG-dinukleotider lokalisert i en konservert region av FoxP3 intron 1 som vil bli utført ved UCL).

1) Immungjenoppretting I (flowcytometri). Følgende analyser vil bli utført (starter med 5 mL blod).

2) Immungjenoppretting II. Isolering av T-celleundersett for analyser av repertoarmangfold gjennom neste generasjons sekvensering (NGS; fra 50 ml blod). Følgende undersett vil bli isolert (~50 000 celler hver) og deretter kryokonservert:

• CD4+ CD25+ regulatoriske T-celler (naive, aktiverte og minne),
• CD4+ CD25- ikke-regulatoriske T-celler (naive/minne), og
• CD8+ cytotoksiske T-celler (naive/minne).