만성 이식편대숙주병(GVHD) 환자의 기증자 조절 T 세포 주입

치료 계획

1 면역억제제(DTI 및 대조군)

• Rapa는 포함 후 2주 이내에 시작됩니다. Rapa는 1일 동안 2-6mg 부하 용량으로 투여된 후 5-10ng/mL의 목표 최저 수준을 달성하기 위해 매일 약 1mg이 투여됩니다. 저점 레벨 측정의 빈도는 조사자의 선택에 따라 수행됩니다.
• Rapa는 만성 GVHD ≥ 3개월의 해결 또는 관리할 수 없는 부작용 또는 만성 GVHD의 진행의 경우 중단될 수 있습니다.
• rapa 개시 후 2주 이내에 칼시뉴린 억제제 중단. 면역억제제의 다른 변형이 없으며 특히 스테로이드 용량의 감소가 없습니다(부작용이 필요한 경우 제외).

• rapa 개시 후 60일째 만성 GVHD의 평가. DTI는 60일에 GVHD가 진행된 환자나 GVHD의 CR에 있는 환자에게는 제공되지 않습니다.

  2. 기증자 림프구 수집(DTI 팔)

• 기증자의 성분채집술은 환자에게 라파 투여 첫날로부터 60-90일 후에 수행됩니다. 백혈구 성분채집술 전에 기증자의 특별한 준비는 없을 것입니다. 서면 동의 후 기증자는 1일에 백혈구 성분 분석을 받게 됩니다. 백혈구 성분채집술은 연속 흐름 혈액 세포 분리기를 사용하고 단핵 세포 수집 프로토콜에 따라 수행됩니다. 처리되는 혈액의 양은 20리터입니다. 항응고는 ACD-A/헤파린 용액으로 수행됩니다.

  3. Tregselection 및 주입(DTI 팔)

• Treg는 제조업체의 권장 사항에 따라 2단계 절차(CD8 및 CD19 고갈 후 CD25 양성 선택)에 따라 CliniMACS 분리 시스템(MiltenyiBiotec)을 사용하여 성분 채집 제품으로부터 Liège의 CHU의 LTCG에서 분리됩니다. 분석을 위해 Treg 제품의 분취량(≈ 3mL)이 저장됩니다.
• Treg는 rapa 투여 첫날과 칼시뉴린 억제제 중단 후 60-90일에 i.v.주입됩니다. 컨트롤 암에서는 DTI가 수행되지 않습니다.
• 저용량 Il-2(1x106 IU/일)는 DTI 당일에 시작하여 주입된 기증자 Treg를 확장하기 위해 2개월 동안 계속됩니다.

환자의 후속 조치

1. 세포 제품의 품질 관리 1.1 말초 혈액.

   림프구 수집일에 기증자의 말초 혈액에서 다음과 같은 실험실 분석이 수행됩니다.

   • 자동 세포 계수기에서 유핵 세포 계수 및 차등;

   1.1.2 Treg 선택의 시작, 중간 및 최종 분획뿐만 아니라 백혈구 성분채집술 제품.

   다음 실험실 분석은 Treg 선택의 시작, 중간 및 최종 분획뿐만 아니라 림프구 수집에서 수행됩니다.

   • 자동 세포 계수기의 유핵 세포 수 및 차등;

   • 다음 마커를 사용하여 % 세포(총 WBC에서)를 결정하는 FACS 분석: CD20-FITC(Miltenyi #130-091-110), CD14-PE(Miltenyi #130-091-412), CD15-PE(Miltenyi #130) -091-390), CD56-PE(Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue(Miltenyi #130-092-497), CD8-APC(Miltenyi #130-091-083), PropidiumIodid(Miltenyi #130 -093-233), Treg 검출 키트(CD4/Cd25/CD127)(Miltenyi #130-096-076) 및 Treg 검출 키트#2(CD4/CD25/Foxp3)-APC(Miltenyi #130-094-158) ).
   • 다음 마커를 사용한 Treg 표현형: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 및 KI67.
   • Treg 함수 추정42.
   • FoxP3 인트론의 보존 영역에 위치한 CpG 디뉴클레오티드의 메틸화 상태
   • 트리판 블루 배제에 의한 세포 생존율.
   • 표준 바이러스학 및 세균 배양을 포함한 미생물학 테스트.

   1.1.3 출시 기준.

   릴리스를 위해서는 다음 기준을 충족해야 합니다.

   • ≥ 0.5 x106 cells/kg 수용자;

   • ≥ 55% CD4+FoxP3+;
   • 생존율 > 80%;
   • <0.05 x 106 CD45+CD8+ 세포/kg.
2. 세포 주입의 독성 Treg 주입과 관련된 잠재적 독성은 표준 절차에 따라 주의 깊게 모니터링됩니다.

3. 임상 데이터

   환자를 주의 깊게 관찰하고 다음 임상 매개변수를 기록합니다.

   • DTI 후 급성 GVHD의 발생률, 시기 및 중증도, 치료 및 결과;

   • 만성 GVHD의 진화, 치료 및 결과. 보다 구체적으로, 만성 GVHD(현재의 면역억제 요법 포함)는 개정된 NIH 합의에 따라 각 장기에 대해 평가됩니다.
   • 속발성 혈구감소증의 발생률, 시기 및 중증도, 치료 및 결과;
   • 박테리아, 바이러스, 진균 및 원충 감염의 발생률, 시기 및 중증도
   • 입원 기간이 있는 경우
   • 원발성 악성 질환의 진화: 포함 시점에 CR이 아닌 경우 반응, 재발, 치료 및 결과;
   • 이식 절차와 관련된 기타 심각한 합병증
   • 죽음과 생존.
4. 면역학적 데이터(UCL에서 수행될 FoxP3 인트론 1의 보존된 영역에 위치한 CpG 디뉴클레오티드의 메틸화 상태 분석을 제외한 모든 것에 대해 ULG의 GIGA에서 수행됨).

1) 면역 회복 I(유세포 분석법). 다음 분석이 수행됩니다(혈액 5mL부터 시작).

2) 면역 회복 II. 차세대 시퀀싱(NGS; 혈액 50mL에서 시작)을 통한 레퍼토리 다양성 분석을 위한 T 세포 하위 집합의 분리. 다음 하위 집합이 분리되고(각각 ~50,000개 세포) 냉동 보존됩니다.

• CD4+ CD25+ 조절 T 세포(순진, 활성화 및 기억),
• CD4+ CD25- 비조절 T 세포(순진/기억), 및
• CD8+ 세포독성 T 세포(나이브/기억).