Donor szabályozó T-sejt-infúzió krónikus graft-versus-host betegségben (GVHD) szenvedő betegeknél

KEZELÉSI TERV

1 Immunszuppresszív szerek (DTI és kontroll karok)

• A Rapa a felvételt követő 2 héten belül megkezdődik. A Rapa-t 2-6 mg telítő adagban kell beadni egy napig, majd körülbelül napi 1 mg-ot, hogy elérjék az 5-10 ng/ml-es minimális minimális szintet. A mélyponti szintmérés gyakorisága a vizsgáló választása szerint történik;
• A Rapa abbahagyható a krónikus GVHD ≥ 3 hónapos megszűnése esetén, vagy kezelhetetlen mellékhatások vagy a krónikus GVHD progressziója esetén.
• A kalcineurin-gátló kezelés abbahagyása a rapa kezelés megkezdése után 2 héten belül. Az immunszuppresszív gyógyszerek egyéb módosítása, különösen a szteroidok adagjának csökkentése tilos (kivéve, ha mellékhatások miatt szükséges).

• A krónikus GVHD értékelése 60 nappal a rapa megkezdése után. A DTI-t nem adják be azoknak a betegeknek, akiknél a GVHD a 60. napon progressziója volt, sem azoknál, akiknél a GVHD CR-ben van.

  2. Donor limfociták gyűjtése (DTI kar)

• A donor aferézisét 60-90 nappal a rapa betegnek történő beadása után kell elvégezni. A leukaferézis előtt a donort nem kell különösebben előkészíteni. A donor írásos beleegyezését követően 1 napon belül leukaferézisnek vetik alá. A leukaferézist folyamatos áramlású vérsejt-leválasztóval és mononukleáris sejtgyűjtési protokollt követve hajtják végre. A feldolgozott vér térfogata 20 liter lesz. Az antikoagulációt ACD-A/heparin oldattal végezzük.

  3. Tregszelekció és infúzió (DTI kar)

• A Treg izolálása a Liège-i CHU LTCG-jében történik az aferézis termékből a CliniMACS elválasztó rendszerrel (MiltenyiBiotec) egy kétlépéses eljárást követően (CD8 és CD19 kiürítés, majd CD25 pozitív szelekció) a gyártó ajánlása szerint. A Treg-termék alikvot részeit (≈ 3 ml) a rendszer elmenti az elemzésekhez.
• A Treg-et intravénás infúzióban adják be 60-90 nappal a rapa beadása első napja és a kalcineurin-inhibitor abbahagyása után. A vezérlőkarban nem történik DTI.
• Az alacsony dózisú Il-2-t (1x106 NE/nap) a DTI napján kezdik, és 2 hónapig folytatják az infúzióban beadott donor Treg-ek kiterjesztése érdekében.

A BETEGEK NYOMON KÖVETÉSE

1. Sejttermékek minőségellenőrzése 1.1 Perifériás vér.

   A limfocitagyűjtés napjain a donor perifériás vérében a következő laboratóriumi vizsgálatokat kell elvégezni:

   • Magos sejtek száma és differenciálódása automatizált sejtszámlálóban;

   1.1.2 Leukaferézis termék, valamint a Treg szelekció kezdő, köztes és végső frakciói.

   A limfocita gyűjtésben, valamint a Treg szelekció kezdő, köztes és végső frakcióiban a következő laboratóriumi elemzéseket kell elvégezni:

   • Magsejtek száma és differenciálódása egy automata sejtszámlálón;

   • FACS analízis a sejtek százalékos arányának meghatározásával (összes fehérvérsejtszámon) a következő markerekkel: CD20-FITC (Miltenyi #130-091-110), CD14-PE (Miltenyi #130-091-412), CD15-PE (Miltenyi #130) -091-390), CD56-PE (Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue (Miltenyi #130-092-497), CD8-APC (Miltenyi #130-091-083), PropidiumJodid (Miltenyi #13 -093-233), T reg Detection Kit (CD4/Cd25/CD127) (Miltenyi #130-096-076) és Treg Detection Kit#2 (CD4/CD25/Foxp3)-APC (Miltenyi #130-094-158) ).
   • Treg fenotípus a következő markerek használatával: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 és KI67.
   • A Treg függvény becslése42.
   • A FoxP3 intron konzervált régiójában található CpG dinukleotidok metilációs állapota
   • A sejtek életképessége tripánkék kizárással.
   • Mikrobiológiai vizsgálatok, beleértve a standard virológiát és baktériumtenyészetet.

   1.1.3. Kiadási feltételek.

   A következő feltételeknek kell megfelelni a kiadáshoz:

   • ≥ 0,5 x 106 sejt/kg recipiens;

   • ≥ 55% CD4+FoxP3+;
   • Életképesség > 80%;
   • <0,05 x 106 CD45+CD8+ sejt/kg.
2. Sejtinfúziók toxicitása A Treg-infúziókkal kapcsolatos lehetséges toxicitásokat standard eljárások szerint gondosan ellenőrizni kell.

3. Klinikai adatok

   A pácienst gondosan megfigyelik, és a következő klinikai paramétereket rögzítik:

   • A DTI-t követő akut GVHD előfordulása, időzítése és súlyossága, kezelése és kimenetele;

   • A krónikus GVHD evolúciója, kezelése és kimenetele. Pontosabban, a krónikus GVHD-t (beleértve a jelenlegi immunszuppresszív terápiát is) minden szervre vonatkozóan értékelik a felülvizsgált NIH konszenzusnak megfelelően:
   • A másodlagos citopénia előfordulása, időzítése és súlyossága, kezelése és kimenetele;
   • Bakteriális, vírusos, gombás és protozoonfertőzések előfordulása, időzítése és súlyossága
   • A kórházi kezelés időtartama, ha van ilyen;
   • Az elsődleges rosszindulatú betegség evolúciója: válasz, ha nincs CR-ben a felvétel időpontjában, visszaesés, kezelése és kimenetele;
   • A transzplantációs eljárással kapcsolatos bármely egyéb súlyos szövődmény;
   • Halál és túlélés.
4. Immunológiai adatok (a GIGA-ban az ULG-ben a FoxP3 intron 1 konzervált régiójában található CpG-dinukleotidok metilációs állapotának elemzése kivételével, amelyeket az UCL-ben végeznek el).

1) Immunregeneráció I (áramlási citometria). A következő elemzéseket végzik el (5 ml vérrel kezdve).

2) Immun helyreállítás II. T-sejt alcsoportok izolálása a repertoár diverzitásának elemzéséhez a következő generációs szekvenálás (NGS; 50 ml vérből) segítségével. A következő részhalmazokat izoláljuk (egyenként kb. 50 000 sejtet), majd mélyhűtéssel tartósítjuk:

• CD4+ CD25+ szabályozó T-sejtek (naiv, aktivált és memória),
• CD4+ CD25- nem szabályozó T-sejtek (naív/memória), ill
• CD8+ citotoxikus T-sejtek (naiv/memória).