Infusion av donatorreglerande T-celler hos patienter med kronisk graft-versus-host-sjukdom (GVHD)

BEHANDLINGSPLAN

1 Immunsuppressiva läkemedel (DTI och kontrollarmar)

• Rapa kommer att påbörjas inom 2 veckor efter inkluderingen. Rapa kommer att ges med 2-6 mg laddningsdos under en dag, följt av cirka 1 mg dagligen för att uppnå en dalnivå på 5 till 10 ng/ml. Frekvensen av dalnivåmätningar kommer att göras enligt utredarens val;
• Rapa kan avbrytas vid upplösning av kronisk GVHD ≥ 3 månader eller vid ohanterbara biverkningar eller progression av kronisk GVHD.
• Avbrytande av kalcineurinhämmare inom 2 veckor efter påbörjad rapa. Ingen annan modifiering av immunsuppressiva läkemedel och i synnerhet ingen minskning av dosen av steroider (såvida det inte är nödvändigt för biverkningar).

• Utvärdering av kronisk GVHD 60 dagar efter rapa-initiering. DTI kommer inte att ges till patienter som hade progression av sin GVHD på dag 60 eller till de som är i CR av sin GVHD.

  2. Samling av donatorlymfocyter (DTI-arm)

• Aferes av donatorn kommer att utföras 60-90 dagar efter första dagen av rapa-administrering till patienten. Det kommer inte att ske någon speciell förberedelse av donatorn före leukaferes. Efter skriftligt informerat samtycke kommer donatorn att genomgå leukafereser på 1 dag. Leukaferes kommer att utföras med hjälp av en blodcellsseparator med kontinuerligt flöde och enligt ett protokoll för insamling av mononukleära celler. Volymen av bearbetad blod kommer att vara 20 liter. Antikoagulation kommer att utföras med ACD-A/heparinlösningen.

  3. Tregselektion och infusion (DTI-arm)

• Treg kommer att isoleras vid LTCG av CHU i Liège från aferesprodukt med CliniMACS-separationssystemet (MiltenyiBiotec) efter en tvåstegsprocedur (CD8- och CD19-utarmning följt av CD25-positivt urval) enligt tillverkarens rekommendation. Alikvoter (≈ 3 mL) av Treg-produkten kommer att sparas för analyser.
• Treg kommer att infunderas i.v. 60-90 dagar efter första dagen av rapa-administrering och efter utsättning av kalcineurinhämmare. Ingen DTI kommer att utföras i kontrollarmen.
• Lågdos Il-2 (1x106 IE/dag) kommer att startas dagen för DTI och kommer att fortsätta under en period av 2 månader för att utöka infunderade donator Tregs.

PATIENTERNAS UPPFÖLJNING

1. Kvalitetskontroller av cellprodukter 1.1 Perifert blod.

   Följande laboratorieanalyser kommer att utföras i donatorns perifera blod under dagarna för lymfocytinsamling:

   • Antal kärnceller och differential i en automatiserad cellräknare;

   1.1.2 Leukaferesprodukt samt start-, mellan- och slutfraktioner av Treg-val.

   Följande laboratorieanalyser kommer att utföras i lymfocytsamlingen samt start-, mellan- och slutfraktioner av Treg-selektionen:

   • Antal kärnceller och differential på en automatiserad cellräknare;

   • FACS-analys med bestämning av % celler (på totalt WBC) med markörerna: CD20-FITC (Miltenyi #130-091-110), CD14-PE (Miltenyi #130-091-412), CD15-PE (Miltenyi #130 -091-390), CD56-PE (Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue (Miltenyi #130-092-497), CD8-APC (Miltenyi #130-091-083), PropidiumIodid #130yi -093-233), T reg Detection Kit (CD4/Cd25/CD127) (Miltenyi #130-096-076) och Treg Detection Kit #2 (CD4/CD25/Foxp3)-APC (Miltenyi #130-094-158 ).
   • Treg-fenotyp med hjälp av följande markörer: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 och KI67.
   • Uppskattning av Treg funktion42.
   • Metyleringsstatus för CpG-dinukleotider belägna i en konserverad region av FoxP3-intron
   • Cellviabilitet genom uteslutning av trypanblått.
   • Mikrobiologiska tester inklusive standardvirologi och bakteriekultur.

   1.1.3 Utgivningskriterier.

   Följande kriterier bör uppfyllas för utgivning:

   • ≥ 0,5 x 106 celler/kg mottagare;

   • ≥ 55 % CD4+FoxP3+;
   • Viabilitet > 80 %;
   • <0,05 x 106 CD45+CD8+ celler/kg.
2. Toxicitet av cellinfusioner Potentiella toxiciteter förknippade med Treg-infusioner kommer att övervakas noggrant enligt standardprocedurer.

3. Kliniska data

   Patienten kommer att observeras noggrant och följande kliniska parametrar kommer att registreras:

   • Incidens, tidpunkt och svårighetsgrad av akut GVHD efter DTI, dess behandling och resultat;

   • Utveckling av kronisk GVHD, dess behandling och resultat. Mer specifikt kommer kronisk GVHD (inklusive nuvarande immunsuppressiv terapi) att bedömas för varje organ enligt den reviderade NIH-konsensus:
   • Incidens, tidpunkt och svårighetsgrad av sekundär cytopeni, dess behandling och resultat;
   • Förekomst, tidpunkt och svårighetsgrad av bakteriella, virus-, svamp- och protozoinfektioner
   • Varaktighet av sjukhusvistelse om någon;
   • Utveckling av den primära maligna sjukdomen: svar om inte i CR vid tidpunkten för inkludering, återfall, dess behandling och resultat;
   • Alla andra allvarliga komplikationer i samband med transplantationsproceduren;
   • Död och överlevnad.
4. Immunologiska data (utförde i GIGA vid ULG för alla utom analyserna av metyleringsstatus för CpG-dinukleotider belägna i en konserverad region av FoxP3 intron 1 som kommer att utföras vid UCL).

1) Immunåtervinning I (flödescytometri). Följande analyser kommer att utföras (börjar med 5 ml blod).

2) Immunåterhämtning II. Isolering av T-cellsundergrupper för analyser av repertoardiversitet genom nästa generations sekvensering (NGS; från 50 ml blod). Följande undergrupper kommer att isoleras (~50 000 celler vardera) och sedan kryokonserveras:

• CD4+ CD25+ regulatoriska T-celler (naiva, aktiverade och minne),
• CD4+ CD25- icke-regulatoriska T-celler (naiva/minne), och
• CD8+ cytotoxiska T-celler (naiva/minne).