Infuzja regulatorowych komórek T dawcy u pacjentów z przewlekłą chorobą przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD)

PLAN TRAKTOWANIA

1 Leki immunosupresyjne (DTI i grupy kontrolne)

• Rapa zostanie rozpoczęta w ciągu 2 tygodni po włączeniu. Rapa będzie podawany w dawce nasycającej 2-6 mg przez jeden dzień, a następnie około 1 mg dziennie, aby osiągnąć docelowe stężenie minimalne wynoszące od 5 do 10 ng/ml. Częstotliwość pomiarów poziomu minimalnego będzie wykonywana zgodnie z wyborem badacza;
• Rapa może zostać przerwana w przypadku ustąpienia przewlekłej GVHD ≥ 3 miesiące lub w przypadku niemożliwych do opanowania działań niepożądanych lub progresji przewlekłej GVHD.
• Odstawienie inhibitora kalcyneuryny w ciągu 2 tygodni po rozpoczęciu rapa. Żadnej innej modyfikacji leków immunosupresyjnych, aw szczególności zmniejszenia dawki sterydów (chyba, że ​​jest to konieczne ze względu na działania niepożądane).

• Ocena przewlekłej GVHD 60 dni po rozpoczęciu rapy. DTI nie będzie podawany pacjentom, u których wystąpiła progresja GVHD w dniu 60, ani pacjentom, którzy mają CR GVHD.

  2. Pobranie limfocytów dawcy (ramię DTI)

• Afereza dawcy zostanie przeprowadzona 60-90 dni po pierwszym dniu podania pacjentowi rapy. Nie będzie specjalnego przygotowania dawcy przed leukaferezą. Po pisemnej świadomej zgodzie dawca zostanie poddany leukaferezie w 1 dniu. Leukafereza zostanie przeprowadzona przy użyciu separatora komórek krwi z przepływem ciągłym i zgodnie z protokołem pobierania komórek jednojądrzastych. Objętość przetwarzanej krwi wyniesie 20 litrów. Antykoagulacja zostanie przeprowadzona roztworem ACD-A/heparyna.

  3. Selekcja Treg i infuzja (ramię DTI)

• Treg zostanie wyizolowany w LTCG CHU w Liège z produktu aferezy za pomocą systemu separacji CliniMACS (MiltenyiBiotec) zgodnie z dwuetapową procedurą (utrata CD8 i CD19, a następnie selekcja pozytywna CD25) zgodnie z zaleceniami producenta. Porcje (≈ 3 ml) produktu Treg zostaną zapisane do analiz.
• Treg będzie podawany we wlewie dożylnym 60-90 dni po pierwszym dniu podawania rapy i po odstawieniu inhibitora kalcyneuryny. W ramieniu kontrolnym nie zostanie przeprowadzone żadne DTI.
• Niska dawka Il-2 (1x106 IU/dzień) zostanie rozpoczęta w dniu DTI i będzie kontynuowana przez okres 2 miesięcy w celu ekspansji wleczonych Treg dawcy.

OBSERWACJA PACJENTÓW

1. Kontrola jakości produktów komórkowych 1.1 Krew obwodowa.

   W dniach pobrania limfocytów krwi obwodowej dawcy zostaną wykonane następujące badania laboratoryjne:

   • Liczba i różnicowanie komórek jądrzastych w automatycznym liczniku komórek;

   1.1.2 Produkt leukaferezy oraz początkowe, pośrednie i końcowe frakcje selekcji Treg.

   W zbiorze limfocytów oraz początkowych, pośrednich i końcowych frakcjach selekcji Treg zostaną wykonane następujące analizy laboratoryjne:

   • Zliczanie i różnicowanie komórek jądrzastych na automatycznym liczniku komórek;

   • Analiza FACS z określeniem % komórek (w całkowitej liczbie WBC) z markerami: CD20-FITC (Miltenyi #130-091-110), CD14-PE (Miltenyi #130-091-412), CD15-PE (Miltenyi #130) -091-390), CD56-PE (Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue (Miltenyi #130-092-497), CD8-APC (Miltenyi #130-091-083), PropidiumJodid (Miltenyi #130 -093-233), zestaw do wykrywania T reg (CD4/Cd25/CD127) (Miltenyi nr 130-096-076) i zestaw do wykrywania Treg nr 2 (CD4/CD25/Foxp3)-APC (Miltenyi nr 130-094-158 ).
   • Fenotyp Treg przy użyciu następujących markerów: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 i KI67.
   • Estymacja funkcji Treg42.
   • Status metylacji dinukleotydów CpG zlokalizowanych w konserwatywnym regionie intronu FoxP3
   • Żywotność komórek przez wykluczenie błękitu trypanu.
   • Badania mikrobiologiczne, w tym standardowa wirusologia i kultura bakteryjna.

   1.1.3 Kryteria wydania.

   Aby zwolnić, muszą być spełnione następujące kryteria:

   • ≥ 0,5 x106 komórek/kg biorcy;

   • ≥ 55% CD4+FoxP3+;
   • Żywotność > 80%;
   • <0,05 x 106 komórek CD45+CD8+/kg.
2. Toksyczność infuzji komórek Potencjalna toksyczność związana z infuzjami Treg będzie dokładnie monitorowana zgodnie ze standardowymi procedurami.

3. Dane kliniczne

   Pacjent będzie uważnie obserwowany i rejestrowane będą następujące parametry kliniczne:

   • Częstość występowania, czas i ciężkość ostrej GVHD po DTI, jej leczenie i wynik;

   • Ewolucja przewlekłej GVHD, jej leczenie i wynik. Dokładniej, przewlekła GVHD (w tym obecna terapia immunosupresyjna) zostanie oceniona dla każdego narządu zgodnie ze zmienionym konsensusem NIH:
   • Częstość występowania, czas trwania i nasilenie wtórnej cytopenii, jej leczenie i wynik;
   • Częstość występowania, czas i nasilenie zakażeń bakteryjnych, wirusowych, grzybiczych i pierwotniakowych
   • Czas trwania hospitalizacji, jeśli dotyczy;
   • Ewolucja pierwotnej choroby nowotworowej: odpowiedź, jeśli nie CR w momencie włączenia, nawrót, leczenie i wynik;
   • Wszelkie inne poważne powikłania związane z procedurą przeszczepu;
   • Śmierć i przetrwanie.
4. Dane immunologiczne (wykonywane w GIGA w ULG dla wszystkich oprócz analiz statusu metylacji dinukleotydów CpG zlokalizowanych w konserwatywnym regionie intronu 1 FoxP3, które będą wykonywane w UCL).

1) Odzyskiwanie odporności I (cytometria przepływowa). Zostaną przeprowadzone następujące analizy (zaczynając od 5 ml krwi).

2) Odzyskiwanie odporności II. Izolacja podzbiorów komórek T do analiz różnorodności repertuaru poprzez sekwencjonowanie nowej generacji (NGS; zaczynając od 50 ml krwi). Następujące podzbiory zostaną wyizolowane (każdy ~ 50 000 komórek), a następnie poddane kriokonserwacji:

• limfocyty T regulatorowe CD4+ CD25+ (naiwne, aktywowane i pamięciowe),
• CD4+ CD25- nieregulacyjne limfocyty T (naiwne/pamięć) i
• Cytotoksyczne limfocyty T CD8+ (naiwne/pamięć).