Donorregulerende T-celleinfusion hos patienter med kronisk graft-versus-host-sygdom (GVHD)

BEHANDLINGSPLAN

1 Immunsuppressive lægemidler (DTI og kontrolarme)

• Rapa vil blive startet inden for 2 uger efter inklusion. Rapa vil blive givet med 2-6 mg startdosis i en dag, efterfulgt af ca. 1 mg dagligt for at opnå et måltrough-niveau på 5 til 10 ng/ml. Hyppigheden af ​​bundniveaumålinger vil blive udført i henhold til investigatorens valg;
• Rapa kan seponeres i tilfælde af opløsning af kronisk GVHD ≥ 3 måneder eller i tilfælde af uoverskuelige bivirkninger eller progression af kronisk GVHD.
• Seponering af calcineurinhæmmer inden for 2 uger efter rapa-start. Ingen anden modifikation af immunsuppressive lægemidler og i særdeleshed intet fald i dosis af steroider (medmindre det er nødvendigt for bivirkninger).

• Evaluering af kronisk GVHD 60 dage efter rapa-initiering. DTI vil ikke blive givet til patienter, der havde progression af deres GVHD på dag 60, eller til dem, der er i CR af deres GVHD.

  2. Indsamling af donorlymfocytter (DTI-arm)

• Aferese af donoren vil blive udført 60-90 dage efter den første dag med rapa-administration til patienten. Der vil ikke være nogen særlig forberedelse af donoren før leukaferesen. Efter skriftligt informeret samtykke vil donoren gennemgå leukafereser på 1 dag. Leukaferese vil blive udført ved hjælp af en kontinuert flow-blodcelle-separator og efter en mononukleær celleopsamlingsprotokol. Mængden af ​​behandlet blod vil være 20 liter. Antikoagulation vil blive udført med ACD-A/heparinopløsningen.

  3. Tregselektion og infusion (DTI-arm)

• Treg vil blive isoleret ved LTCG af CHU i Liège fra afereseprodukt med CliniMACS-separationssystemet (MiltenyiBiotec) efter en to-trins procedure (CD8- og CD19-depletering efterfulgt af CD25-positiv udvælgelse) i henhold til producentens anbefaling. Alikvoter (≈ 3 mL) af Treg-produktet vil blive gemt til analyser.
• Treg vil blive infunderet i.v.60-90 dage efter den første dag med rapa-administration og efter seponering af calcineurinhæmmer. Der vil ikke blive udført DTI i kontrolarmen.
• Lavdosis Il-2 (1x106 IE/dag) vil blive startet på dagen for DTI og fortsættes i en periode på 2 måneder for at udvide infunderet donor Tregs.

PATIENTERNES OPFØLGNING

1. Kvalitetskontrol af celleprodukter 1.1 Perifert blod.

   Følgende laboratorieanalyser vil blive udført i donorens perifere blod på dagene for lymfocytopsamling:

   • Nucleated cell count og differential i en automatiseret celletæller;

   1.1.2 Leukafereseprodukt samt start-, mellem- og slutfraktioner af Treg-selektion.

   Følgende laboratorieanalyser vil blive udført i lymfocytsamlingen samt start-, mellem- og slutfraktioner af Treg-selektionen:

   • Nucleated cell count og differential på en automatiseret celletæller;

   • FACS-analyse med bestemmelse af %-cellerne (på total WBC) med markørerne: CD20-FITC (Miltenyi #130-091-110), CD14-PE (Miltenyi #130-091-412), CD15-PE (Miltenyi #130 -091-390), CD56-PE (Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue (Miltenyi #130-092-497), CD8-APC (Miltenyi #130-091-083), PropidiumIodid #1300ii -093-233), T reg Detection Kit (CD4/Cd25/CD127) (Miltenyi #130-096-076) og Treg Detection Kit#2 (CD4/CD25/Foxp3)-APC (Miltenyi #130-094-158 ).
   • Treg fænotype ved hjælp af følgende markører: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 og KI67.
   • Estimering af Treg funktion42.
   • Methyleringsstatus for CpG-dinukleotider placeret i en konserveret region af FoxP3-intron
   • Cellelevedygtighed ved trypanblåt udelukkelse.
   • Mikrobiologisk testning inklusive standard virologi og bakteriekultur.

   1.1.3 Frigivelseskriterier.

   Følgende kriterier skal være opfyldt for frigivelse:

   • ≥ 0,5 x 106 celler/kg modtager;

   • ≥ 55 % CD4+FoxP3+;
   • Levedygtighed > 80%;
   • <0,05 x 106 CD45+CD8+ celler/kg.
2. Toksiciteter ved celleinfusioner Potentielle toksiciteter forbundet med Treg-infusioner vil blive nøje overvåget i henhold til standardprocedurer.

3. Kliniske data

   Patienten vil blive omhyggeligt observeret, og følgende kliniske parametre vil blive registreret:

   • Incidens, timing og sværhedsgrad af akut GVHD efter DTI, dets behandling og udfald;

   • Udvikling af kronisk GVHD, dens behandling og resultat. Mere specifikt vil kronisk GVHD (herunder nuværende immunsuppressiv terapi) blive vurderet for hvert organ i henhold til den reviderede NIH-konsensus:
   • Forekomst, timing og sværhedsgrad af sekundær cytopeni, dens behandling og udfald;
   • Forekomst, timing og sværhedsgrad af bakterielle, virale, svampe- og protozoinfektioner
   • Varighed af hospitalsindlæggelse, hvis nogen;
   • Udvikling af den primære maligne sygdom: respons, hvis ikke i CR på tidspunktet for inklusion, tilbagefald, dets behandling og udfald;
   • Enhver anden alvorlig komplikation forbundet med transplantationsproceduren;
   • Død og overlevelse.
4. Immunologiske data (udført i GIGA ved ULG for alle undtagen analyser af methyleringsstatus af CpG-dinukleotider placeret i en konserveret region af FoxP3 intron 1, som vil blive udført ved UCL).

1) Immungenvinding I (flowcytometri). Følgende analyser vil blive udført (startende med 5 ml blod).

2) Immungendannelse II. Isolering af T-celleundersæt til analyser af repertoirediversitet gennem næste generations sekventering (NGS; startende fra 50 ml blod). Følgende undergrupper vil blive isoleret (~50.000 celler hver) og derefter kryokonserveret:

• CD4+ CD25+ regulatoriske T-celler (naive, aktiverede og hukommelse),
• CD4+ CD25- ikke-regulatoriske T-celler (naive/hukommelse), og
• CD8+ cytotoksiske T-celler (naive/hukommelse).