Donor regulerende T-cellen-infusie bij patiënten met chronische graft-versus-hostziekte (GVHD)

BEHANDELINGSPLAN

1 Immunosuppressiva (DTI en controle-armen)

• Rapa wordt binnen 2 weken na opname gestart. Rapa zal worden gegeven in een oplaaddosis van 2-6 mg gedurende één dag, gevolgd door ongeveer 1 mg per dag om een ​​beoogde dalspiegel van 5 tot 10 ng/ml te bereiken. De frequentie van dalmetingen zal worden uitgevoerd volgens de keuze van de onderzoeker;
• Rapa kan worden stopgezet in geval van herstel van chronische GVHD ≥ 3 maanden of in geval van onbeheersbare bijwerkingen of progressie van chronische GVHD.
• Stopzetting van de calcineurineremmer binnen 2 weken na de start van rapa. Geen andere wijziging van immunosuppressieve geneesmiddelen en in het bijzonder geen verlaging van de dosis steroïden (tenzij noodzakelijk voor bijwerkingen).

• Evaluatie van chronische GVHD 60 dagen na initiatie van rapa. DTI zal niet worden gegeven aan patiënten die op dag 60 progressie van hun GVHD hadden, noch aan degenen die CR van hun GVHD hebben.

  2. Verzameling van donorlymfocyten (DTI-arm)

• Aferese van de donor zal 60-90 dagen na de eerste dag van rapa-toediening aan de patiënt worden uitgevoerd. Voorafgaand aan leukaferese zal de donor niet specifiek worden voorbereid. Na schriftelijke geïnformeerde toestemming ondergaat de donor op 1 dag een leukaferese. Leukaferese zal worden uitgevoerd met behulp van een bloedcelscheider met continue stroom en volgens een protocol voor het verzamelen van mononucleaire cellen. Het verwerkte volume bloed zal 20 liter zijn. Anticoagulatie zal worden uitgevoerd met de ACD-A / heparine-oplossing.

  3. Tregselectie en infusie (DTI-arm)

• Treg zal worden geïsoleerd op de LTCG van de CHU van Luik uit afereseproduct met het CliniMACS-scheidingssysteem (MiltenyiBiotec) volgens een procedure in twee stappen (CD8- en CD19-depletie gevolgd door CD25-positieve selectie) volgens de aanbeveling van de fabrikant. Aliquots (≈ 3 ml) van het Treg-product worden bewaard voor analyses.
• Treg zal intraveneus worden toegediend 60-90 dagen na de eerste dag van rapa-toediening en na stopzetting van de calcineurineremmer. Er wordt geen DTI uitgevoerd in de controle-arm.
• Een lage dosis Il-2 (1x106 IE/dag) wordt gestart op de dag van DTI en wordt gedurende een periode van 2 maanden voortgezet om geïnfundeerde donor-Tregs uit te breiden.

FOLLOW-UP VAN PATIËNTEN

1. Kwaliteitscontroles van celproducten 1.1 Perifeer bloed.

   De volgende laboratoriumanalyses worden uitgevoerd in het perifere bloed van de donor op de dagen van de lymfocytenverzameling:

   • Genucleëerde celtelling en differentieel in een geautomatiseerde celteller;

   1.1.2 Leukaferese-product evenals start-, tussen- en eindfracties van Treg-selectie.

   De volgende laboratoriumanalyses worden uitgevoerd in de lymfocytencollectie, evenals start-, tussen- en eindfracties van de Treg-selectie:

   • Kernceltelling en differentieel op een geautomatiseerde celteller;

   • FACS-analyse met bepaling van het % cellen (op totaal WBC) met de markers: CD20-FITC (Miltenyi #130-091-110), CD14-PE (Miltenyi #130-091-412), CD15-PE (Miltenyi #130 -091-390), CD56-PE (Miltenyi #130-090-910), CD45-VioBlue (Miltenyi #130-092-497), CD8-APC (Miltenyi #130-091-083), PropidiumIodid (Miltenyi #130 -093-233), Treg-detectiekit (CD4/Cd25/CD127) (Miltenyi #130-096-076) en Treg-detectiekit#2 (CD4/CD25/Foxp3)-APC (Miltenyi #130-094-158 ).
   • Treg-fenotype met behulp van de volgende markers: CD127, CD45RA, CCR4, CCR7 en KI67.
   • Schatting van de Treg-functie42.
   • Methyleringsstatus van CpG-dinucleotiden gelokaliseerd in een geconserveerd gebied van FoxP3-intron
   • Cellevensvatbaarheid door uitsluiting van trypaanblauw.
   • Microbiologische testen inclusief standaard virologie en bacteriekweek.

   1.1.3 Vrijgavecriteria.

   Voor vrijgave moet aan de volgende criteria worden voldaan:

   • ≥ 0,5 x106 cellen/kg ontvanger;

   • ≥ 55% CD4+FoxP3+;
   • Levensvatbaarheid > 80%;
   • <0,05 x 106 CD45+CD8+ cellen/kg.
2. Toxiciteit van celinfusies Potentiële toxiciteit geassocieerd met Treg-infusies zal zorgvuldig worden gecontroleerd volgens standaardprocedures.

3. Klinische gegevens

   De patiënt zal zorgvuldig worden geobserveerd en de volgende klinische parameters zullen worden geregistreerd:

   • Incidentie, timing en ernst van acute GVHD na DTI, de behandeling en uitkomst;

   • Evolutie van chronische GVHD, de behandeling en het resultaat. Meer specifiek zal chronische GVHD (inclusief de huidige immunosuppressieve therapie) voor elk orgaan worden beoordeeld volgens de herziene NIH-consensus:
   • Incidentie, timing en ernst van secundaire cytopenie, de behandeling en uitkomst;
   • Incidentie, timing en ernst van bacteriële, virale, schimmel- en protozoaire infecties
   • Duur van de ziekenhuisopname indien van toepassing;
   • Evolutie van de primaire kwaadaardige ziekte: respons indien niet in CR op het moment van opname, terugval, de behandeling en uitkomst;
   • Elke andere ernstige complicatie die verband houdt met de transplantatieprocedure;
   • Dood en overleven.
4. Immunologische gegevens (uitgevoerd in de GIGA aan de ULG voor alles behalve de analyses van de methyleringsstatus van CpG-dinucleotiden in een geconserveerd gebied van FoxP3-intron 1 die zullen worden uitgevoerd aan de UCL).

1) Immuunherstel I (flowcytometrie). De volgende analyses worden uitgevoerd (te beginnen met 5 ml bloed).

2) Immuunherstel II. Isolatie van T-celsubsets voor analyse van repertoirediversiteit door sequencing van de volgende generatie (NGS; vanaf 50 ml bloed). De volgende subsets worden geïsoleerd (elk ongeveer 50.000 cellen) en vervolgens gecryopreserveerd:

• CD4+ CD25+ regulerende T-cellen (naïef, geactiveerd en geheugen),
• CD4+ CD25- niet-regulerende T-cellen (naïef/geheugen), en
• CD8+ cytotoxische T-cellen (naïef/geheugen).