Genotoksisitetsvurdering av tannimplantater i gingivalepitelceller

Pasienter er delt inn i to grupper avhengig av tannimplantatsystemet som brukes i behandlingen. Ankylos tannimplantater (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA) brukes i den første pasientgruppen og Dentium SuperLine (Dentium Co., Seoul, Korea) i den andre gruppen.

Implantatene plasseres i henhold til hver implantatsystemprodusents instruksjoner og behandlingen ble utført i henhold til pasientens standarder og indikasjoner. Kirurgiske prosedyrer på alle pasienter utføres av samme operatør med samme kirurgiske tilnærming, protokoll og instrumentering.

Operasjonene utføres under lokalbedøvelse og systemiske antibiotika ble gitt etter standard prosedyre. For å sikre post-kirurgisk munnhygiene, anbefales pasienter å skylle munnhulen med klorheksidin frem til dagen for fjerning av suturene. Suturene fjernes 10 dager etter implantasjon. Implantatene helbreder ved å være nedsenket i 12 uker basert på kirurgens kliniske vurdering, indikasjoner gitt og pasientenes behov og preferanser. Etter tilheling plasseres gingivadannere.

Prøvetaking og en mikronukleusanalyse i gingivalepitelceller For å redusere individuelle variasjoner, observeres pasienter i lengderetningen og hvert individ blir tjent som sin egen kontroll. Prøver av gingivalepitelceller samles inn fra hver deltakers implementeringssted ved bruk av vattpinneteknikken på tre forskjellige tidspunkter: en kontrollprøve tas rett før plassering av tannimplantatet (T0); den andre vattpinnen tas 90 dager etter implantasjon, dvs. umiddelbart før plassering av gingivadanneren (T1); og den tredje vattpinne tas 21 dager etter plassering av gingivadanneren (T2).

En time før prøvetakingen avstår deltakerne fra å innta mat og drikke. Etter skylling av munnhulen 3 ganger med lunkent vann for å fjerne eksfolierede celler, tas en T0 vattpinne ved å forsiktig børste gingiva rundt stedet indikert for implantatplassering og senere T1 og T2 rundt implantatet med en cytobørste (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Tyskland). Prøvene påføres deretter kodede laboratorieglass.

Cellene påført mikroskopiske objektglass får lufttørke og fikseres i metanol (80 % v/v) ved 4°C i 20 minutter. Farging utføres med 5 % Giemsa-løsning i 10 minutter. Etterpå skylles objektglassene med vanndestillat og lufttørkes. Objektglassene undersøkes under Olympus CX40 lysmikroskop (Olympus. Tokyo. Japan) med 400× forstørrelse, og hver mikrokjerne og andre kjernefysiske anomalier blir i tillegg verifisert under 1000× forstørrelse. To gjentatte objektglass fremstilles for hvert individ og 1000 epitelceller per preparat ble analysert for hver prøvetakingstid.

Kjernefysiske anomalier, som mikronukleus, karyorrhexis (kjernefysisk desintegrasjon som indikerer apoptose), karyolyse (oppløsning av kjernen som for det meste indikerer nekrose og apoptose), pyknose (kjernekrymping på grunn av apoptose), kondensert kromatinkompleks med proteiner (DNA-komplekser) (forløpere til mikrokjerner, eller høy tetthet av DNA-reparasjonskomplekser) og knuste egg (kjerner som ser ut til å være knipete, binucleated celler (indikerer nedsatt hastighet av celleproliferasjon)) er estimert og kvalifisert.