Fogimplantátumok genotoxicitásának értékelése ínyhámsejtekben

A betegeket két csoportra osztják a terápiában alkalmazott fogimplantációs rendszertől függően. Az első csoportban az Ankylos fogászati ​​implantátumokat (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA), a második csoportban pedig a Dentium SuperLine-t (Dentium Co., Szöul, Korea) használják.

Az implantátumok behelyezése az egyes implantátumrendszerek gyártóinak előírásai szerint történik, és a kezelést a páciens szabványai és indikációi szerint végeztük. A sebészeti beavatkozásokat minden betegen ugyanaz a kezelő végzi, ugyanazzal a műtéti megközelítéssel, protokollal és műszerekkel.

A műtéteket helyi érzéstelenítésben végezzük, és a szokásos eljárás szerint szisztémás antibiotikumokat adunk. A műtét utáni szájhigiénia érdekében a betegeknek azt tanácsoljuk, hogy a varratok eltávolításának napjáig klórhexidinnel öblítsék ki a szájüreget. A varratokat a beültetés után 10 nappal eltávolítják. Az implantátumok a sebész klinikai megítélése, javallatai, valamint a betegek szükségletei és preferenciái alapján 12 hétig alámerítve gyógyulnak. A gyógyulás után ínyképzőket helyeznek el.

Mintagyűjtés és mikronucleus assay ínyhámsejtekben Az egyéni eltérések csökkentése érdekében a betegeket longitudinálisan figyelik meg, és minden alany saját kontrolljaként szolgál. A fogíny hámsejtjeinek mintáit az egyes résztvevők beültetési helyéről gyűjtik a tampont technikával három különböző időpontban: egy kontroll tampont közvetlenül a fogimplantátum behelyezése előtt vesznek (T0); a második kenetet a beültetés után 90 nappal veszik, vagyis közvetlenül a fogínyképző (T1) elhelyezése előtt; a harmadik kenetet pedig 21 nappal a fogínyképző (T2) elhelyezése után veszik.

Egy órával a mintavétel előtt a résztvevők tartózkodnak mindenféle étel és ital fogyasztásától. A szájüreg háromszori langyos vízzel történő öblítése után, hogy eltávolítsuk a hámló sejteket, egy T0 tampont veszünk úgy, hogy a fogínyet az implantátum behelyezésére kijelölt hely körül, majd később az implantátum körül T1 és T2 citokefével (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Németország). A mintákat ezt követően kódolt laboratóriumi üveglemezekre visszük fel.

A mikroszkópos tárgylemezekre felvitt sejteket hagyjuk levegőn megszáradni, és metanolban (80% v/v) rögzítjük 4 °C-on 20 percig. A festést 5%-os Giemsa oldattal végezzük 10 percig. Ezt követően a tárgylemezeket vízpárlattal öblítik, és levegőn szárítják. A tárgylemezeket Olympus CX40 fénymikroszkóp alatt (Olympus. Tokió. Japán) 400-szoros nagyítással, és az egyes mikronukleuszokat és egyéb nukleáris anomáliákat 1000-szeres nagyítás mellett is ellenőrizzük. Minden alanyhoz két párhuzamos tárgylemezt készítünk, és preparátumonként 1000 hámsejtet elemeztünk minden mintavételi időpontban.

Nukleáris anomáliák, mint a mikronukleusz, kariorrhexis (a mag szétesése, ami apoptózist jelez), kariolízis (a sejtmag feloldódása, amely többnyire nekrózist és apoptózist jelez), piknózis (a nukleáris zsugorodás az apoptózis miatt), kondenzált kromatin (nukleáris apoptózissal komplexált DNS) (mikronukleuszok prekurzorai vagy nagy sűrűségű DNS-javító komplexek) és törött peték (a sejtmagok, amelyek összeszorultnak tűnnek, kétmagvú sejtek (ami a sejtproliferáció károsodott sebességét jelzi)) megbecsülik és minősítik.