Genotoxiciteitsbeoordeling van tandimplantaten in tandvleesepitheelcellen

Patiënten worden verdeeld in twee groepen, afhankelijk van het tandheelkundig implantaatsysteem dat bij de therapie wordt gebruikt. Tandimplantaten van Ankylos (Dentsplay Sirona, Charlotte, VS) worden gebruikt bij de eerste groep patiënten en Dentium SuperLine (Dentium Co., Seoul, Korea) bij de tweede groep.

De implantaten zijn geplaatst in overeenstemming met de instructies van de fabrikant van elk implantaatsysteem en de behandeling is uitgevoerd volgens de normen en indicaties van de patiënt. Chirurgische ingrepen bij alle patiënten worden uitgevoerd door dezelfde operator met dezelfde chirurgische aanpak, hetzelfde protocol en dezelfde instrumenten.

De operaties worden uitgevoerd onder plaatselijke verdoving en systemische antibiotica werden gegeven volgens de standaardprocedure. Om postoperatieve mondhygiëne te garanderen, wordt patiënten geadviseerd de mondholte te spoelen met chloorhexidine tot de dag waarop de hechtingen worden verwijderd. De hechtingen worden 10 dagen na implantatie verwijderd. De implantaten genezen door ze 12 weken onder water te houden op basis van het klinische oordeel van de chirurg, de gegeven indicaties en de behoefte en voorkeur van de patiënten. Na genezing worden gingivavormers geplaatst.

Monsterverzameling en een micronucleus-assay in gingivale epitheelcellen Om individuele variaties te verminderen, worden patiënten longitudinaal geobserveerd en wordt elke proefpersoon als hun eigen controle gediend. Monsters van gingivale epitheelcellen worden verzameld op de implementatieplaats van elke deelnemer met behulp van de uitstrijktechniek op drie verschillende tijdstippen: een controleuitstrijkje wordt genomen vlak voor de plaatsing van het tandheelkundig implantaat (T0); het tweede uitstrijkje wordt 90 dagen na implantatie genomen, d.w.z. onmiddellijk vóór plaatsing van de gingivavormer (T1); en het derde uitstrijkje wordt 21 dagen na plaatsing van de gingivavormer (T2) genomen.

Een uur voor de staalname onthouden de deelnemers zich van eten en drinken. Na 3 keer spoelen van de mondholte met lauw water om geëxfolieerde cellen te verwijderen, wordt een T0-uitstrijkje genomen door de gingiva voorzichtig te borstelen rond de plaats die is aangegeven voor plaatsing van het implantaat en later T1 en T2 rond het implantaat met een cytobrush (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Duitsland). De monsters worden vervolgens aangebracht op gecodeerde laboratoriumglasplaatjes.

De cellen die op objectglaasjes zijn aangebracht, worden aan de lucht gedroogd en gedurende 20 minuten gefixeerd in methanol (80% v/v) bij 4°C. Kleuring wordt uitgevoerd met 5% Giemsa-oplossing gedurende 10 minuten. Daarna worden de glaasjes gespoeld met aqua-destillaat en aan de lucht gedroogd. De objectglaasjes worden onderzocht onder de Olympus CX40 lichtmicroscoop (Olympus. Tokio. Japan) met een vergroting van 400×, en elke micronucleus en andere nucleaire anomalieën worden bovendien geverifieerd onder een vergroting van 1000×. Voor elke proefpersoon worden twee replicaatglaasjes gemaakt en voor elk bemonsteringstijdstip werden 1000 epitheelcellen per preparaat geanalyseerd.

Nucleaire anomalieën, zoals micronucleus, karyorrhexis (nucleaire desintegratie die apoptose aangeeft), karyolyse (ontbinding van de kern die meestal wijst op necrose en apoptose), pyknosis (nucleaire krimp als gevolg van apoptose), gecondenseerde chromatine (DNA gecomplexeerd met eiwitten en apoptose), nucleaire knoppen (voorlopers van micronuclei, of hoge dichtheid van DNA-reparatiecomplexen) en gebroken eieren (kernen die cinched, tweekernige cellen lijken (wat duidt op een verminderde snelheid van celproliferatie)) worden geschat en gekwalificeerd.